【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及青梅果酒后浑浊防控技术，具体涉及一种青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1及其在后浑浊防控中的应用。
技术介绍
1、果酒在贮藏储存期间，会产生浑浊沉淀的现象。对酒体的外观和销售情况产生负面影响。蛋白质是导致果酒后浑浊的主要原因，主要是蛋白质可以和多酚相互作用，从而产生浑浊物。后浑浊现象的产生也与ph和微生物种类有关。研究表明，ph值为酸性时，沉淀的粒径较小。被微生物污染后的饮料会产生浑浊现象，且微生物所产生的代谢产物也会导致酒的口味产生变化。
2、酒类的后浑浊现象在早期就受到了学者们的关注，但国内外对于果酒的研究主要是葡萄酒，尤其是白葡萄酒。白葡萄酒的清晰度是最直观、最重要的感官质量指标之一。由于目前的研究局限于葡萄酒，限制了果酒产业的发展，因此有必要对其他果酒种类进行研究。
3、膨润土吸附法作为一种去除白葡萄酒中不稳定蛋白的技术手段，已被证实为有效的方案之一。当膨润土与蛋白质发生结合作用后，这些复合物会以较为松散的方式沉积在储酒罐或发酵罐的底部，占据酒总体积的3％至10％。然而，膨润土的效用不仅限于去除与沉淀相关的蛋白质，同时也可能导致葡萄酒香气和颜色的损失。
4、青梅果酒是一种以青梅果实为主要原料，经过特定酿酒工艺精心酿制而成的果酒。青梅果酒色泽鲜艳，通常呈现出琥珀色或淡黄色，酒体清澈透明。在口感上，青梅果酒既有青梅的酸甜滋味，又带有酒精的柔和口感，整体风味醇厚而清爽。饮用时，青梅果酒的香气扑鼻而来，令人陶醉其中，带给人愉悦的感官体验。青梅果酒分为发酵青梅酒和浸泡青梅酒，发酵青梅酒
5、然而，由于贮藏和运输过程中引起的浑浊现象，对于果酒产生了不可忽视的质量损失，这一难题也随着全球饮料行业的不断发展，成为了一种比较普遍的技术难题。虽然研究者们在该领域的相关研究已有很大的进展，但其机理尚未完全明确，至今仍有很多基础性问题需要更深入探索和研究。
6、尽管在果酒中蛋白质含量相对较低，但蛋白质的不稳定性依然是导致浑浊现象的最主要原因之一，且这种浑浊不是由微生物所引发，而是由于蛋白质的逐渐聚集，随着储存时间的增加，最终导致了瓶装果酒的浑浊、沉淀。目前，关于青梅果酒中的致浊蛋白质种类还没有具体的报道研究，因此有必要研究青梅果酒中的致浊蛋白质从而靶向防控来抑制果酒后浑浊。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1及其在后浑浊防控中的应用，发现了青梅果酒中的关键致浊蛋白asr1，通过靶向asr1防控技术来抑制果酒后浑浊。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1，该关键性致浊蛋白asr1的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、本专利技术的另一目的是提供编码所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1的基因，该基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
4、本专利技术的另一目的是提供青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1及其在后浑浊防控中的应用，该应用选自以下任意一种：
5、(a)通过靶向青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1实现后浑浊防控；或，
6、(b)通过青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1或青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1与多酚致浊模型用于评价澄清剂对青梅果酒后浑浊防控的效果。
7、其中，所述关键性致浊蛋白asr1的氨基酸序列如seq id no.1所示。
8、优选地，所述青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1为重组asr1蛋白；所述重组asr1蛋白是通过构建表达asr1蛋白的pet-30a(+)-asr1表达载体，并转入大肠杆菌表达体系中，经过诱导表达，菌体破碎，通过6×his亲和纯化系统，分离纯化获得。
9、优选地，所述多酚选自表没食子儿茶素没食子酸酯或/和原花青素。
10、优选地，若所述澄清剂为吸附剂，则采用澄清剂与青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1混合，所述澄清剂与青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1的混合溶液的ph为4.2，通过测定混合溶液中的总蛋白浓度、540nm波长下的透光率或吸光度、480nm波长下的色度中任意一种或两种以上反映澄清效果；若所述澄清剂为蛋白酶，则采用澄清剂与青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1混合进行酶解，待酶解结束后灭酶处理，将溶液ph值调回至4.2，取出部分与ph＝4.2的多酚溶液在室温下等体积充分混合，通过测定540nm波长下检测透光率或吸光度反映澄清效果；若所述澄清剂通过与青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1和多酚致浊模型结合获得可溶性复合物，则在ph为4.2的条件下将多酚溶液、青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1以及澄清剂混合，通过测定540nm波长下检测透光率或吸光度反映澄清效果。
11、本专利技术的另一目的是提供一种所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1与多酚致浊模型的构建方法，该方法包含：通过构建表达asr1蛋白的pet-30a(+)-asr1表达载体，并转入大肠杆菌表达体系中，经过诱导表达，菌体破碎，通过6×his亲和纯化系统，分离纯化获得重组asr1蛋白；将重组asr1蛋白和多酚在ph4.2环境下混合构建致浊模型。
12、优选地，将重组asr1蛋白和多酚在室温、ph 4.2环境下混合构建致浊模型。
13、优选地，所述多酚选自表没食子儿茶素没食子酸酯或/和原花青素；所述表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为0.4～1mg/ml；所述原花青素的浓度为0.4～0.6mg/ml；所述重组asr1蛋白的浓度为0.8～1mg/ml；所述组asr1蛋白和多酚的溶液等体积混合。
14、本专利技术的另一目的是提供一种所述的重组asr1蛋白的构建方法，该方法包含：基于氨基酸序列如seq id no.1所示的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1，构建表达asr1蛋白的pet-30a(+)-asr1表达载体，并转入大肠杆菌表达体系中，经过诱导表达，菌体破碎，通过6×his亲和纯化系统分离纯化；其中，所述诱导表达的温度为37℃诱导4h。
15、优选地，基于氨基酸序列如seq id no.1所示的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1，进行密码子优化，优化后的氨基酸序列如seq id no.2所示；在优化的氨基酸序列的两侧增加nde i和hindiii限制性酶切位点。
16、本专利技术的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1及其在后浑浊防控中的应用，具有以下优点：
17、本专利技术发现了青梅果酒的关键致浊蛋白asr1，并且将其应用于青梅果酒后浑浊防控中，通过靶向asr1进行防控，并可通过构建的重组asr1蛋白-多酚致浊模型评价不同澄清方法对果酒的澄清效果。
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1.青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1，其特征在于，该关键性致浊蛋白ASR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码如权利要求1所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1的基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1在后浑浊防控中的应用，其特征在于，该应用选自以下任意一种：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1为重组ASR1蛋白；所述重组ASR1蛋白是通过构建表达ASR1蛋白的pET-30a(+)-ASR1表达载体，并转入大肠杆菌表达体系中，经过诱导表达，菌体破碎，通过6×His亲和纯化系统，分离纯化获得。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述多酚选自表没食子儿茶素没食子酸酯或/和原花青素。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，若所述澄清剂为吸附剂，则采用澄清剂与青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1混合，所述澄清剂与青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1的混合溶液的pH为4.2，通过测定混合
7.一种如权利要求1所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白ASR1与多酚致浊模型的构建方法，其特征在于，该方法包含：
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，将重组ASR1蛋白和多酚在室温、pH4.2环境下混合构建致浊模型。
9.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述多酚选自表没食子儿茶素没食子酸酯或/和原花青素；所述表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为0.4～1mg/mL；所述原花青素的浓度为0.4～0.6mg/mL；
10.一种如权利要求7中所述的重组ASR1蛋白的构建方法，其特征在于，该方法包含：
...【技术特征摘要】
1.青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1，其特征在于，该关键性致浊蛋白asr1的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.编码如权利要求1所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1的基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.如权利要求1所述的青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1在后浑浊防控中的应用，其特征在于，该应用选自以下任意一种：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述青梅果酒的关键性致浊蛋白asr1为重组asr1蛋白；所述重组asr1蛋白是通过构建表达asr1蛋白的pet-30a(+)-asr1表达载体，并转入大肠杆菌表达体系中，经过诱导表达，菌体破碎，通过6×his亲和纯化系统，分离纯化获得。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述多酚选自表没食子儿茶素没食子酸酯或/和原花青素。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈祥贵，黄玉坤，杨潇，吴莉蔚，张雨欣，
申请(专利权)人：西华大学，
类型：发明
国别省市：
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