【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，尤其是基因测序，具体涉及一种可先捕获后测序的芯片及其测序方法。
技术介绍
1、随着基因测序技术的发展，下一代测序技术(next generat ion sequenc i ng，ngs)的应用在临床实践中越来越广泛，如肿瘤的靶向治疗与耐药监测，遗传疾病的筛查与诊断，急危重症领域的病原诊断等诸多方面。发展至今，ngs主要有mngs和tngs两种技术路线。mngs是对样本中所有核酸序列进行测序，覆盖广，缺点是会测到大量除目标序列外的序列，造成数据浪费的同时也会结果判断造成负面影响。tngs是对样本中目标序列进行捕获后再进行测序，靶标明确，可以去除非目标序列对测序的影响，大幅降低成本。
2、目前被广泛使用的tngs路线有多重pcr和杂交探针捕获。多重pcr局限于引物可能会相互结合，pcr产物之间会互相竞争资源，能同时捕获的靶标数量有限。杂交探针可以同时对大量不同靶标进行捕获，但是杂交探针容易捕获含有部分靶标序列的片段，且试剂成本和操作复杂度要远高于多重pcr。因此，亟需开发一种操作简单且降低成本的测序方法。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种全新的t-ngs测序芯片，可以适配多种应用场景，如病原检测、肿瘤诊断、遗传检测等，配合全新的测序方法reci pe，完成先捕获富集后测序，大幅增加靶标种类和提高特异性的同时，降低测序成本。
2、本专利技术的一个方面提供一种能够先捕获后测序的芯片，其特征在于：所述芯片包括上下两个基底，所述两个基底内
3、在一些实施方式中，所述杂交探针为杂交捕获目标序列的特异序列，所述杂交探针的最后一个碱基3’端为-oh。
4、在一些实施方式中，所述基底的材料选自玻璃、pdms、硅片、聚甲基丙烯酸甲酯或聚四氟乙烯。
5、在一些实施方式中，所述酶切位点为ecor1酶切位点。
6、本专利技术的另一个方面提供一种测序方法，使用如前所述的芯片进行测序，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
7、步骤1：对单链文库进行环化处理；
8、步骤2：环化处理后的文库进入芯片，杂交探针捕获目标序列；
9、步骤3：目标序列进行滚环扩增，在p7’上形成一条含有n个目标序列拷贝的长链；
10、步骤4：加入识别酶切位点的酶，酶切释放n个独立的含有目标序列的文库，并去除p7’上的杂交探针；
11、步骤5：含有目标序列的文库重新与芯片上的p5序列杂交，进行桥式扩增，进行测序。
12、在一些实施方式中，所述识别酶切位点的酶为ecor1酶。
13、在一些实施方式中，所述步骤4还加入酶切探针1和酶切探针2。
14、本专利技术的另一个方面提供所述的芯片在制备t-ngs测序试剂盒中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是：
16、1.本专利技术在芯片上完成t-ngs，相较于常规tngs(多重pcr、探针捕获)，具备拥有更高捕获效率的潜力，多重pcr和探针捕获受限于引物、探针设计和使用数量。
17、2.本专利技术捕获探针设计简单，由于拥有同常规tngs一样的捕获能力，可以大幅降低测序成本。
18、3.本专利技术使用常规文库，会比需要pcr的常规t-ngs，抗污染能力更强。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种能够先捕获后测序的芯片，其特征在于，所述芯片包括上下两个基底，所述两个基底内表面均接有P5序列和带有杂交探针的P7’序列；所述杂交探针和P7’序列之间通过一段酶切位点连接。
2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述杂交探针为杂交捕获目标序列的特异序列，所述杂交探针的最后一个碱基3’端为-OH。
3.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述基底的材料选自玻璃、PDMS、硅片、聚甲基丙烯酸甲酯或聚四氟乙烯。
4.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述酶切位点为EcoR1酶切位点。
5.一种测序方法，使用如权利要求1-4任一项所述的芯片进行测序，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的测序方法，其特征在于，所述识别酶切位点的酶为EcoR1酶。
7.根据权利要求5所述的测序方法，其特征在于，所述步骤4还加入酶切探针1和酶切探针2。
8.如权利要求1-4任一项所述的芯片在制备t-NGS测序试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种能够先捕获后测序的芯片，其特征在于，所述芯片包括上下两个基底，所述两个基底内表面均接有p5序列和带有杂交探针的p7’序列；所述杂交探针和p7’序列之间通过一段酶切位点连接。
2.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述杂交探针为杂交捕获目标序列的特异序列，所述杂交探针的最后一个碱基3’端为-oh。
3.根据权利要求1所述的芯片，其特征在于，所述基底的材料选自玻璃、pdms、硅片、聚甲基丙烯酸甲酯或聚四氟乙烯。
4.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴鹏飞，李若南，张燕，王营惠，
申请(专利权)人：杭州易速微控基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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