【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋微生物，特别是涉及一种海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法。
技术介绍
1、蛋白酶在饲料行业中的应用具有多重益处。首先，它能将大分子蛋白质分解成易消化吸收的小分子多肽和氨基酸，从而提高蛋白质的消化率和生物利用率。这不仅有助于改善动物的生长性能，如增加日增重和降低料重比，还能减少氮排放，降低环境污染。此外，蛋白酶还能促进生物活性肽的形成，这些肽具有营养和生理调节功能，如抗菌、抗氧化等。在低蛋白饲料中添加蛋白酶，还能改善肠道健康，增加肠道杯状细胞数量，提高绒毛高度与隐窝深度之比，从而优化肠道微生物环境。这些作用不仅提升了饲料原料的利用效率，还带来了经济效益，尤其是在水产养殖中，通过提高蛋白原料的利用率，减少了对蛋白质资源的依赖。
2、海洋来源的蛋白酶产生菌株具有一些独特的特点，这些特点使得它们在工业应用中具有潜在的优势。本专利技术针对现有的海洋来源的蛋白酶产生菌株，优化改进培养方法，以期提高蛋白酶的产生。
技术实现思路
1、本专利技术在于公开一种海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，包括以下步骤：
2、s01，制备培养基；
3、s02，菌种活化；
4、s03，种子液培养；
5、s04，蛋白酶发酵培养，包括加入提高培养液中氯化钠浓度的激活剂组分和进行超声处理的步骤。
6、在本专利技术的一些实施方式中，s01中，所述培养基包括活化培养基、种子培养液和发酵培养液，其中，所述活化培养基中的氯化钠的浓度为30-
7、在本专利技术的一些实施方式中，s01中，所述培养基的配方为：
8、活化培养基：蛋白胨 8.0-12.0 g/l，牛肉浸膏 2.0-4.0 g/l，氯化镁 1.0-3.0 g/l，硫酸镁 4.0-5.0 g/l，氯化钾 0.5-1.0 g/l，氯化钙 1.0-1.5 g/l，氯化钠 30-4.0 g/l，琼脂适量，ph 6.5-7.5；
9、种子培养液：蛋白胨 8.0-12 g/l，酵母浸粉 4.0-6.0 g/l，氯化钠 20-30 g/l，ph6.5-7.5；
10、发酵培养液：葡萄糖 25.0-35.0 g/l，蔗糖 25.0-35.0 g/l，蛋白胨 15.0-25.0g/l，硫酸铵 1.5-2.5 g/l，磷酸二氢钾 0.5-1.5 g/l，硫酸镁 0.5-1.5 g/l，硫酸锰 0.05-0.15 g/l，硫酸锌 0.005-0.015 g/l，氯化钠 30.0-40.0 g/l，ph 6.5-7.5。
11、在本专利技术的一些优选的实施方式中，s01中，所述培养基的配方为：
12、活化培养基：蛋白胨 10.0 g/l，牛肉浸膏 3.0 g/l，氯化镁 2.0 g/l，硫酸镁 4.5g/l，氯化钾 0.8 g/l，氯化钙 1.2 g/l，氯化钠 35 g/l，琼脂适量，ph 7.0-7.2；
13、种子培养液：蛋白胨 10.0 g/l，酵母浸粉 5.0 g/l，氯化钠 25 g/l，ph 7.0-7.2；
14、发酵培养液：葡萄糖 30.0 g/l，蔗糖 30.0 g/l，蛋白胨 20.0 g/l，硫酸铵 2.0g/l，磷酸二氢钾 1.0 g/l，硫酸镁 1.0 g/l，硫酸锰 0.01 g/l，硫酸锌 0.01 g/l，氯化钠35 g/l，ph 7.0-7.2。
15、在本专利技术的一些实施方式中，s02中，将菌种从超低温冰箱取出，接种到活化培养基，培养，传代。
16、在本专利技术的一些实施方式中，s02中，接种到活化培养基后，28-32℃培养4-8 h，传代1-3次。
17、在本专利技术的一些实施方式中，s03中，接种到种子培养液，摇床培养。
18、在本专利技术的一些实施方式中，s03中，接种环接种1环活化好的菌株到种子培养液。
19、在本专利技术的一些实施方式中，s03中，摇床100-200rpm 28-32℃培养10-14 h。
20、在本专利技术的一些实施方式中，s04中，种子液接种到发酵培养液，摇床培养。
21、在本专利技术的一些实施方式中，s04中，种子液以2-10%（v/v）的接种量接种到发酵培养液。
22、在本专利技术的一些实施方式中，s04中，摇床100-200rpm 28-32℃培养10-14 h。
23、在本专利技术的一些实施方式中，还包括s05制备粗蛋白酶液步骤：发酵液离心，过滤，得到粗蛋白酶液。
24、在本专利技术的一些实施方式中，s04中，所述激活剂包括氯化钠，加入激活剂至培养液中氯化钠的浓度大于40 g/l；优选为43-47 g/l；进一步优选为45 g/l；
25、或，s04中，所述激活剂包括氯化钠、吐温80和乙二醇中的至少两种，优选为包括氯化钠、吐温80和乙二醇，进一步优选为加入激活剂至培养液中氯化钠的浓度大于40 g/l，吐温80的浓度为0.4-0.6 ml/l，乙二醇的浓度为0.005-0.015 ml/l。
26、在本专利技术的一些实施方式中，s04中，所述超声处理为50w超声波处理2-3s，间隔10s，重复，共计4-6次。
27、有益效果：
28、本专利的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，通过提高氯化钠的浓度和超声处理来促进培养中的海洋菌蛋白酶活力的提高。研究发现超声处理的作用依赖于足够的氯化钠浓度。
29、研究中还出乎预料的发现，添加氯化钠、吐温80和乙二醇的复合激活剂可以进一步的提高蛋白酶活力。
30、本专利的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，可以显著提高得到的发酵液的蛋白酶活力，可以大幅降低饲料中使用粗酶液降解蛋白的用量和降低成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S01中，所述培养基包括活化培养基、种子培养液和发酵培养液，其中，所述活化培养基中的氯化钠的浓度为30-40 g/L，种子培养液中的氯化钠的浓度为1-10 g/L，发酵培养液中的氯化钠的浓度为30-40 g/L。
3.根据权利要求2所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S01中，所述培养基的配方为：
4.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S02中，将菌种从超低温冰箱取出，接种到活化培养基，培养，传代。
5.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S03中，接种到种子培养液，摇床培养。
6.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S04中，种子液接种到发酵培养液，摇床培养。
7.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，还包括S05制备粗蛋
8.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S04中，所述激活剂包括氯化钠，加入激活剂至培养液中氯化钠的浓度大于40 g/L；
9.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S04中，所述激活剂包括氯化钠、吐温80和乙二醇，加入激活剂至培养液中氯化钠的浓度大于40 g/L，吐温80的浓度为0.4-0.6 mL/L，乙二醇的浓度为0.005-0.015 mL/L。
10.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，S04中，所述超声处理为50W超声波处理2-3s，间隔10s，重复，共计4-6次。
...【技术特征摘要】
1.一种海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，s01中，所述培养基包括活化培养基、种子培养液和发酵培养液，其中，所述活化培养基中的氯化钠的浓度为30-40 g/l，种子培养液中的氯化钠的浓度为1-10 g/l，发酵培养液中的氯化钠的浓度为30-40 g/l。
3.根据权利要求2所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，s01中，所述培养基的配方为：
4.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，s02中，将菌种从超低温冰箱取出，接种到活化培养基，培养，传代。
5.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方法，其特征在于，s03中，接种到种子培养液，摇床培养。
6.根据权利要求1所述的海洋来源的蛋白酶产生菌株的培养方...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐启民，李军训，宋洪宁，任小杰，张鑫，孙传飞，韩伟，
申请(专利权)人：山东泰山生力源集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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