【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品保鲜剂制备，具体涉及一种副干酪乳杆菌gy1及其筛选方法与应用。
技术介绍
1、奶制品能为人体提供丰富的蛋白质、碳水化合物以及维生素等营养物质而备受青睐。然而，由于奶制品营养丰富，使其成为大量细菌的潜在宿主。其中，金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)则是一种奶制品中常见的典型细菌，是一种革兰氏阳性菌，兼性厌氧菌，属于葡萄球菌属，形状呈圆形或卵圆形，其对干燥、热力、高盐和抗生素等具有较强的耐受力，且能产生多种毒素，如肠毒素、溶血毒素和表皮剥脱毒素等，其中肠毒素是引起食物中毒的主要原因，由于高温处理后肠毒素依旧会残留于奶制品中，误食后会导致人体出现多种疾病。另外金黄色葡萄球菌还可引起多种皮肤感染，如疖子、痈和脓疱疮等，严重危害人体健康。误食金黄色葡萄球菌感染的食品后，容易导致人体出现恶心、呕吐、腹痛和腹泻等症状(molecularmedicalmicrobiology,2,2002,839-888)。
2、近年来由于抗生素等产品的滥用，金黄色葡萄球菌的耐药性问题日益突出，因此，一种对金黄色葡萄球菌具有优秀抑制性能的抗菌剂产品的出现将有助于缓解当前这一现象，对食品、医疗等领域具有重要的研究意义。
3、传统的食品保鲜很大程度上依赖于化学防腐剂来延长保质期(trends infoodscience&technology,129,2022,421-439),微生物生长是导致食品腐败的主要原因，而化学防腐剂可在一定程度上通过阻滞微生物生长而延长保质期。然而，化学防腐剂不仅危
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种副干酪乳杆菌gy1及其筛选方法与应用，通过对桑树土壤进行筛选，以对金黄色葡萄球菌的抑制性能为指标所筛选得到的菌株，得到副干酪乳杆菌gy1，再通过对发酵过程中碳源、氮源、ph、温度以及碳源浓度进行优化后，副干酪乳杆菌gy1对金黄色葡萄球菌的抑菌率可高达95％；是一株具有益生潜能的菌株，具有良好的应用前景。
2、为解决现有技术问题，本专利技术采取的技术方案为：
3、一种副干酪乳杆菌gy1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌gy1分离自桑树土壤，于2024年06月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.30931，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为副干酪乳杆菌 lactobacillus paracasei，所述副干酪乳杆菌gy1的16s rdna测序的核酸序列如seq idno.1所示。
4、作为改进的是，所述副干酪乳杆菌gy1的菌落呈白色、湿润、圆形，直径0.03～0.1mm，细胞形态为短杆状，长为3～4.5μm，宽0.3～0.5μm，末端圆滑，属革兰氏阳性细菌，不产生物胺，不产dnase，自聚集性强，在低于0.4％的胆盐环境、低于4％的渗透压下均具有耐受能力，在模拟胃液或模拟肠液中生长，耐胃酸。
5、上述副干酪乳杆菌gy1分离自桑树土壤，采用梯度稀释分离法以及牛津杯法，筛选方法包括以下步骤：
6、步骤1，培养基配制
7、mrs液体培养基，lb液体培养基；
8、步骤2，取桑树土壤分别接适量于mrs液体培养基和lb液体培养基中，37℃，220rpm，培养72h，离心，取上清，以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用牛津杯法进行初筛，再用含40％的甘油将具有抑菌圈的菌株按体积比1:1保存于-80℃冰箱；
9、步骤3，将菌种从-80℃冰箱中取出，并在mrs和lb固体平板上梯度稀释后涂布活化，用接种环挑取单菌落分别接入mrs液体培养基和lb液体培养基中，37℃，220rpm，培养3天，离心，取上清，以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用牛津杯法进行复筛；
10、步骤4，同步骤3，将-80℃的菌种梯度稀释涂布于mrs和lb固体平板上进行进一步分离纯化，确认为纯菌后，进行鉴定。
11、作为改进的是，步骤2中离心的速度为5000～12000rpm，离心2～10min；牛津杯法的具体操作为：取10～100μl的上清液，将金黄色葡萄球菌梯度稀释后，取50～100μl涂布于mrs固体培养基，即可。
12、一种副干酪乳杆菌gy1发酵液，利用上述的一种副干酪乳杆菌gy1进行发酵培养，分离得上清液。
13、作为改进的是，所述发酵培养的条件为：碳源为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、β-环糊精、淀粉、木聚糖、木糖、乳糖、壳聚糖、海藻糖和阿拉伯糖，氮源为酵母粉、大豆蛋白、小麦蛋白、蛋白胨、蚕蛹粉和乳清蛋白，ph为3～11，温度25～40℃，碳源浓度为20～120g/l。
14、进一步改进的是，当发酵培养的条件为：碳源为蔗糖，氮源为酵母粉，ph为7，温度37℃，碳源浓度为40g/l时，所得上清液对gy1金黄色葡萄球菌抑制活性达95％及以上。
15、上述副干酪乳杆菌gy1和/或上述一种副干酪乳杆菌gy1发酵液在抑制金黄色葡萄球菌生长上的应用。
16、一种食品保鲜剂，包括上述的副干酪乳杆菌gy1和/或上述一种副干酪乳杆菌gy1发酵液。
17、上述食品保鲜剂在奶制品或肉制品上的应用。
18、有益效果
19、与现有技术相比，本专利技术一种副干酪乳杆菌gy1及其筛选方法与应用，通过对桑树土壤进行筛选，以对金黄色葡萄球菌的抑制性能为指标所筛选得到的菌株，得到副干酪乳杆菌gy1，其保藏编号为cgmcc no.30931，再通过对发酵过程中碳源、氮源、ph、温度以及碳源浓度进行优化后，副干酪乳杆菌gy1对金黄色葡萄球菌的抑菌率可高达95％；且通过益生实验，确定了副干酪乳杆菌gy1是一株具有益生潜能的菌株，具有良好的应用前景。
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1.一种副干酪乳杆菌GY1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌GY1分离自桑树土壤，于2024年06月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.30931，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei，所述副干酪乳杆菌GY1的16S rDNA测序的核酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌GY1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌GY1的菌落呈白色、湿润、圆形，直径0.03~0.1 mm，细胞形态为短杆状，长为3~4.5 μm，宽0.3~0.5 μm，末端圆滑，属革兰氏阳性细菌，不产生物胺，不产DNAse，自聚集性强，在低于0.4%的胆盐环境、低于4%的渗透压下均具有耐受能力，在模拟胃液或模拟肠液中生长，耐胃酸。
3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌GY1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌GY1分离自桑树土壤，采用梯度稀释分离法以及牛津杯法，筛选方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的副干酪乳杆菌GY1，其特征在于，步骤
5.一种副干酪乳杆菌GY1发酵液，其特征在于，利用权利要求1所述的一种副干酪乳杆菌GY1进行发酵培养，分离得上清液。
6.根据权利要求5所述的一种副干酪乳杆菌GY1发酵液，其特征在于，所述发酵培养的条件为：碳源为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、β-环糊精、淀粉、木聚糖、木糖、乳糖、壳聚糖、海藻糖和阿拉伯糖，氮源为酵母粉、大豆蛋白、小麦蛋白、蛋白胨、蚕蛹粉和乳清蛋白，pH为3~11，温度25~40℃，碳源浓度为20~120 g/L。
7.根据权利要求6所述的一种副干酪乳杆菌GY1发酵液，其特征在于，当发酵培养的条件为：碳源为蔗糖，氮源为酵母粉，pH为7，温度37℃，碳源浓度为40 g/L时，所得上清液对GY1金黄色葡萄球菌抑制活性达95%及以上。
8.基于权利要求1-4所述的副干酪乳杆菌GY1和/或权利要求5-7所述的一种副干酪乳杆菌GY1发酵液在抑制金黄色葡萄球菌生长上的应用。
9.一种食品保鲜剂，其特征在于，包括权利要求1-4所述的副干酪乳杆菌GY1和/或权利要求5-7所述的一种副干酪乳杆菌GY1发酵液。
10.基于权利要求9所述的食品保鲜剂在奶制品或肉制品上的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种副干酪乳杆菌gy1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌gy1分离自桑树土壤，于2024年06月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.30931，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为副干酪乳杆菌lactobacillus paracasei，所述副干酪乳杆菌gy1的16s rdna测序的核酸序列如seq idno.1所示。
2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌gy1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌gy1的菌落呈白色、湿润、圆形，直径0.03~0.1 mm，细胞形态为短杆状，长为3~4.5 μm，宽0.3~0.5 μm，末端圆滑，属革兰氏阳性细菌，不产生物胺，不产dnase，自聚集性强，在低于0.4%的胆盐环境、低于4%的渗透压下均具有耐受能力，在模拟胃液或模拟肠液中生长，耐胃酸。
3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌gy1，其特征在于，所述副干酪乳杆菌gy1分离自桑树土壤，采用梯度稀释分离法以及牛津杯法，筛选方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的副干酪乳杆菌gy1，其特征在于，步骤2中离心的速度为5000~12000 rpm，离心2~10 min；牛津杯法的具体操作为：取10~100 μl的上清液，将金黄色葡...
【专利技术属性】
技术研发人员：宫璐婵，雷正艳，沈凯慧，李婷婷，罗冰冰，赵耀，凌旭圆，王俊，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：
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