【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种自体血清抗原致敏的树突状细胞(dendriticcells，dc)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells，cik)的制备方法及其在抗肿瘤免疫治疗中的应用。
技术介绍
1、树突状细胞(dc)是机体最有效的抗原呈递细胞，能够激活初始t细胞，启动并调节免疫反应。而cik细胞是一种具有高度抗肿瘤活性的细胞群，其通过释放大量的细胞因子(如ifn-γ)发挥作用。传统的dc-cik细胞治疗在肿瘤治疗中取得了一定的疗效，但存在抗原特异性差、靶向性弱等问题。
2、本专利技术通过采用自体血清中的肿瘤相关抗原对dc-cik细胞进行致敏，提高了细胞的抗原特异性和抗肿瘤活性。
技术实现思路
1、为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种通过自体血清中的抗原对dc-cik细胞进行致敏的方法，显著提高了dc-cik细胞的抗原特异性及抗肿瘤活性。本专利技术还涉及该种细胞的制备方法及其在肿瘤免疫治疗中的应用。
2、因此，本专利技术一方面公开了一种制备自体血清抗原致敏的dc-cik细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
3、(1)自体血清的制备：采集患者外周血，静置并离心，收集上清得到自体血清；
4、(2)pbmcs的分离：通过ficoll-paque分离液从患者外周血中分离获得pbmcs；
5、(3)dc细胞的制备：将pbmcs培养并加入gm-csf和il-4诱导dc分化，随
6、(4)cik细胞的制备：将pbmcs经ifn-γ、抗cd3单克隆抗体及il-2培养，诱导cik细胞生成；
7、(5)dc-cik细胞的共培养：将成熟的dc细胞与cik细胞按比例共培养，并添加gm-csf、il-2和抗cd3单克隆抗体促进细胞增殖和活化，获得自体血清抗原致敏的dc-cik细胞。
8、优选地，本专利技术所述步骤(3)dc细胞的制备中的gm-csf、il-4和tnf-α的使用浓度分别为1000u/ml、500u/ml和1000u/ml。
9、优选地，本专利技术所述步骤(3)dc细胞的制备中的自体血清抗原的使用浓度为体积比10％。
10、优选地，本专利技术所述步骤(4)cik细胞的制备中的ifn-γ、抗cd3单克隆抗体和il-2的使用浓度分别为1000u/ml、50ng/ml和1000u/ml。
11、优选地，本专利技术所述步骤(5)dc-cik细胞的共培养时的dc细胞与cik细胞的共培养比例为1:5至1:10。
12、优选地，本专利技术所述步骤(5)dc-cik细胞的共培养中的gm-csf、il-2和抗cd3单克隆抗体的使用浓度分别为500u/ml、1000u/ml和10ng/ml。
13、优选地，本专利技术所述抗cd3单克隆抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列分别如seqid no:1和seq id no:2所示。
14、再一方面，本专利技术还公开了一种所述自体血清抗原致敏的dc-cik细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
15、本专利技术提供的自体血清抗原致敏dc-cik细胞相较于传统dc-cik治疗方案，具有更高的特异性和安全性，显著提高了肿瘤免疫治疗的效果，具有良好的应用前景，为自体血清抗原致敏dc-cik细胞的治疗研究提供了良好的参考和研究方向。
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1.一种制备自体血清抗原致敏的DC-CIK细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)DC细胞的制备中的GM-CSF、IL-4和TNF-α的使用浓度分别为1000U/ml、500U/ml和1000U/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)DC细胞的制备中的自体血清抗原的使用浓度为体积比10％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)CIK细胞的制备中的IFN-γ、抗CD3单克隆抗体和IL-2的使用浓度分别为1000U/ml、50ng/ml和1000U/ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)DC-CIK细胞的共培养时的DC细胞与CIK细胞的共培养比例为1:5至1:10。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)DC-CIK细胞的共培养中的GM-CSF、IL-2和抗CD3单克隆抗体的使用浓度分别为500U/ml、1000U/ml和10ng/ml。
7.根据权利要求1所述
8.一种权利要求1制备的自体血清抗原致敏的DC-CIK细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种制备自体血清抗原致敏的dc-cik细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)dc细胞的制备中的gm-csf、il-4和tnf-α的使用浓度分别为1000u/ml、500u/ml和1000u/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)dc细胞的制备中的自体血清抗原的使用浓度为体积比10％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)cik细胞的制备中的ifn-γ、抗cd3单克隆抗体和il-2的使用浓度分别为1000u/ml、50ng/ml和1000u/ml。
...【专利技术属性】
技术研发人员：杜全中，
申请(专利权)人：广东恒默生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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