【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养，特别是涉及一种提高姜荷花再生植株成功率的方法。
技术介绍
1、姜荷花突变品种多，属内各种染色体倍性不一致情况普遍，常规的杂交育种的手段效率低下。姜荷花新品种主要依靠诱变选育，将性状优良的个体筛选后再进行无性扩繁以保留其优秀性状。姜荷花的无性扩繁手段主要为组织培养，目前姜荷花组培外植体主要选择小球、茎尖或球茎，但这些外植体体积大、质地疏松、栽培过程中与土壤直接接触，因此组织内富含内生菌，虽然诱导率高，但存在污染率高、成功率低的问题，在多数情况下难以通过较少的起始量成功扩繁。在姜荷花新品种培育过程中，田间筛选得到的优良个体往往基数小，组培成功率低对优良个体的迅速扩繁极为不利。因此，提高姜荷花再生过程中的成功率则尤为重要，进而可以满足选育过程中以无性繁殖方式克隆大量植株的需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种提高姜荷花再生植株成功率的方法，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术以姜荷花地下块茎上的隐芽为起始外植体，进行离体组织培养，可诱导成完整的再生植株，显著降低外植体接种步骤中的污染率，并经过增殖、生根及移栽成苗后，可获得大量再生植株表型一致性高、遗传稳定性好的姜荷花种苗。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种提高姜荷花再生植株成功率的方法，包括如下步骤：
4、(1)选取根茎饱满且未达花期的姜荷花植株，割开叶基部与根茎相连的部分，暴露宿存在叶基部的隐芽；
5、本
6、(2)对所述宿存在叶基部的隐芽进行切取，仅保留隐芽周围2-3mm的组织和根茎表面的韧皮部，获得外植体；
7、(3)将所述外植体消毒后，接种至不定芽诱导培养基中，诱导培养得到不定芽；
8、(4)将所述不定芽转接至增殖培养基中，增殖培养得到丛生芽；
9、(5)将所述丛生芽转接至新的增殖培养基中，继代培养得到组培苗，经炼苗，得到姜荷花再生植株；
10、所述增殖培养基为：ms培养基+5.8g/l卡拉胶+30g/l蔗糖+5mg/l 6-ba+0.5mg/lnaa，ph＝5.8。
11、优选的，所述外植体的长度为6-8mm。
12、优选的，所述消毒的过程包括流水冲洗、次氯酸钠溶液消毒、乙醇溶液消毒、升汞溶液消毒。
13、本专利技术中，所述流水冲洗的时间为2-3小时。
14、本专利技术中，所述次氯酸钠溶液的质量浓度为10％，消毒时间为1min。
15、本专利技术中，所述乙醇溶液的体积浓度为70％，消毒时间为1min。
16、本专利技术中，所述升汞溶液的体积浓度为1‰，消毒时间为7min。
17、优选的，所述次氯酸钠溶液消毒后，所述乙醇溶液消毒后，所述升汞溶液消毒后，均采用无菌水冲洗，以便于洗脱次氯酸钠溶液、乙醇溶液和升汞溶液。
18、本专利技术中，所述次氯酸钠溶液消毒后，采用无菌水冲洗1次。
19、本专利技术中，所述乙醇溶液消毒后，采用无菌水冲洗1次。
20、本专利技术中，所述升汞溶液消毒后，采用无菌水冲洗5次。
21、本专利技术中，所述外植体消毒后，接种前，适当切除褐化组织。
22、优选的，所述不定芽诱导培养基为：ms培养基+5g/l卡拉胶，ph＝5.8。
23、优选的，所述诱导培养的条件为：24℃±2℃，暗培养；时间为3-5d。
24、优选的，所述增殖培养的条件为：24℃±2℃，光照10±0.5h/d，光强3000-5000lx；时间为30-40d。
25、优选的，所述继代培养的条件为：24℃±2℃，光照10±0.5h/d，光强3000-5000lx。
26、优选的，所述继代培养至组培苗的规格为7-10cm长，基部茎宽0.7-1cm。
27、本专利技术中，所述炼苗采用常规炼苗管理方式；在本专利技术一些实施方式中，所述炼苗时的培养基质为泥炭，培养湿度为90％，培养时间为1-2周。
28、本专利技术公开了以下技术效果：
29、本专利技术选取姜荷花抽花期前植株中宿存在叶基部的隐芽作为起始外植体，组织组成主要为营养根表层的韧皮部和隐芽，外植体体积小、活性高，可诱导形成姜荷花组培苗，显著降低外植体接种及诱导过程中的污染率，两周内的污染率仅为8.6％，极大的提高了姜荷花外植体建立组培苗的成功率。姜荷花的不定芽在增殖培养基上继代增殖，增殖系数达到4.7以上，生长速度快，生长态势强，且不需要生根配样，去除培养基后即可栽种炼苗，培养过程简单，可获得大量再生植株表型一致性高、遗传稳定性好的姜荷花种苗。
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1.一种提高姜荷花再生植株成功率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外植体的长度为6-8mm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒的过程包括流水冲洗、次氯酸钠溶液消毒、乙醇溶液消毒、升汞溶液消毒。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述次氯酸钠溶液消毒后，所述乙醇溶液消毒后，所述升汞溶液消毒后，均采用无菌水冲洗。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基为：MS培养基+5g/L卡拉胶，pH＝5.8。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导培养的条件为：24℃±2℃，暗培养；时间为3-5d。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖培养的条件为：24℃±2℃，光照10±0.5h/d，光强3000-5000LX；时间为30-40d。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述继代培养的条件为：24℃±2℃，光照10±0.5h/d，光强3000-5000LX。
9.根据权利要
...【技术特征摘要】
1.一种提高姜荷花再生植株成功率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外植体的长度为6-8mm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒的过程包括流水冲洗、次氯酸钠溶液消毒、乙醇溶液消毒、升汞溶液消毒。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述次氯酸钠溶液消毒后，所述乙醇溶液消毒后，所述升汞溶液消毒后，均采用无菌水冲洗。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基为：ms培养基+5g/l卡拉胶，ph＝5.8。
【专利技术属性】
技术研发人员：谌振，黄素荣，杨光穗，冷青云，罗悦，于靖，奚良，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：
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