【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种抗小反刍兽疫病毒非结构蛋白v的单克隆抗体。
技术介绍
1、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus，pprv)是引起小反刍兽疫(peste des petits ruminants，ppr)的病原，该病毒主要感染山羊、绵羊、小鹿瞪羚及长角羚等反刍动物，致使动物表现发热、腹泻、肠炎、肺炎等临床症状。ppr是一种重大跨境动物传染病，被oie列为法定必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。2015年fao和oie组织全球部长级会议，通过并启动《全球小反刍兽疫控制与根除策略》。
2、pprv基因组编码6种结构蛋白和2种非结构蛋白，v蛋白是p基因在rna编辑时第751位插入一个碱基g，导致密码子发生移位而产生的非结构蛋白。麻疹病毒属中v蛋白的长度不同：pprv为298aa、cdv和rpv为299aa、mv和dmv分别为300和303aa。理论推测v蛋白分子量为32.28kda，但实际大小在40kd左右，所含ser大多(60％)能被磷酸化可能是造成分子量变大的主要因素。麻疹病毒属的编辑位点(-5’-ttaaaagggcacag-3’)是保守的，在pprv中该位点位于p基因的751bp位，即v基因与p基因含有相同的n端；但由于插入碱基g后发生密码子移位，形成的v蛋白具有富含半胱氨酸(cys)的c端。his和7个cys通过与两个zn2+结合形成锌指结构，该结构在拮抗先天性免疫中发挥重要作用。
3、非结构蛋白不仅在麻疹病毒属中保守，在副粘病毒科中
4、单克隆抗体是由高度一致的免疫细胞制成的抗体，这些免疫细胞来源于单一亲本细胞。单克隆抗体识别某一个特定的抗原表位，具有单价亲和力，其与特定抗原的结合能力取决于每对轻/重链对的可变区，且主要由互补决定区(cdr)确定。因此，单克隆抗体可用来检测或纯化含有特异抗原表位的物质，现已成为生物化学、分子生物学和医学研究领域的重要工具。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术利用重组pprv v蛋白免疫动物，获得了稳定分泌抗pprv v蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测序得到了该单克隆抗体的互补决定区及可变区序列，可用于小反刍兽疫病毒体外检测或小反刍兽疫病毒v蛋白功能研究。具体包括以下内容：
2、第一方面，本专利技术提供了一种抗小反刍兽疫病毒非结构蛋白v的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；
3、所述抗体重链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.1所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.2所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.3所示的cdr3；
4、所述抗体轻链的可变区cdr包括氨基酸序列如seq id no.4所示的cdr1、氨基酸序列如seq id no.5所示的cdr2和氨基酸序列如seq id no.6所示的cdr3。
5、优选地，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。
6、第二方面，本专利技术提供了一种核酸，所述核酸编码上述第一方面所述单克隆抗体的抗体重链和抗体轻链。
7、优选地，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。
8、第三方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒非结构蛋白抗体的试剂中的应用。
9、优选地，所述试剂为阻断elisa试剂盒。
10、第四方面，本专利技术提供了一种酶结合物，所述酶结合物包括：
11、(i)上述第一方面所述的单克隆抗体；
12、(ii)和与(i)中单克隆抗体偶联的辣根过氧化物酶。
13、第五方面，本专利技术提供了一种小反刍兽疫病毒非结构蛋白v抗体检测elisa试剂盒，所述试剂盒包括上述第四方面所述的酶结合物。
14、优选地，所述试剂盒包括小反刍兽疫病毒抗原包被的酶标板、对照血清、封闭液、稀释液、上述第四方面所述的酶结合物、洗涤液、显色剂、终止液。
15、优选地，所述包被抗原为小反刍兽疫病毒v蛋白。
16、第六方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的单克隆抗体，或上述第四方面所述的酶结合物，或上述第五方面所述的elisa试剂盒在以非疾病诊断为目的的小反刍兽疫病毒自然感染性检测或在小反刍兽疫病毒v蛋白功能研究中的应用。
17、第七方面，本专利技术提供了一种检测小反刍兽疫病毒的阻断elisa方法，其，所述方法包括以下步骤：
18、(1)用包被液(0.05mol/l碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，ph9.6)稀释纯化的重组pprv v蛋白至1μg/ml，50μl/孔，封板膜封板，4℃包被过夜；
19、(2)1×pbst洗涤3本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗小反刍兽疫病毒非结构蛋白V的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1或2所述单克隆抗体的抗体重链和抗体轻链。
4.如权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
5.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒非结构蛋白抗体的试剂中的应用，或在以非疾病诊断为目的的小反刍兽疫病毒自然感染性检测中的应用，或在小反刍兽疫病毒V蛋白功能研究中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂为阻断ELISA试剂盒。
7.一种酶结合物，其特征在于，所述酶结合物包括：
8.一种小反刍兽疫病毒非结构蛋白V抗体检测ELIS
9.如权利要求8所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括小反刍兽疫病毒抗原包被的酶标板、对照血清、封闭液、稀释液、权利要求7所述的酶结合物、洗涤液、显色剂、终止液。
10.一种检测小反刍兽疫病毒的阻断ELISA方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗小反刍兽疫病毒非结构蛋白v的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体重链的可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述抗体轻链的可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。
3.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1或2所述单克隆抗体的抗体重链和抗体轻链。
4.如权利要求3所述的核酸，其特征在于，编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。
5.如权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备检测小反刍兽疫病毒非结构蛋白抗体的试剂中的...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒙学莲，朱学亮，赵帅阳，徐浩月，孙跃峰，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
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