【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，特别是涉及一种鉴定纸质酒盒内霉菌种类的方法。
技术介绍
1、霉菌在温暖潮湿的气候中生长非常迅速，尤其是西南潮湿的环境十分适宜微生物的生长，在霉菌最适生长的温湿度范围内，许多纸盒包装在仓储和运输过程中容易受到霉菌污染，这不仅影响外观，也会外售的产品被退回，令厂家损失惨重。业界已经采取了多种防霉措施，包括使用防霉剂、改善存储条件等。但在实际操作中，由于缺乏有效的霉菌种类鉴定方法，往往难以针对性地采取防治措施。在霉菌种类鉴定方面，传统的实验室鉴定方法如显微镜观察、培养分离等，虽然准确但耗时较长，不利于快速应对霉菌污染问题。此外，一些快速鉴定方法如基于pcr的dna指纹技术，虽然缩短了鉴定时间，但成本较高，且对操作人员的技术要求较高，不适合广泛应用。
2、现有技术在霉菌鉴定上存在的主要问题包括：鉴定速度慢、成本高、操作复杂，以及缺乏针对纸质酒盒内特定环境的快速准确鉴定方法。这些问题限制了纸质酒盒在潮湿环境下的广泛应用，并增加了酒类企业的运营成本。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种鉴定纸质酒盒内霉菌种类的方法，本专利技术从四川一家酒盒包装厂中存放的包装盒内部取样，分离出多种霉菌，并对其进行镜检及分子生物学鉴定，获取纸质酒盒内的霉菌群落组成，为纸质酒盒霉变机理提供明确的研究对象，提高研究的针对性，为后续的酒盒防霉方案设计提供理论基础。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种鉴
4、1)将纸质酒盒霉变部位与生理盐水混合、振荡处理，得到混合菌液；
5、所述纸质酒盒霉变部位的质量与生理盐水的体积比为1g:99ml；
6、所述振荡处理的条件包括：在温度为28℃和转速为200～250rpm下振荡处理6h；
7、2)将所述步骤1)得到的混合菌液涂布在pda培养基上培养，得到菌落；
8、所述pda培养基的组分为：马铃薯浸粉5g、葡萄糖20g、琼脂15g、氯霉素0.1g、蒸馏水1000ml，ph值为7.0～8.0；
9、所述培养的条件包括：在28℃下培养24h，再倒置培养48h；
10、3)将所述步骤2)得到的菌落与生理盐水混合，得到稀释菌液；
11、4)将所述步骤3)得到的稀释菌液涂布在pda培养基上进行纯化培养，得到纯化菌落；
12、所述纯化培养的条件包括：在28℃下培养24h，再倒置培养72h；
13、5)对所述步骤4)得到的纯化菌落进行形态学观察和its鉴定，得到纸质酒盒内霉菌种类。
14、优选的，所述步骤5)形态学观察的指标包括菌落大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明度。
15、优选的，所述步骤5)its鉴定使用的引物对的核苷酸序列如seq idno.1～2所示。
16、优选的，使用引物对进行扩增，所述扩增的体系为：pcr mix 21μl、上游引物1μl、下游引物1μl和模板2μl。
17、优选的，所述扩增的程序为：96℃5min；96℃20s，56℃30s，72℃30s，循环35次；72℃10min。
18、为分析该酒盒包装厂酒盒内酒盒中霉菌群落的组成，本专利技术提供一种能有效鉴定纸质酒盒内霉菌种类的方法。本专利技术将酒盒内有微生物菌落的区域采样后接种到以马铃薯为唯一营养来源的固体培养基上，在最适温度下进行培养。挑取霉菌菌落进行纯化培养。对霉菌的菌落和菌体进行形态学鉴定，以及对纯化后的霉菌及分子生物学鉴定。对测序结果进行its序列分析，得到详细的霉菌群落的种类和名称。
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1.一种鉴定纸质酒盒内霉菌种类的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)形态学观察的指标包括菌落大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明度。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)ITS鉴定使用的引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1～2所示。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使用引物对进行扩增，所述扩增的体系为：PCR Mix 21μL、上游引物1μL、下游引物1μL和模板2μL。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述扩增的程序为：96℃5min；96℃20s，56℃30s，72℃30s，循环35次；72℃10min。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定纸质酒盒内霉菌种类的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)形态学观察的指标包括菌落大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明度。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)its鉴定使用的引物对的核苷酸序列如seq id no.1～2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜娟，罗丁，高天容，刘强，姜育恒，窦煜博，宋海燕，
申请(专利权)人：泸州老窖股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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