【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种靶向b细胞cd20的纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、b细胞是免疫系统的重要淋巴细胞，恶性肿瘤、自身免疫性疾病、淋巴瘤和白血病是常见的b细胞相关疾病，这些疾病的发病机制与b细胞过度活化产生大量自身抗体相关。因此，以b淋巴细胞表面分子为靶点的b淋巴靶向治疗得到了近年来广泛的关注和研究。b淋巴细胞清除策略是利用抗体药物靶向结合b细胞亚群的特定抗原，通过抗体依赖介导的细胞毒性作用或补体，或通过靶向b细胞存活需要的细胞因子，如b细胞激活因子（-cellactivation factor, baff）诱导b细胞凋亡，达到清除b细胞的目的。b细胞清除主要的靶点是cd20，cd19和baff，用于治疗自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮，多发性硬化症。
2、cd20是一种在b细胞表面表达的非糖基化蛋白，主要由b细胞开始表达，初始b细胞增殖活化至浆细胞的过程表达下调，在终末分化的浆母细胞和浆细胞中失去表达。cd20在b细胞的表达具有特异性，且在单核细胞及粒细胞，大部分t细胞和其他组织细胞不表达。靶向cd20的药物可通过阻断向浆细胞分化发育，以降低产生自身免疫性抗体的浆细胞水平，同时保留b细胞前体，幼稚b细胞和长寿浆细胞的再生库。
3、目前以cd20单克隆抗体为代表的b淋巴稀薄清除治疗是目前较为成熟的方案，如rituximab(利妥昔)、ocrelizumab、ofatumumab。除了b细胞清除，还有针对b细胞生长因子（baff）的中和药物，包括gaff中和抗体（如belimumab，贝利单抗）
4、然而研究表明，长期服用rituximab，可能导致免疫系统的暂时性抑制，增加感染的风险，部分患者可能对单抗或其成分产生过敏反应，表现为皮疹、呼吸困难等症状，并且导致血细胞（如白细胞、红细胞和血小板）计数降低，这可能会影响患者的健康和恢复能力
5、纳米抗体是从骆驼科动物（如骆驼、羊驼和骆马）中提取的一种特殊类型的抗体，其大小仅为常规抗体的十分之一。这使得它们能够更容易地穿透组织，到达常规抗体无法到达的地方。纳米抗体具有极高的热稳定性和化学稳定性，使其在各种恶劣环境下都能保持活性。由于纳米抗体的结构简单，因此可以很容易地进行基因工程改造，以产生具有特定功能的抗体。此外，纳米抗体也可以通过细菌、酵母等微生物进行大规模生产，大大降低了生产成本。纳米抗体可以同时识别多个抗原表位，这使得它们在诊断和治疗多种疾病方面具有很大的潜力。纳米抗体由于其独特的结构和性质，使其在靶向药物输送、免疫诊断、肿瘤治疗等方面显示出高效的性能。纳米抗体已经被广泛应用于医学、生物技术、农业等领域，包括疾病的早期诊断、治疗，以及作为研究工具等。开发靶向b细胞的纳米抗体，对于b细胞相关疾病的治疗和研究，具有至关重要的意义。
6、血液净化是一项至关重要的医疗技术，它通过从血液中去除有害物质来治疗多种疾病和中毒状况。通过使用特定的吸附剂，如免疫吸附剂，可以针对性地吸附特定的致病因子，例如自身抗体或炎症介质。免疫吸附是一种技术，它利用特定的抗原、抗体或具有独特理化亲和力的配体与吸附介质结合，形成选择性或特异性的吸附柱。当与药物治疗结合使用时，免疫吸附能显著提高患者对药物的反应性，从而增强药物效果，减少副作用，缩短治疗时间，并降低疾病复发的风险。通过将靶向b细胞的抗体将与固相载体相结合，可以特异性结合人血液中的b细胞，从而清除产生病理性抗体的b细胞。吸附效率高，吸附性能稳定，靶向清除b细胞，非特异性吸附量低，特异性好，在临床治疗上安全性能好，经济效益高。可能成为b细胞相关疾病的治疗的新途径。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种靶向b细胞cd20的纳米抗体及其应用。
2、本专利技术所采取的技术方案是：
3、第一个方面，本专利技术提供一种靶向b细胞cd20的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，所述纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
4、组合1，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1～seq id no.3所示；
5、组合2，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.4～seq id no.6所示；
6、组合3，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.7～seq id no.9所示。
7、在一些实例中，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
8、在一些实例中，所述纳米抗体氨基酸序列的选自以下选自以下组合中的任意一种：
9、ca05：
10、qvqlvesgggpvqsggslrlscagsrniyspysmgdyglswfrqapgeeregvalidrddstfyadsvkgrftisqddaktnlflqmnslkpedsamyycaaaakpkehglfdswgqgtqvtvss；
11、cb01：
12、qvqlqesgggpvqagdslrlscaasgniysgniysrhsmgwfrqvpgkeregvainrddssrftlsqddaktnlflqmnslkptdtayycaagwmatlawsdwfrgrgtqvtvss；
13、cd09：
14、qvqlqesgggpvqsggslrlscaasrniysrpymawfrqapgkeregvatsstfgstvyadsvkgrftisrddaktnlflqmnslkpedsamyycaagfdylspsdygywgqgtqvtvss。
15、上述序列中，下划线标记的部分为cdr区，未标记的部分为fr区。
16、在一些纳米抗体的实例中，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
17、通过引入抗体fc区，可以实现纳米抗体的二聚化。fc区的引入，还可以利用fc的亲和性，简化抗体的纯化操作。fc的引入，还有利于延长抗体的半衰期，提高抗体在体内的稳定性。抗体fc区没有特殊要求，优选为人源抗体的fc区。所述抗体fc区包括人源igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igd、igm、ige的fc段或其变体、改造体。
18、第二个方面，本专利技术提供一种二价或多价纳米抗体，包括至少一条本专利技术第一个方面所述的纳米抗体。
19、二价或多价纳米抗体由单条纳米抗体通过接头元件连接本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向B细胞CD20的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，所述纳米抗体互补决定区域CDR1～CDR3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列选自以下序列中的一条：
3.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合Fc片段的纳米抗体。
4.一种二纳或多价纳米抗体，其特征在于，包括至少一条权利要求1～3任一项所述的纳米抗体。
5.权利要求1～4任一项所述的纳米抗体的应用，其特征在于，所述应用包括：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述偶联物为药物，所述B细胞相关疾病选自肿瘤及自身免疫性疾病。
7.一种免疫吸附剂，包括固相载体，其特征在于，所述固相载体上偶联有权利要求1～4任一项所述的纳米抗体，优选的，所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。
8.一种血液净化器械，其特征在于，包括权利要求7所述的免疫吸附剂。
9.编码权利要求1～4
10.一种表达载体，其特征在于，其表达权利要求1～4任一项所述的纳米抗体，或含有权利要求9所述的基因。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向b细胞cd20的纳米抗体，包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，所述纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列选自以下序列中的一条：
3.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
4.一种二纳或多价纳米抗体，其特征在于，包括至少一条权利要求1～3任一项所述的纳米抗体。
5.权利要求1～4任一项所述的纳米抗体的应用，其特征在于，所述应用包括：
【专利技术属性】
技术研发人员：张海珍，蔡博生，宋颖，杨雪飞，曾可，吴泳棋，杨正根，陈校园，
申请(专利权)人：广州康盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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