【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及dna提取，具体涉及一种组织裂解液及提取动物组织dna的方法。
技术介绍
1、动物组织dna提取一般需要进行细胞裂解和dna纯化两步，裂解是使动物组织中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化是去除如蛋白质、盐、糖等其他杂质的过程。目前较常用的dna提取方法都存在一些问题，例如高盐法提取dna虽然简便快速，但所得dna纯度及稳定性较差，影响后期pcr反应；酚-氯仿抽提法需要较长的消化时间且抽提步骤繁琐，还有可能引入酚的污染，影响实验进程。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术中的上述问题，提供一种组织裂解液及提取动物组织dna的方法，能简单快速裂解动物组织细胞释放dna，提取方便，用时短。
2、本专利技术技术方案详述如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种组织裂解液，由以下成分组成：
4、100mm tris-hcl（三羟甲基氨基甲烷盐酸盐），
5、500mm kcl（氯化钾），
6、0.45%(wt%) np40（乙基苯基聚乙二醇），
7、0.45%(wt%) tween 20（聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯），
8、余量 纯水。
9、可选或优选的，上述组织裂解液，ph值为8.3。
10、第二方面，本专利技术提供了一种提取动物组织dna的方法，包括以下步骤：
11、（1）将上述组织裂解液和1%蛋白酶k加入到动物组织中，在56℃条件下裂解细胞1
12、（2）12000rpm离心2分钟，取上清即为动物组织dna。
13、其中，1%蛋白酶k是按照1g蛋白酶k溶解在100ml纯水中的比例制备而成。
14、由于蛋白酶k容易失效，短时间内使用可以将组织裂解液和蛋白酶k混合后放4℃，直接两者一起用；但长时间情况下，蛋白酶k需放-20℃条件下保存，用时将其溶解在水中，再加到组织裂解液或者直接加到待处理的动物组织中都可以。
15、可选或优选的，上述方法中，每100μl组织裂解液对应处理2~10mg动物组织。
16、可选或优选的，上述方法中，裂解细胞的时间为15分钟。
17、可选或优选的，上述方法中，加入组织裂解液的用量为100μl。
18、可选或优选的，上述方法中，取上清1μl。
19、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
20、本专利技术的组织裂解液成分简单，成本低，仅tris-hcl、kcl、np40和tween 20四种成分，无氯仿、异丙醇、乙醇、酚等有机溶剂，不会产生有机溶剂污染；配方中没有用于使dna与其他分子如rna或蛋白质分离的mg2+，仍然能够获得高纯度和高稳定性的dna，1μl提取液即可满足pcr对于dna纯度和稳定性的要求。
21、本专利技术裂解液中tris-hcl浓度提高至100mm（常规浓度在10-50mm之间），kcl浓度提高至500mm（常规浓度2.7-50 mm）。提高tris - hcl和kcl的浓度对提取动物组织dna有以下作用：
22、tris-hcl方面
23、tris-hcl是一种缓冲液，浓度升高到100mm有助于维持更稳定的ph值。在dna提取过程中，很多酶的活性对ph敏感，合适的ph有助于保证如蛋白酶k等酶的活性，使其更好地分解组织中的蛋白质，让dna更充分地释放出来。而且在后续的提取步骤中，稳定的ph环境可以防止dna的化学结构被破坏。
24、kcl方面
25、高浓度的kcl（500mm）有利于破坏细胞结构。它可以改变细胞膜的通透性，使细胞内的dna更容易释放到裂解液中。同时，kcl还可以通过盐析作用，使一些蛋白质在高盐环境下沉淀，减少蛋白质对dna的污染，有助于提高提取dna的纯度。
26、本专利技术提供的提取动物组织dna的方法，采用上述组织裂解液，整个操作过程简单快速，裂解仅需15分钟，再灭活5分钟，离心2分钟即可获得符合pcr要求的dna上清液。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种组织裂解液，其特征在于，由以下成分组成：
2.根据权利要求1所述的组织裂解液，其特征在于，pH值为8.3。
3.一种提取动物组织DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，每100μL组织裂解液对应处理2~10mg动物组织。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，裂解细胞的时间为15分钟。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，加入组织裂解液的用量为100μL。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，取上清1μL。
【技术特征摘要】
1.一种组织裂解液，其特征在于，由以下成分组成：
2.根据权利要求1所述的组织裂解液，其特征在于，ph值为8.3。
3.一种提取动物组织dna的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，每100μl组织裂解...
【专利技术属性】
技术研发人员：王秀革，黄金明，魏晓超，王金鹏，姜强，鞠志花，肖遥，张亚冉，杨春红，高亚平，王玉杰，赵文军，刘文浩，李彦芹，王玲玲，高运东，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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