【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物的染色体制片方法，具体涉及一种黑壳楠染色体制片的方法。
技术介绍
1、黑壳楠属樟科山胡椒属，是一种常绿阔叶树种。黑壳楠树形优美抗性强是北方地区可引种栽培的优良的常绿阔叶类树种。黑壳楠还有丰富的挥发性物质可以抗虫抑菌抗污染，根中还有荷包牡丹碱等抗癌药物，但黑壳楠在河南地区的推广应用十分缺乏。
2、植物染色体制片是进行核型分析、带型分析和染色体原位杂交等细胞遗传学研究的基础。近年来随着细胞遗传学研究在植物分类和育种中的应用，染色体制片技术尤为重要。但目前在染色体制片过程中，压片时染色体易重叠，不易获得清晰的分裂相，使得黑壳楠的育种工作进行困难。
技术实现思路
1、为解决现有技术压片时染色体易重叠，不易获得清晰的分裂相，使得黑壳楠的育种工作进行困难的问题，本专利技术提供了一种黑壳楠染色体制片的方法。
2、一种黑壳楠染色体制片的方法，包括以下步骤：
3、(1)预处理：将用于制片的材料在3-5℃的条件下预处理12-30h；
4、(2)固定：将预处理后的材料转移至卡诺固定液中，在3-5℃条件下固定22-24h，经体积分数为70％-95％的乙醇冲洗后保存备用；
5、(3)解离：将固定后的材料冲洗干净后转移至0.5-1mol/l的盐酸溶液中，在55-65℃下解离7-9min；
6、(4)染色压片：将解离后的材料染色7-9min，压片。
7、优选的，所述用于制片的材料为黑壳楠长到15-20cm的幼苗
8、优选的，所述用于制片的材料为主根或侧根的根尖0.5-1cm处。
9、优选的，所述用于制片的材料的取材时间为下午9-11点。
10、优选的，将材料置于冰水混合物中，在3-5℃的条件下预处理12-30h。
11、优选的，所述预处理的时间为24h。
12、优选的，所述卡诺固定液是由无水乙醇与冰醋酸按2-4：1的体积比例混合而成。
13、优选的，经体积分数为95％的乙醇冲洗后，转入体积分数为70％的乙醇中在4℃中保存备用。
14、优选的，所述解离具体为在1mol/l的盐酸溶液中，在温度60℃下解离8min。
15、优选的，染色压片时，除去非分生组织的部分，留根尖白色部分，置于载玻片上，将根尖弄碎。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
17、本专利技术处理后所获得的分生组织作为染色体制片材料，可获得较多分裂相、分散良好、清晰的染色体图像，对黑壳楠的育种工作十分有价值。
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1.一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述用于制片的材料为黑壳楠长到15-20cm的幼苗的主根或侧根。
3.根据权利要求2所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述用于制片的材料为主根或侧根的根尖0.5-1cm处。
4.根据权利要求3所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述用于制片的材料的取材时间为上午9-11点。
5.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述预处理具体为将材料置于冰水混合物中，在3-5℃的条件下处理12-30h。
6.根据权利要求5所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述预处理的时间为24h。
7.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述卡诺固定液是由无水乙醇与冰醋酸按2-4：1的体积比例混合而成。
8.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(2)中乙醇冲洗时，经体积
9.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述解离具体为在1mol/L的盐酸溶液中，在温度60℃下解离8min。
10.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(4)中，染色压片时，除去非分生组织的部分，留根尖白色部分，置于载玻片上，将根尖弄碎。
...【技术特征摘要】
1.一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述用于制片的材料为黑壳楠长到15-20cm的幼苗的主根或侧根。
3.根据权利要求2所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述用于制片的材料为主根或侧根的根尖0.5-1cm处。
4.根据权利要求3所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，所述用于制片的材料的取材时间为上午9-11点。
5.根据权利要求1所述的一种黑壳楠染色体制片的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述预处理具体为将材料置于冰水混合物中，在3-5℃的条件下处理12-30h。
6.根据权利要求5所述的一种黑壳楠染色体制片的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：逯久幸，刘红利，李永华，刘保国，陈鹏，黄淦，李菲，栗燕，张开明，史屹峰，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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