【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体地，本专利技术涉及一种双特异性抗体及其应用，更具体地，本专利技术涉及一种抗体、核酸分子、载体或转化子、细胞、药物组合物和试剂盒及其应用。
技术介绍
1、除手术切除外，化疗、放疗等传统癌症治疗手段副作用大、易复发。近年来，免疫治疗，包括肿瘤靶向抗体、免疫检查点抗体、双特异抗体等，成为了抗癌新热点和新希望。以pd-1/l1为代表的免疫治疗展示了巨大的潜力，但是即便目前获批适应症最广的pd-1/l1疗法，其总体响应率也只有30％，仍有更多的患者无法从中受益，其中一个主要的原因是免疫检查点疗法对“冷肿瘤”无效。t细胞通过表面的t细胞受体(tcr)识别新生抗原(neo-antigen)，即肿瘤基因突变的抗原，而部分肿瘤的基因突变频率低，新生抗原种类少，称为“冷肿瘤”。目前的免疫检查点疗法如pd-1/l1疗法，通过恢复t细胞自身的功能达到抗癌目的，而在“冷肿瘤”中，t细胞无法有效识别肿瘤，导致免疫检查点疗法对“冷肿瘤”无效。
2、基于cd3的双特异性抗体(以下简称“cd3双特异性抗体”)通过招募t细胞到达肿瘤局部、桥联t细胞和肿瘤，促进t细胞活化、灭杀肿瘤，这一类双特异性抗体无需新生抗原，能够引导t细胞灭杀“冷肿瘤”。cd3双特异性抗体与t细胞和肿瘤细胞结合后引发强烈的活化信号，因此还能一定程度上“无视”免疫检查点分子的抑制性信号；但是cd3双特异性抗体也会促进大量的促炎性细胞因子产生，如tnfα、il-6等，引发强烈的细胞因子风暴和过度的免疫反应，引起机体损伤，严重的可能危机生命。因此，基于cd
3、解决cd3双特异性抗体安全性问题的途径之一是提高cd3双特异性抗体与肿瘤靶点结合的亲和力，同时降低其与cd3的亲和力，从而使得cd3双特异性抗体药物更多分布到肿瘤局部，增加肿瘤局部药物浓度、降低外周药物浓度、降低脱靶毒性，降低促炎性细胞因子产生水平、降低在靶毒性。因此，临床上，亟需开发安全性更好、临床应用价值更高的cd3双特异性抗体。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种靶向cd3和mica的双特异性抗体，该双特异性抗体能与cd3和mica结合，进而促进t细胞活化、分泌细胞因子，有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞，具有良好的抗癌活性；而且该双特异性抗体具有降低的促进促炎性细胞因子分泌性能、t细胞活化性能，安全性更高，具有良好的临床应用价值及药物开发价值。
2、本专利技术是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
3、专利技术人为了提高cd3与mica双特异性抗体的安全性，通过大量的筛选和试验验证，获得了两种抗cd3抗体cross313和cross325，并基于其构建了cd3与mica双特异性抗体。进一步实验结果证明：本专利技术的cd3与mica双特异性抗体，能与cd3和mica结合，进而促进t细胞活化、分泌细胞因子，有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞，具有良好的抗癌活性；而且该双特异性抗体具有降低的促进促炎性细胞因子分泌的性能、t细胞活化性能，安全性更高，具有良好的临床应用及药物开发价值。
4、因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种双特异性抗体。根据本专利技术的实施例，所述双特异性抗体包含：第一抗原结合区，所述第一抗原结合区包含抗cd3抗体或其抗原结合片段；第二抗原结合区，所述第二抗原结合区具有mica结合活性，
5、其中，所述抗cd3抗体或其抗原结合片段包含第一重链可变区和第一轻链可变区；
6、第一重链可变区具有如seq id no:1～3和seq id no:7任一项所示或其保守修饰形式的氨基酸序列的cdr序列；和/或，
7、第一轻链可变区具有如seq id no:4～6和seq id no:8任一项所示或其保守修饰形式的氨基酸序列的cdr序列。
8、根据本专利技术实施例，所述双特异性抗体能与cd3和mica结合，进而促进t细胞活化、分泌细胞因子，有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞，具有良好的抗癌活性；而且该双特异性抗体具有降低的促进促炎性细胞因子分泌的性能、t细胞活化性能，安全性更高，具有良好的临床应用及药物开发价值。
9、在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种核酸分子。根据本专利技术的实施例，所述核酸分子编码前述的双特异性抗体。根据本专利技术实施例的核酸分子可编码能同时靶向cd3和mica的双特异性抗体。
10、在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种载体或转化子。根据本专利技术的实施例，所述载体或转化子含有前述的核酸。由此，利用构建得到的载体或转化子，可有效表达前述的双特异性抗体。
11、在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种细胞。根据本专利技术的实施例，所述细胞携带前述的核酸或前述的载体或转化子，或表达前述的双特异性抗体。根据本专利技术的实施例，所述细胞是通过转染或者转化所述载体或转化子获得的，所述细胞在合适条件下可高效表达前述双特异性抗体。
12、在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种药物组合物。根据本专利技术的实施例，所述药物组合物包含：前述的双特异性抗体、前述的核酸、前述的载体或转化子或者前述的细胞。根据本专利技术的实施例，所述双特异性抗体能有效促进pbmc杀伤肿瘤细胞，具有抗癌活性；能产生更少的促炎性细胞因子，安全性更高，具有良好的临床应用价值及药物开发价值。由此，获得的药物可进一步用于预防和/或治疗cd3和/或mica介导的相关疾病。
13、在本专利技术的第六方面，本专利技术提出了一种试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包含前述的双特异性抗体、前述的核酸分子、前述的载体或转化子或前述的细胞。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒可与cd3蛋白和/或mica蛋白结合，可有效鉴定cd3蛋白和/或mica蛋白。
14、在本专利技术的第七方面，专利技术提出了前述的双特异性抗体、前述的核酸分子、前述的载体或转化子或前述的细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测cd3和/或mica。本领域技术人员能够理解的是，前面针对双特异性抗体的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。
15、在本专利技术的第八方面，本专利技术提出了前述的双特异性抗体、前述的核酸分子、前述的载体或转化子、前述的细胞或前述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗cd3和/或mica介导的相关疾病。根据本专利技术的实施例，利用本专利技术的双特异性抗体及对应的核酸、载体或转化子或药物组合物可进一步制备成药物，该药物在临床上可用于预防或治疗疾病cd3和/或mica介导的相关疾病。
16、本领域技术人员能够理解的是，前面针对抗体或其抗原结合片段、缀合物、核酸分子、载体或转化子和药物组合物所描述的特征和优点，同样适用于该用途，在此不再赘述。
17、本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。...
【技术保护点】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链可变区具有如SEQID NO:1、2和3所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3，或者所述第一重链可变区具有如SEQID NO:1、2和7所示的重链可变区CDR1、CDR2和CDR3；
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一轻链可变区的N端和所述第一重链可变区的C端相连，或者，所述第一重链可变区的N端和所述第一轻链可变区的C端相连；
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区进一步包含第一Fc片段；
5.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二抗原结合区包含第二抗MICA抗体或其抗原结合片段，所述第二抗MICA抗体或其抗原结合片段为抗MICA的第二scFab片段或第二Fab片段；
6.根据权利要求5所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括：
7.一种核酸，其特征在于，编码权利要求1～6任一项所述的双特异性抗体。
8.
9.一种细胞，其特征在于，携带有权利要求7所述的核酸、权利要求8所述的载体或转化子；或
10.一种药物组合物，其特征在于，包含：
11.一种试剂盒，其特征在于，包括：
12.权利要求1～6任一项所述的多特异性抗体、权利要求7所述的核酸分子、权利要求8所述的载体或转化子或权利要求9所述的细胞在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测CD3和/或MICA。
13.权利要求1～6任一项所述的多特异性抗体、权利要求7所述的核酸、权利要求8所述的载体或转化子、权利要求9所述的细胞或权利要求10所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗CD3和/或MICA介导的相关疾病；
...【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一重链可变区具有如seqid no:1、2和3所示的重链可变区cdr1、cdr2和cdr3，或者所述第一重链可变区具有如seqid no:1、2和7所示的重链可变区cdr1、cdr2和cdr3；
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一轻链可变区的n端和所述第一重链可变区的c端相连，或者，所述第一重链可变区的n端和所述第一轻链可变区的c端相连；
4.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗原结合区进一步包含第一fc片段；
5.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第二抗原结合区包含第二抗mica抗体或其抗原结合片段，所述第二抗mica抗体或其抗原结合片段为抗mica的第二scfab片段或第二fab片段；
6.根据权利要求5所述的双特...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹国帅，成赢，李洋洋，武玉伟，
申请(专利权)人：合肥天港免疫药物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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