【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物天然产物提取，具体涉及一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法。
技术介绍
1、萝卜硫素（sulforaphane；1-异硫氰酸酯-4-甲磺酰基丁烷），一种异硫氰酸酯衍生物，广泛存在于西兰花、花椰菜和萝卜等十字花科蔬菜中，其含量与品种、植物部位和发育阶段有关，以西兰花植物体为例，西兰花小花中异硫氰酸酯含量最高，其次是茎和叶。萝卜硫素并不是直接存在植物体内，而是由萝卜硫苷（glucoraphanin；4-甲基亚磺酰基丁烯基硫代葡萄糖苷）经内源性黑芥子酶酶解产生在植物细胞破裂的条件下产生。
2、萝卜硫素的前体物质——萝卜硫苷既没有毒性，也没有生物学活性，而其水解产物sfn却具有丰富的生物活性。在过去的几年里，研究人员对sfn进行了广泛的研究，以深入地了解其在各类体内的病理学以及在实验模型中体外研究的保护作用，例如其抗癌、抗菌、抗氧化、自身的免疫调节等方面的生理活性。研究表明，萝卜硫素因其强大而广谱的抗癌活性而被认为是最有前途的抗癌剂，sfn通过可诱导产生ⅱ型解毒酶，还可通过细胞周期阻滞、细胞凋亡等抗增殖机制，对肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌等多种癌症具有抑制作用，此外，它还被证明具有抗炎、抗氧化、调节肠道微生物、神经保护和免疫调节作用。
3、目前，对于萝卜硫素的制备方法主要包括化学合成法及酶解提取法，前者需要使用大量的有毒有机试剂，且反应过程难以控制，副产物较多，在食品工业中未能得到广泛应用。而酶解提取法从天然植物中提取的萝卜硫素安全性更高，更能满足市场对功能性食品配料安全性
4、近年来，对于萝卜硫素的研究主要集中在活性功能方面，对于提取方面的系统性研究相对较少。因此，研究其提取方法中的可控因素能够使得萝卜硫素的生产量有效地得到提高，为其进行工业化生产提供了理论依据。
5、本专利技术以烘干西兰花小花粉为原料，使用超声辅助乙酸乙酯提取其中的萝卜硫素，并通过单因素试验和响应面试验优化工艺参数，得到一个工艺简单，易操作，无需引入外源酶，得到即可获得高含量的萝卜硫素，并适用于工厂化实施的萝卜硫素提取方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是，提供西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其提取工艺简单，不需要任何昂贵仪器，不需引入外源酶，生产成本低，适合大批量生产。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、①新鲜西兰花切分小花后烘干粉碎，制备成西兰花小花粉；
4、②取步骤①中1份西兰花小花粉，加入0.18份l(+)-抗坏血酸，并与5~25份、ph为4.5~7.5的磷酸盐缓冲液混合，在110 rpm/min、15~35℃的条件下振荡4~6 h，得到西兰花萝卜硫素酶解液，其中西兰花小花粉∶l(+)-抗坏血酸∶磷酸盐缓冲液的份数单位为g∶g∶ml；
5、③向步骤②中的西兰花萝卜硫素酶解液中加入5-15份乙酸乙酯，并在超声功率为200~500w、超声温度为20~60℃、超声时间为10~50min的条件下进行超声辅助提取，其中西兰花小花粉∶乙酸乙酯的份数单位为g∶ml；
6、④将西兰花萝卜硫素粗提液在35°c条件下进行旋转蒸发浓缩至干，得到西兰花萝卜硫素浸出膏；
7、⑤将步骤④中西兰花萝卜硫素浸出膏用一定量乙腈溶液溶解，通过0.22 μm有机系滤膜过滤到自动进样瓶中，使用超高效液相色谱仪测定萝卜硫素含量，分析条件为色谱柱为岛津shim-pack gist c18色谱柱（4.6×250 nm，5 μm），dad检测器检测波长为190 nm，流速1 ml/min，柱温30℃，进样体积5 μl。流动相a为超纯水，b为乙腈，梯度洗脱程序为0-1min，70% a和30% b；1-9 min，70%-50% a和30%-50% b；9-11 min，50%-70% a和50%-30% b；11-12 min，70% a和30% b。结果以干重计，单位为mg/g dw。
8、初选方案：
9、步骤②中磷酸盐缓冲液的ph为5.5，份数为15份，酶解时间为5.5 h，酶解温度为35℃；
10、步骤③中乙酸乙酯的份数为15份，超声功率为250 w，超声时间为10 min，超声温度为40℃。
11、优选方案：
12、步骤②中磷酸盐缓冲液的ph为5.5，份数为15份，酶解时间为5.5 h，酶解温度为33℃；
13、步骤③中乙酸乙酯的份数为16份，超声功率为250 w，超声时间为10 min，超声温度为41℃。
14、采用上述技术方案具有以下有益效果：
15、本专利技术以烘干西兰花小花粉为原料，使用超声辅助乙酸乙酯提取其中萝卜硫素，得到了一种工艺简单，操作方便，且无需添加外源酶的萝卜硫素提取方法，增加了西兰花的资源利用率，为萝卜硫素功能性食品的开发打下良好的理论基础。
16、本专利技术的原料来源广泛，前处理方法简单；利用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯毒性较弱，易挥发易于减压除去，不含其它的不良气味和溶剂残留；提取工艺简单，不需要任何昂贵仪器，不需引入外源酶，生产成本低，适合大批量生产。
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1.一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中西兰花小花粉通过以下方法获得：将新鲜西兰花洗净后切分小花，40℃热风干燥至水分7%以下，粉碎后，过60目筛网，制备成西兰花小花粉。
3. 根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中内源酶解过程为：1份西兰花小花粉，加入0.18份L(+)-抗坏血酸，并与5~25份、pH为4.5~7.5的磷酸盐缓冲液混合，在110 rpm/min、15~35℃的条件下振荡4~6 h，得到西兰花萝卜硫素酶解液，其中西兰花小花粉∶L(+)-抗坏血酸∶磷酸盐缓冲液的份数单位为g∶g∶mL。
4.根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中超声辅助提取过程为：向西兰花萝卜硫素酶解液中加入5-15份乙酸乙酯，并在超声功率为200~500W、超声温度为20~60℃、超声时间为10~50min的条件下进行超声辅助提取，其中西兰花小花粉∶乙酸乙酯的份数单位为
5. 根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（5）中超高效液相色谱仪测定萝卜硫素含量的条件为：将西兰花萝卜硫素浸出膏用一定量乙腈溶液溶解，通过0.22 μm有机系滤膜过滤到自动进样瓶中，使用超高效液相色谱仪测定萝卜硫素含量，分析条件为色谱柱为岛津Shim-pack GIST C18色谱柱（4.6×250 nm，5 μm），DAD检测器检测波长为190 nm，流速1 mL/min，柱温30℃，进样体积5 μL。流动相A为超纯水，B为乙腈，梯度洗脱程序为0-1 min，70% A和30% B；1-9 min，70%-50% A和30%-50% B；9-11 min，50%-70% A和50%-30% B；11-12 min，70% A和30% B。结果以干重计，单位为mg/gDW。
...【技术特征摘要】
1.一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中西兰花小花粉通过以下方法获得：将新鲜西兰花洗净后切分小花，40℃热风干燥至水分7%以下，粉碎后，过60目筛网，制备成西兰花小花粉。
3. 根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中内源酶解过程为：1份西兰花小花粉，加入0.18份l(+)-抗坏血酸，并与5~25份、ph为4.5~7.5的磷酸盐缓冲液混合，在110 rpm/min、15~35℃的条件下振荡4~6 h，得到西兰花萝卜硫素酶解液，其中西兰花小花粉∶l(+)-抗坏血酸∶磷酸盐缓冲液的份数单位为g∶g∶ml。
4.根据权利要求1所述的一种西兰花萝卜硫素提取物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中超声辅助提取过程为：向西兰花萝卜硫素酶解液中加入5-15份乙酸乙酯，并在超声功率为200~...
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