【技术实现步骤摘要】
本公开文本提供了用于将用于在细胞疗法中使用的t细胞如cd4+t细胞和/或cd8+t细胞基因工程化的方法。在一些方面，所提供的方法包括用于以下的一个或多个步骤：如以1:1的比率合并富集的cd4+和cd8+细胞，并且然后在刺激条件下孵育所述细胞，通过转导或转染将重组多肽引入所述细胞，和/或在促进增殖和/或扩增的条件下培育所述细胞。在一些方面，所提供的方法是高度成功地生产基因工程化t细胞的有效可靠手段。
技术介绍
1、多种细胞治疗方法可用于治疗疾病和病症。细胞治疗方法包括涉及用重组受体(如嵌合抗原受体)进行基因工程化的免疫细胞(如t细胞)的方法。需要用于制造此类细胞疗法和/或将其工程化的改进方法，包括以提供更有效的过程和/或改进的细胞组合物产品。
技术实现思路
1、在一些实施方案中，本文提供了用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括：(a)以在2:1与1:2之间的cd4+与cd8+t细胞的比率组合cd4+t细胞组合物和cd8+t细胞组合物，从而产生输入组合物；(b)在刺激条件下孵育输入组合物，从而产生刺激组合物；其中所述刺激条件包括刺激试剂的存在，所述刺激试剂能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域；并且其中所述输入组合物包含浓度小于5x 106个细胞/ml的至少100x 106个总cd4+和cd8+t细胞。
2、在一些实施方案中，本文提供了一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包
3、在一些实施方案中，本文提供了用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括将重组受体引入t细胞组合物的细胞中，所述t细胞组合物包含至少或至少约1x 106个活细胞/ml的浓度，其中所述t细胞组合物中的细胞的至少80％、至少85％、至少90％或至少95％是cd4+t细胞或cd8+t细胞。
4、在某些实施方案中，孵育是在无血清培养基中进行。在某些实施方案中，输入组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的为cd4+t细胞或cd8+t细胞的细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含在100x 106个与500x 106个之间的总cd4+和cd8+t细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含为或约300x 106个总cd4+和cd8+t细胞。在某些实施方案中，总cd4+和cd8+t细胞是活细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含在1x 106个细胞/ml与5x 106个细胞/ml之间的浓度。在某些实施方案中，输入组合物包含为或约3x 106个细胞/ml的浓度。在某些实施方案中，输入组合物包含在1.5:1与1:1.5之间的比率的cd4+与cd8+细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含在1.2:1与0.8:1之间的比率的cd4+与cd8+细胞。
5、在某些实施方案中，输入组合物包含为或约1:1的比率的cd4+与cd8+细胞。在某些实施方案中，输入组合物包含呈cd45ra和ccr7表面阳性的cd4+和cd8+。
6、在某些实施方案中，呈cd45ra和ccr7表面阳性的cd4+细胞与呈cd45ra和ccr7表面阳性的cd8+细胞的比率为或为约1.1:1。
7、在某些实施方案中，输入组合物包含呈cd27和ccr7表面阳性的cd4+和cd8+细胞。
8、在某些实施方案中，呈cd27和ccr7表面阳性的cd4+细胞与呈cd27和ccr7表面阳性的cd8+细胞的比率为或为约1.69:1。
9、在某些实施方案中，输入组合物包含任选地在2.0:1至1.5:1之间的比率的呈ccr7表面阳性且呈cd62l表面阴性的cd4+和cd8+细胞。
10、一些实施方案还包括：将重组受体引入来自刺激组合物的细胞中，从而产生工程化细胞组合物，其中所述引入包括使刺激组合物的细胞与包含编码所述重组受体的多核苷酸的药剂接触。一些实施方案还包括：将重组受体引入来自刺激组合物的细胞中，从而产生工程化细胞组合物，其中所述引入包括用包含编码所述重组受体的多核苷酸的病毒载体转导刺激组合物的细胞。在一些实施方案中，所述引入是在无血清培养基中进行。
11、在特定实施方案中，本文提供了用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括：(a)以在2:1与1:2之间的cd4+与cd8+t细胞的比率组合cd4+t细胞组合物和cd8+t细胞组合物，从而产生输入组合物；(b)在刺激条件下孵育输入组合物，从而产生刺激组合物；其中所述刺激条件包括刺激试剂的存在，所述刺激试剂能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域；并且其中所述输入组合物包含浓度小于5x 106个细胞/ml的至少100x 106个总cd4+和cd8+t细胞。
12、在任何所提供方法的一些实施方案中，输入组合物中的cd4+和cd8+细胞被富集或选自来自受试者的原代样品，任选地其中所述输入组合物中的所述cd4+和cd8+细胞被分开地富集或选自来自受试者的原代样品。在任何所提供方法的某些实施方案中，cd4+t细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的cd4+t细胞。在任何所提供方法的特定实施方案中，cd8+t细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的cd8+t细胞。
13、在一些实施方案中，本文提供了一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括在刺激条件下孵育输入组合物，从而产生刺激组合物，其中：所述输入组合物包含在2:1与1:2之间的比率的cd4+与cd8+t细胞，并且其中所述输入组合物包含浓度小于5x 106个细胞/ml的至少100x 106个总cd4+和cd8+t细胞；并且所述刺激条件包括刺激试剂的存在，所述刺激试剂能够激活tcr复合物的一种或多种组分的一个或多个细胞内信号传导结构域和/或一种或多种共刺激分子的一个或多个细胞内信号传导结构域。
14、在任何所提供方法的某些实施方案中，孵育是在无血清培养基中进行。在任何所提供方法的特定实施方案中，输入组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的为cd4+t细胞或cd8+t细胞的细胞。在任何所提供方法的特定实施方案中，输入组合物包含在100x 106个与500x 106个之间的总cd4+和cd8+t细胞。在任何所提供方法的某些实施方案中，输入组合物包含为或约300x 106个总cd4+和cd8+t细胞。
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1.一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述输入组合物中的CD4+和CD8+细胞被富集或选自来自受试者的原代样品，任选地其中所述输入组合物中的CD4+和CD8+细胞被分开地富集或选自来自受试者的原代样品。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述CD4+T细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的CD4+T细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述CD8+T细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的CD8+T细胞。
5.一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括在刺激条件下孵育输入组合物，从而产生刺激组合物，其中：
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述孵育是在无血清培养基中进行。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述输入组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的为CD4+T细胞或CD8+T细胞的细胞。
8.根据权利要求1-7中任一项所
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述输入组合物包含为或约300x 106个总CD4+和CD8+T细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述总CD4+和CD8+T细胞是活细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述输入组合物中的cd4+和cd8+细胞被富集或选自来自受试者的原代样品，任选地其中所述输入组合物中的cd4+和cd8+细胞被分开地富集或选自来自受试者的原代样品。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述cd4+t细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的cd4+t细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述cd8+t细胞组合物包含至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的cd8+t细胞。
5.一种用于生产工程化细胞组合物的方法，所述方法包括在刺激条件下孵育输入组合...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·穆贾西奇，A·拉哈乔，P·波切斯尼，K·邱东，I·艾芙娃，C·陈，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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