【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于功能基因，具体涉及一种检测基因在代谢过程中发挥功能的方法。
技术介绍
1、骨骼肌的生长发育对家畜肉品质和产肉量至关重要。肌肉生长抑制素(myostatin,mstn)基因是一种转化生长因子β家族成员，通常对骨骼肌的生长产生负面影响。与野生型动物相比，敲除mstn显著增加了骨骼肌发育并降低了肌内脂肪含量。mstn长期以来一直被认为是肌肉质量的关键调节因子，包括绵羊、狗和牛在内的多个物种中，mstn缺乏都显示出肌纤维数量增加和肌纤维大小增加，从而导致肌肉肥大。
2、亚油酸(linoleic acid,la)是一种omega-6脂肪酸，同时也是n-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,pufa)的前体。la是人和动物营养中必需的脂肪酸，可作为能量来源。但是mstn基因对于la代谢流中的作用，目前并不清楚，因此需要一种其他的方法检测mstn基因的功能。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种检测基因在代谢过程中发挥功能的方法，可快速发现基因在不同代谢中的作用。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供了基因编辑结合非靶向代谢流检测在检测代谢过程中基因功能的应用。
3、在本专利技术一个具体实施方式中，所述基因编辑包括基因敲除。
4、本专利技术更进一步的目的在于提供一种检测基因在代谢过程中发挥作用的方法，包括构建敲除所述基因的细胞系，对所述细胞系进行非靶向代谢流检测，评估所述基因在细胞代谢活动
5、在本专利技术一个具体实施方式中，所述基因包括肌肉生长抑制素基因。
6、在本专利技术一个具体实施方式中，所述细胞系的基础细胞包括骨骼肌纤维或骨骼肌成纤维细胞。
7、在本专利技术一个具体实施方式中，以所述骨骼肌成纤维细胞作为基础细胞时，利用核苷酸序列如seq id no.1和seq id no.2所示的sgrna完成基因敲除。
8、在本专利技术一个具体实施方式中，所述基因敲除时，包括以px458载体作为基因敲除载体的骨架载体。
9、在本专利技术一个具体实施方式中，所述非靶向代谢流检测包括检测亚油酸代谢。
10、在本专利技术一个具体实施方式中，所述亚油酸代谢的检测包括采用orbitrapexploris 120质谱仪进行一级和二级质谱数据采集。
11、在本专利技术一个具体实施方式中，所述亚油酸代谢的检测包括针对极性代谢物和非极性代谢物的检测；
12、针对极性代谢物，包括使用vanquish超高效液相色谱仪，通过waters acquityuplc beh amide液相色谱柱对目标化合物进行色谱分离；液相色谱a相为水相，含25mmol/l乙酸铵和25mmol/l氨水，b相为乙腈；
13、针对非极性代谢物，使用vanquish超高效液相色谱仪，通过phenomenex kinetexc18液相色谱柱对目标化合物进行色谱分离；液相色谱a相为水相，含体积百分含量为0.01％的乙酸，b相为异丙醇和乙腈按照1:1的体积比制成的混合液。
14、有益效果：本专利技术提供了基因编辑结合非靶向代谢流检测在检测代谢过程中基因功能的应用，尤其提供了一种检测基因在代谢过程中发挥作用的方法，通过构建基因编辑细胞系，从而对基因编辑细胞系进行目标代谢的非靶向代谢流检测，从而确定该基因在目标代谢中所发挥的作用，如主要活性途径、各个途径的相对贡献和分布变化特点。
15、本专利技术一个实施例完成了基于mstn-/-的c2c12细胞中la代谢流检测，成功揭示了mstn-/-后c2c12细胞中la的代谢变化，mstn基因敲除后la向不饱和脂肪酸的代谢比例降低，并分析出差异代谢物相关的代谢通路，为深入解析mstn基因参与的脂质代谢调控机制提供理论参考，有助于推进mstn基因动物育种上的应用。
16、本专利技术一个实施例中完成了mstn基因敲除小鼠骨骼肌纤维分离，并对分离的骨骼肌纤维进行亚油酸代谢流检测，揭示了mstn基因敲除后小鼠骨骼肌中la的代谢变化，mstn基因敲除后la向dha方向的代谢增加，为深入解析mstn基因参与的骨骼肌脂质代谢调控机制提供理论参考，有助于推进mstn基因动物育种上的应用。
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1.基因编辑结合非靶向代谢流检测在检测代谢过程中基因功能的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述基因编辑包括基因敲除。
3.一种检测基因在代谢过程中发挥作用的方法，其特征在于，包括构建敲除所述基因的细胞系，对所述细胞系进行非靶向代谢流检测，评估所述基因在细胞代谢活动中的主要活性途径、各个途径的相对贡献和分布变化特点。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述基因包括肌肉生长抑制素基因。
5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞系的基础细胞包括骨骼肌纤维或骨骼肌成纤维细胞。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，以所述骨骼肌成纤维细胞作为基础细胞时，利用核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的sgRNA完成基因敲除。
7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述基因敲除时，包括以pX458载体作为基因敲除载体的骨架载体。
8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述非靶向代谢流检测包括检测亚油酸代谢。
9.根据权利要求8所述方法，其特征
10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述亚油酸代谢的检测包括针对极性代谢物和非极性代谢物的检测；
...【技术特征摘要】
1.基因编辑结合非靶向代谢流检测在检测代谢过程中基因功能的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述基因编辑包括基因敲除。
3.一种检测基因在代谢过程中发挥作用的方法，其特征在于，包括构建敲除所述基因的细胞系，对所述细胞系进行非靶向代谢流检测，评估所述基因在细胞代谢活动中的主要活性途径、各个途径的相对贡献和分布变化特点。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述基因包括肌肉生长抑制素基因。
5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞系的基础细胞包括骨骼肌纤维或骨骼肌成纤维细胞。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，以所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李奎，黄雷，卫孟瑶，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业基因组研究所，
类型：发明
国别省市：
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