【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检测，具体涉及一种金黄色葡萄球菌测试片及其应用。
技术介绍
1、金黄色葡萄球菌（ staphylococcus aureus），一种常见的革兰氏阳性球形菌，隶属于葡萄球菌属，是所有常见葡萄球菌中较危险的一种，可引发包括皮肤、肺部、心脏、骨骼在内的多种器官感染，严重时甚至导致死亡。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，从空气、水源到灰尘，乃至人类和动物的排泄物中都可能发现其踪迹，因此食品受到金黄色葡萄球菌污染的风险相对较高，食品可能在多个环节受到污染：如食品加工、烹饪或销售过程中，工作人员也可能成为细菌的携带者。
2、金黄色葡萄球菌是导致人类化脓性感染的主要病原体之一，它不仅能引起局部化脓，还可能引发肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等严重疾病，甚至导致败血症和脓毒症等全身性感染。受污染的食物在20℃至30℃的温度下放置3至5小时，就可能产生足以引起食物中毒的肠毒素。摄入这些肠毒素后，人们通常在2至5小时内会出现呕吐、腹痛、腹泻等中毒症状。
3、鉴于此，为了预防金黄色葡萄球菌对人类健康的威胁，快速且准确地检测食品中的金黄色葡萄球菌含量显得尤为重要。《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（gb4789.10-2016）推荐使用平板法进行定性和定量检测，但这种方法在实际操作中存在一定的复杂性和成本。目前，国内外市场上已有多种金黄色葡萄球菌检测产品。国外品牌如法国科玛嘉（chromagar™）的显色培养基、美国3m和日本dnp的测试片，而
技术实现思路
1、为此，本专利技术目的在于提供一种特异性好、灵敏度高、准确度高且便于观察的金黄色葡萄球菌测试片。
2、为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
3、本专利技术的一个目的是提供一种金黄色葡萄球菌测试片，其结构由上至下依次为包括透明覆膜、培养区和印有方形网格的底板，所述培养区设于所述底板上，所述透明覆膜覆盖于所述底板上；所述培养区中填充金黄色葡萄球菌选择性生长培养基，所述培养基包括营养物质混合物、复合抑制剂、复合显色酶底物和冷水可凝胶。
4、优选地，所述营养物质混合物包括胰蛋白胨5-50g/l、酵母浸粉1-10g/l、牛肉浸粉1-40g、丙酮酸钠0.1-10g/l、磷酸氢二钠1-20g/l、柠檬酸钠0.05-2g/l、硫酸镁0.01-3g/l和柠檬酸铁铵0.005-0.01g/l。
5、优选地，所述复合抑制剂为氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的混合；所述复合抑制剂为氨曲南0.0001-0.0005g/l、抑菌肽0.0005-0.003g/l、甲氧苄啶0.00005-0.0003g/l、磷霉素钠0.0005-0.003g/l。
6、优选地，所述复合抑制剂中，氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的质量比为1∶（1~8）∶（0.5~3）∶（1~15）。进一步优选地，氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的质量比为1∶（3.5~5.5）∶（0.5~0.8）∶（5~6.5）。最优选地，氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的质量比为1∶5∶0.5∶6。
7、优选地，所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷的混合；所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐0.05-0.2g/l、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-吡喃葡萄糖苷0.05-0.3g/l、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷0.05-0.1g/l。
8、优选地，所述复合显色酶底物中，优选地，5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷的质量比为（1.3~1.5）∶（1.7~1.8）∶1。
9、优选地，所述透明覆膜的尺寸为98mm×80mm，所述透明覆膜与所述底板粘接宽度为12mm，所述透明覆膜与粘胶的厚度为0.076mm；所述透明覆膜的材质为pe、pet中的一种。
10、优选地，所述培养区为圆形，所述培养区的直径为50mm，所述培养区由热熔胶涂覆固化而成，所述热熔胶为乙酸乙烯酯，胶圈内径50mm，外径50.5mm；所述培养区距离所述底板的左侧边缘15.5mm，距离所述底板的右侧边缘15.5mm，距离所述底板的下侧边缘19-20mm，高度为0.70-0.78mm；所述底板上位于所述培养区内设有方形网格，方形网格中的小方格尺寸为10mm×10mm。
11、优选地，所述底板的尺寸为93mm×80mm，所述底板为pp合成纸、ph合成纸、pet合成纸、ps合成纸、pvc合成纸中的一种。
12、本专利技术另一目的是提供一种上述的金黄色葡萄球菌测试片在检测金黄色葡萄球菌含量中的应用。
13、本专利技术实施例具有如下优点：
14、1. 本专利技术提供的金黄色葡萄球菌测试片，其结构由上至下依次为透明覆膜、圆形培养区、印有方形网格的底板，其圆形培养区中的培养成分为胰蛋白胨（5-12g/l）、酵母浸粉（1-5g/l）、牛肉浸粉（1-10g）、丙酮酸钠（0.1-4g/l）、磷酸氢二钠（1-7g/l）、柠檬酸钠（0.05-0.6g/l）、硫酸镁（0.01-0.5g/l）、复合抑制剂（0.001-0.05g/l）、复合显色酶底物（0.06-3g/l）、冷水可凝胶（6-40g/l），柠檬酸铁铵（0.008-0.01g/l），该测试片是一种预制培养系统，无需提前高压灭菌琼脂培养基，考虑倾倒适宜温度，便于携带。
15、2. 本专利技术提供的金黄色葡萄球菌测试片中的复合抑制剂可有效抑制非目标菌的生长，复合显色酶底物对目标菌选择性更强，因此本专利技术具有灵敏度高、特异性强的特点，极大地提高了检测准确率，降低了假阳性率、假阴性率。
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1.一种金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于，其结构由上至下依次为包括透明覆膜、培养区和印有方形网格的底板，所述培养区设于所述底板上，所述透明覆膜覆盖于所述底板上；所述培养区中填充金黄色葡萄球菌选择性生长培养基，所述培养基包括营养物质混合物、复合抑制剂、复合显色酶底物和冷水可凝胶。
2.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述营养物质混合物包括胰蛋白胨5-50g/L、酵母浸粉1-10g/L、牛肉浸粉1-40g、丙酮酸钠0.1-10g/L、磷酸氢二钠1-20g/L、柠檬酸钠0.05-2g/L、硫酸镁0.01-3g/L和柠檬酸铁铵0.005-0.01g/L。
3.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合抑制剂为氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的混合；所述复合抑制剂为氨曲南0.0001-0.0005g/L、抑菌肽0.0005-0.003g/L、甲氧苄啶0.00005-0.0003g/L、磷霉素钠0.0005-0.003g/L。
4.如权利要求3所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合抑制剂中，氨曲南、抑菌肽、
5.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷的混合；所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐0.05-0.2g/L、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷0.05-0.3g/L、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷0.05-0.1g/L。
6.如权利要求5所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合显色酶底物中，5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷的质量比为（1.3~1.5）∶（1.7~1.8）∶1。
7.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述透明覆膜的尺寸为98mm×80mm，所述透明覆膜与所述底板粘接宽度为12mm，所述透明覆膜与粘胶的厚度为0.076mm；所述透明覆膜的材质为PE、PET中的一种。
8.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述培养区为圆形，所述培养区的直径为50mm，所述培养区由热熔胶涂覆固化而成，所述热熔胶为乙酸乙烯酯，胶圈内径50mm，外径50.5mm；所述培养区距离所述底板的左侧边缘15.5mm，距离所述底板的右侧边缘15.5mm，距离所述底板的下侧边缘19-20mm，高度为0.70-0.78mm；所述底板上位于所述培养区内设有方形网格，方形网格中的小方格尺寸为10mm×10mm。
9.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述底板的尺寸为93mm×80mm，所述底板为PP合成纸、PH合成纸、PET合成纸、PS合成纸、PVC合成纸中的一种。
10.一种如权利要求1-9中任一项所述的金黄色葡萄球菌测试片在检测金黄色葡萄球菌含量中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于，其结构由上至下依次为包括透明覆膜、培养区和印有方形网格的底板，所述培养区设于所述底板上，所述透明覆膜覆盖于所述底板上；所述培养区中填充金黄色葡萄球菌选择性生长培养基，所述培养基包括营养物质混合物、复合抑制剂、复合显色酶底物和冷水可凝胶。
2.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述营养物质混合物包括胰蛋白胨5-50g/l、酵母浸粉1-10g/l、牛肉浸粉1-40g、丙酮酸钠0.1-10g/l、磷酸氢二钠1-20g/l、柠檬酸钠0.05-2g/l、硫酸镁0.01-3g/l和柠檬酸铁铵0.005-0.01g/l。
3.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合抑制剂为氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的混合；所述复合抑制剂为氨曲南0.0001-0.0005g/l、抑菌肽0.0005-0.003g/l、甲氧苄啶0.00005-0.0003g/l、磷霉素钠0.0005-0.003g/l。
4.如权利要求3所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合抑制剂中，氨曲南、抑菌肽、甲氧苄啶和磷霉素钠的质量比为1∶（3.5~5.5）∶（0.5~0.8）∶（5~6.5）。
5.如权利要求1所述的金黄色葡萄球菌测试片，其特征在于：所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-吡喃葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-α-吡喃葡萄糖苷的混合；所述复合显色酶底物为5-溴-6-氯-3-吲哚基-磷酸甲苯胺盐0.05-0.2g/...
【专利技术属性】
技术研发人员：张加敏，冯研，魏单平，郭秀锋，倪忠帅，
申请(专利权)人：北京纳百生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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