【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及细胞疗法的领域，并且更具体地涉及用于制造工程化淋巴细胞的组合物和方法。
技术介绍
1、免疫细胞可被改性为靶向并杀死患者体内的癌细胞。为了增加免疫细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已开发了工程化免疫细胞以表达将免疫细胞引导至特定靶癌细胞的构建体的方法。包括能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域的嵌合抗原受体（car）和工程化t细胞受体（tcr）允许免疫细胞靶向并杀死表达特定肿瘤抗原的癌细胞。
2、重大的挑战来自高度复杂的自体细胞工程化和生产过程，这通常需要至少一周，并且甚至可能长达几周。在该过程中，从患者采集的淋巴细胞必须被运送到处理中心，而产生的细胞必须冷冻保存，并且然后被运送回患者以进行移植。这种高度复杂的过程必然导致高成本和有限的临床应用。
3、另外，冗长的过程可能会导致细胞活力降低和淋巴细胞成熟度增加，这两者都对体内功效有害。因此，强烈需要开发不仅持续时间更短，而且产生具有提高的治疗功效的免疫细胞的过程。
技术实现思路
1、如所提供的，当前自体car细胞制造过程通常需要约7天，并且可能更长。本公开描述了可在6天或甚至4天内（或在富集步骤后的5天或甚至3天内）完成的改进过程。在各种示例中，5天的过程（即，富集后的5天）包括转导准备和具体实施步骤，其中更多数量的淋巴细胞与载体接触，该载体固定在包被于密闭系统的内表面的重组纤连蛋白上。这种改进的转导程序允许大大缩短转导后细胞扩增步骤。
2、又另一种完全不需要转导后扩增的改进过程可在初始富集
3、因此，根据本公开的一个实施方案，提供了一种用于制备转导的淋巴细胞的方法，该方法包括：将从供体受试者获得的包括淋巴细胞的样品与多核苷酸载体一起温育，以转导该淋巴细胞，从而产生转导的淋巴细胞；以及将包括该转导的淋巴细胞的该样品培养小于72小时，之后收获该淋巴细胞以产生收获的样品。
4、在一些实施方案中，该转导的淋巴细胞被培养小于48小时，之后被收获。在一些实施方案中，该转导的淋巴细胞被培养小于36小时，之后被收获。
5、在一些实施方案中，该温育是在密闭系统中执行的。在一些实施方案中，该密闭系统具有至少1500cm2的内表面积。在一些实施方案中，该密闭系统具有涂覆有重组人纤连蛋白的内表面，其中该涂覆是利用包括约1µg/ml至10µg/ml的该重组人纤连蛋白的溶液执行的。在一些实施方案中，该内表面还与包括该多核苷酸载体的第二溶液接触，其中该第二溶液具有约200ml的体积。在一些实施方案中，该涂覆还包括排出该第二溶液。在一些实施方案中，该密闭系统中的该样品包括至少1.5×108个淋巴细胞。在一些实施方案中，该样品包括至少4×108个淋巴细胞。
6、在一些实施方案中，该淋巴细胞是外周血单核细胞（pbmc）或t细胞。在一些实施方案中，该收获的样品包括cd3+细胞。在一些实施方案中，该收获的样品包括cd4+ t细胞和cd8+ t细胞。在一些实施方案中，至少20%的该收获的cd4+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过12%的该收获的cd4+ t细胞是效应记忆t细胞。在一些实施方案中，至少25%的该收获的cd4+t细胞是幼稚t细胞，并且不超过9%的该收获的cd4+ t细胞是效应记忆t细胞。在一些实施方案中，至少80%的该收获的cd4+ t细胞是ccr7+细胞。在一些实施方案中，至多20%的该收获的cd4+ t细胞是效应记忆t细胞和效应t细胞的组合。
7、在一些实施方案中，至少10%的该收获的cd8+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过30%的该收获的cd8+ t细胞是效应记忆t细胞。在一些实施方案中，至少20%的该收获的cd8+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过20%的该收获的cd8+ t细胞是效应记忆t细胞。在一些实施方案中，该幼稚t细胞被表征为ccr7+和cd45ra+。在一些实施方案中，该效应记忆t细胞被表征为ccr7-、cd45ro+和cd95+。在一些实施方案中，至少60%的该收获的cd8+ t细胞是ccr7+细胞。在一些实施方案中，至多40%的该收获的cd8+ t细胞是效应记忆t细胞和效应t细胞的组合。
8、在一些实施方案中，该方法还包括：从该供体受试者获取该淋巴细胞。在一些实施方案中，该方法还包括：富集该淋巴细胞。在一些实施方案中，该方法还包括：将该样品与淋巴细胞刺激剂接触以活化该淋巴细胞。
9、在一些实施方案中，该活化该样品是在将该样品与该多核苷酸载体一起温育之前。在一些实施方案中，该样品包括至少1×109个淋巴细胞。在一些实施方案中，该活化该样品是在将该样品与该多核苷酸载体一起温育之后。在一些实施方案中，该淋巴细胞刺激剂包括抗cd3抗体和/或抗cd28抗体。
10、在一些实施方案中，该方法还包括：在该收获之后，向受试者施用收获的淋巴细胞或冷冻该收获的淋巴细胞。在一些实施方案中，该受试者与该供体受试者相同。在一些实施方案中，向该受试者施用每千克该受试者总共10,000个至3,000,000个收获的淋巴细胞。在一些实施方案中，向该受试者施用每千克该受试者总共20,000个至400,000个收获的淋巴细胞。在一些实施方案中，利用该载体来转导至少15%的该收获的淋巴细胞。
11、在一些实施方案中，该多核苷酸载体是病毒载体。在一些实施方案中，该病毒载体是逆转录病毒载体或慢病毒载体。在一些实施方案中，该载体编码嵌合抗原受体（car）或t细胞受体（tcr）。在一些实施方案中，该car包括胞内共刺激结构域。在一些实施方案中，该胞内共刺激结构域是选自由以下组成的组的蛋白质的信号传导区域：dap-10、cd28、ox-40、4-1bb（cd137）、cd2、cd7、cd27、cd30、cd40、程序性死亡-1（pd-1）、诱导型t细胞共刺激因子（icos）、淋巴细胞功能相关抗原-1（lfa-1、cd11a/cd18）、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd247、cd276（b7-h3）、肿瘤坏死因子超家族成员14、tnfsf14、light）、nkg2c、ig α（cd79a）、fc γ受体、mhc i类分子、tnf受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞活化分子（slam蛋白）、活化nk细胞受体、btla、toll配体受体、cds、gitr、baffr、hvem（lightr）、kirds2、slamf7、nkp80（klrf1）、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8 α、cd8 β、il2r β、il2r γ、il7r α、itga4、vla1、cd49a、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad（cd11d）、itgae（cd103）、itgal（cd11a）、itgam（c本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于制备转导的淋巴细胞的方法，所述方法包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述转导的淋巴细胞被培养小于48小时，之后被收获。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述转导的淋巴细胞被培养小于36小时，之后被收获。
4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述温育是在密闭系统中执行的。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述密闭系统具有至少1500cm2的内表面积。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述密闭系统具有涂覆有重组人纤连蛋白的内表面，其中所述涂覆是利用包括约1µg/ml至10µg/ml的所述重组人纤连蛋白的溶液执行的。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述内表面还与包括所述多核苷酸载体的第二溶液接触，其中所述第二溶液具有约200mL的体积。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述涂覆还包括排出所述第二溶液。
9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其中所述密闭系统中的所述样品包括至少1.5×108个淋巴细胞。
10.根据权利要求8所述的方法，其中
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞是外周血单核细胞（PBMC）或T细胞。
12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述收获的样品包括CD3+细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述收获的样品包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中至少20%的所述CD4+ T细胞是幼稚T细胞，并且不超过12%的所述CD4+ T细胞是效应记忆T细胞。
15.根据权利要求14所述的方法，其中至少25%的所述CD4+ T细胞是幼稚T细胞，并且不超过9%的所述CD4+ T细胞是效应记忆T细胞。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中至少10%的所述CD8+ T细胞是幼稚T细胞，并且不超过30%的所述CD8+ T细胞是效应记忆T细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其中至少20%的所述CD8+ T细胞是幼稚T细胞，并且不超过20%的所述CD8+ T细胞是效应记忆T细胞。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述幼稚T细胞被表征为CCR7+和CD45RA+。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其中所述效应记忆T细胞被表征为CCR7-、CD45RO+和CD95+。
20.根据权利要求13所述的方法，其中至少80%的所述CD4+ T细胞是CCR7+细胞。
21.根据权利要求13所述的方法，其中至少60%的所述CD8+ T细胞是CCR7+细胞。
22.根据权利要求13所述的方法，其中至多20%的所述CD4+ T细胞是效应记忆T细胞和效应T细胞的组合。
23.根据权利要求13所述的方法，其中至多40%的所述CD8+ T细胞是效应记忆T细胞和效应T细胞的组合。
24.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：从所述供体受试者获取所述淋巴细胞或富集所述淋巴细胞。
25.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：将所述样品与淋巴细胞刺激剂接触以活化所述淋巴细胞。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述活化所述样品是在将所述样品与所述多核苷酸载体一起温育之前。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述样品包括至少1×109个淋巴细胞。
28.根据权利要求25所述的方法，其中活化所述样品是在将所述样品与所述多核苷酸载体一起温育之后。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞刺激剂包括抗CD3抗体和/或抗CD28抗体。
30.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：在所述收获之后，向受试者施用所述收获的淋巴细胞或冷冻所述收获的淋巴细胞。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述受试者与所述供体受试者相同。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中向所述受试者施用每千克所述受试者总共10,000个至1,000,000个收获的淋巴细胞。
33.根据权利要求28所述的方法，其中向所述受试者施用每千克所述受试者总共20,000个至400,000个收获的淋巴细胞。
34.根据权利要求28或29所述的方法，其中利用所述载体来转导至少15%的所述收获的淋巴细胞。
35.根据任一前述权利要求所述的...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于制备转导的淋巴细胞的方法，所述方法包括
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述转导的淋巴细胞被培养小于48小时，之后被收获。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述转导的淋巴细胞被培养小于36小时，之后被收获。
4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述温育是在密闭系统中执行的。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述密闭系统具有至少1500cm2的内表面积。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述密闭系统具有涂覆有重组人纤连蛋白的内表面，其中所述涂覆是利用包括约1µg/ml至10µg/ml的所述重组人纤连蛋白的溶液执行的。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述内表面还与包括所述多核苷酸载体的第二溶液接触，其中所述第二溶液具有约200ml的体积。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述涂覆还包括排出所述第二溶液。
9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其中所述密闭系统中的所述样品包括至少1.5×108个淋巴细胞。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述样品包括至少4×108个淋巴细胞。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞是外周血单核细胞（pbmc）或t细胞。
12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述收获的样品包括cd3+细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述收获的样品包括cd4+ t细胞和cd8+ t细胞。
14.根据权利要求13所述的方法，其中至少20%的所述cd4+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过12%的所述cd4+ t细胞是效应记忆t细胞。
15.根据权利要求14所述的方法，其中至少25%的所述cd4+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过9%的所述cd4+ t细胞是效应记忆t细胞。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中至少10%的所述cd8+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过30%的所述cd8+ t细胞是效应记忆t细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其中至少20%的所述cd8+ t细胞是幼稚t细胞，并且不超过20%的所述cd8+ t细胞是效应记忆t细胞。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述幼稚t细胞被表征为ccr7+和cd45ra+。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其中所述效应记忆t细胞被表征为ccr7-、cd45ro+和cd95+。
20.根据权利要求13所述的方法，其中至少80%的所述cd4+ t细胞是ccr7+细胞。
21.根据权利要求13所述的方法，其中至少60%的所述cd8+ t细胞是ccr7+细胞。
22.根据权利要求13所述的方法，其中至多20%的所述cd4+ t细胞是效应记忆t细胞和效应t细胞的组合。
23.根据权利要求13所述的方法，其中至多40%的所述cd8+ t细胞是效应记忆t细胞和效应t细胞的组合。
24.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：从所述供体受试者获取所述淋巴细胞或富集所述淋巴细胞。
25.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：将所述样品与淋巴细胞刺激剂接触以活化所述淋巴细胞。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述活化所述样品是在将所述样品与所述多核苷酸载体一起温育之前。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述样品包括至少1×109个淋巴细胞。
28.根据权利要求25所述的方法，其中活化所述样品是在将所述样品与所述多核苷酸载体一起温育之后。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述淋巴细胞刺激剂包括抗cd3抗体和/或抗cd28抗体。
30.根据任一前述权利要求所述的方法，所述方法还包括：在所述收获之后，向受试者施用所述收获的淋巴细胞或冷冻所述收获的淋巴细胞。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述受试者与所述供体受试者相同。
32.根据权利要求30或31所述的方法，其中向所述受试者施用每千克所述受试者总共10,000个至1,000,000个收获的淋巴细胞。
33.根据权利要求28所述的方法，其中向所述受试者施用每千克所述受试者总共20,000个至400,000个收获的淋巴细胞。
34.根据权利要求28或29所述的方法，其中利用所述载体来转导至少15%的所述收获的淋巴细胞。
35.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述多核苷酸载体是病毒载体。
36.根据权利要求31所述的方法，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体或慢病毒载体。
37.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述载体编码嵌合抗原受体（car）或t细胞受体（tcr）。
38.根据权利要求34所述的方法，其中所述car包括胞内共刺激结构域。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述胞内共刺激结构域是选自由以下组成的组的蛋白质的信号传导区域：dap-10、cd28、ox-40、4-1bb（cd137）、cd2、cd7、cd27、...
【专利技术属性】
技术研发人员：W·哈索，Q·蔡，T·阮伊普，HC·蔡，C·沃伦，M·杰拉戈斯安，
申请(专利权)人：凯德药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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