【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种小根蒜多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
1、心血管疾病是非传染性疾病中死亡率最高的疾病，据2021年who统计，自2000年以来，全球心血管疾病死亡率增加25％，2019年死亡人数达到1790万人，占所有死亡人数的32％，已然成为严重威胁人类健康的“头号杀手”。其中，动脉粥样硬化(as)正是引发心血管疾病高发生率高死亡率的主要原因。临床治疗as常采用药物治疗和手术治疗，虽然能缓解症状，但是无法逆转，长期服用又不可避免产生食欲下降、腹痛、肝损伤、横纹肌溶解和神经系统损伤等多种不良反应，而手术介入只能暂时改善血流状况，易出现再狭窄和血栓等并发症。中药多糖具有良好的生物相容性、丰富的药理活性，包括抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗炎等功效。多糖活性与其结构特征，如分子量、构型、单糖组成和糖苷键链接类型等密切相关，找到针对预防和改善as的多糖，对于临床上as相关的心血管疾病的治疗具有重要意义。
2、薤白为百合科葱属植物小根蒜(allium macrostemon bunge)或薤(alliumchinense g.don)的干燥鳞茎，薤白味辛、苦，性温，具有通阳散结、舒展气机、顺畅气滞之功效，是中医长期以来治疗胸痹心痛、脘腹疼痛、胀满不适、泻痢后重等症候的良药。
3、目前，小根蒜多糖组成复杂，目前也报道了一些均一多糖，但是多以葡萄糖、或是果糖为主的均一多糖，且不清楚这些均一多糖能否在体内发挥改善as的药理活性。如果能找到对预防或干预as功效的小根蒜均一多糖，将为小根蒜的开发和应用提
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提出一种小根蒜多糖、制备方法及应用。
2、为了实现本专利技术的目的，采用如下技术方案：
3、一种小根蒜多糖制备方法，包括如下步骤：
4、s1.将小根蒜采用提取与纯化方式得到粗多糖，分别为ambp 40、ambp 60和ambp80；
5、s2.分离制备多糖组分ambp60-1；
6、s3.分离制备小根蒜均一多糖ambp-1a。
7、优选的，所述步骤s1中，称取干燥小根蒜200g，精密称定，按料液比1：20(w/v)加入95％乙醇100℃加热回流1h，重复3次以除去低极性杂质，纱布过滤收集滤渣，按料液比1:20加入蒸馏水，沸水提取2h，重复3次，在4500转离心后10分钟，合并上清液，减压浓缩至原体积的1/4，向浓缩液中边搅拌边缓慢加入95％乙醇至终浓度分别为40％、60％和80％，静置过夜。将不同醇沉部位的沉淀物冻干，得到粗多糖，分别命名为ambp 40、ambp 60和ambp80。
8、优选的，所述步骤s2中，将400mg ambp 60溶于10ml蒸馏水中，离心，取上清液，通过deae sepharose fast flow柱(3.0×60cm)进行纯化，依次使用不同浓度的氯化钠溶液(0、0.1m、0.3m、0.5m)进行梯度洗脱，流速1.5ml/min，用自动部分收集器收集各梯度的洗脱液，通过苯酚-硫酸法在490nm波长下测定各管中洗脱液的糖含量，以收集管数为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制多糖的洗脱曲线，合并收集相同的多糖流分，浓缩后冷冻干燥，得到一个主要的多糖组分ambp60-1。
9、优选的，所述步骤s3中，通过sephadex g-50柱(20.0×1200cm)纯化，用超纯水洗脱，流速0.5ml/min，通过苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，合并相同的多糖流分，浓缩后冷冻干燥，得到小根蒜均一多糖，命名为ambp-1a。
10、优选的，所述ambp-1a主要由半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为0.836:0.158:0.006，是一种中性杂多糖。
11、进一步优选的，ambp-1a的主要骨架由→4)-β-d-glcp-(1→4)-β-d-galp-(1→4)-β-d-galp-(1→4)-β-d-galp-(1→4)-α-d-galp-(1→5)-α-l-araf-(1→重复单元组成，分支结构分别为β-d-galp-(1→3)-β-d-glcp-(1→和β-d-galp-(1→，与→4,6)-β-d-glcp-(1→的c-6相连和→2,4)-α-d-galp-(1→的c-2相连。
12、本专利技术的另一种技术方案：一种小根蒜多糖在制备防治动脉粥样硬化或改善血脂水平药物中的应用，所述小根蒜多糖为ambp-1a。
13、优选的，所述小根蒜多糖在制备防治动脉粥样硬化或改善血脂水平药物中的应用，所述ambp-1a调节肠道菌群、短链脂肪酸发挥改善动脉粥样硬化作用。
14、进一步优选的，所述小根蒜多糖在制备防治动脉粥样硬化或改善血脂水平药物中的应用，所述药物的剂型为胶囊、片剂、滴丸、粉剂或溶液剂中的任意一种。
15、再进一步优选的，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
16、有益效果：
17、相比目前从小根蒜中报道的均一多糖结构特征，本方法分离得到的ambp-1a结构更新颖，单糖组成大部分为半乳糖，含少量葡萄糖和阿拉伯糖；且其糖苷键连接方式主要为→4)-galp-(1→，占比高达72.57％，而之前报道的薤白(小根蒜、薤)均一多糖不具这种结构特点。多糖的结构特征与活性相关，ambp-1a能有效改善对apoe-/-动脉粥样硬化模型小鼠的血脂水平、动脉粥样斑块等药理活性，通过调控肠道菌群组成、短链脂肪酸以干预动脉粥样硬化，而目前已报道的小根蒜均一多糖未见有此活性。
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1.一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，步骤S1中，称取干燥小根蒜200 g，精密称定，按料液比1：20（w/v）加入95%乙醇100℃加热回流1 h，重复3次以除去低极性杂质，纱布过滤收集滤渣，按料液比1:20 加入蒸馏水，沸水提取2 h，重复3次，在4500转离心后10分钟，合并上清液，减压浓缩至原体积的1/4，向浓缩液中边搅拌边缓慢加入95%乙醇至终浓度分别为40%、60%和80%，静置过夜；将不同醇沉部位的沉淀物冻干，得到粗多糖，分别命名为AMBP 40、AMBP 60和AMBP 80。
3.根据权利要求2所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，将400mg AMBP 60溶于10 mL蒸馏水中，离心，取上清液，通过DEAE Sepharose Fast Flow柱进行纯化，依次使用不同浓度的氯化钠溶液进行梯度洗脱，流速1.5 mL/min，用自动部分收集器收集各梯度的洗脱液，通过苯酚-硫酸法在490 nm波长下测定各管中洗脱液的糖含量，以收集管数为横坐标
4.根据权利要求3所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，通过Sephadex G-50柱纯化，用超纯水洗脱，流速0.5 mL/min，通过苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，合并相同的多糖流分，浓缩后冷冻干燥，得到小根蒜均一多糖，命名为AMBP-1a。
5.根据权利要求1所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，所述AMBP-1a主要由半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成，摩尔比为0.836:0.158:0.006，是一种中性杂多糖。
6.根据权利要求1所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，AMBP-1a的主要骨架由→4)-β-d-Glcp-(1→4)-β-d-Galp-(1→4)-β-d-Galp-(1→4)-β-d-Galp-(1→4)-α-d-Galp-(1→5)-α-l-Araf-(1→重复单元组成，分支结构分别为 β-d-Galp-(1→3)-β-d-Glcp-(1→和 β-d-Galp-(1→，与→4,6)-β-d-Glcp-(1→的C-6 相连和→2,4)-α-d-Galp-(1→的C-2 相连。
7.权利要求1-6中任意一项制备方法所制备出的小根蒜多糖，其特征在于，所述小根蒜多糖为AMBP-1a。
8.权利要求1-6中任意一项制备方法所制备的小根蒜多糖或权利要求7所述的小根蒜多糖在制备防治动脉粥样硬化或改善血脂水平药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述AMBP-1a调节肠道菌群和短链脂肪酸发挥改善动脉粥样硬化作用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为胶囊、片剂、滴丸、粉剂或溶液剂中的任意一种，还包括药学上可接受的辅料。
...【技术特征摘要】
1.一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，步骤s1中，称取干燥小根蒜200 g，精密称定，按料液比1：20（w/v）加入95%乙醇100℃加热回流1 h，重复3次以除去低极性杂质，纱布过滤收集滤渣，按料液比1:20 加入蒸馏水，沸水提取2 h，重复3次，在4500转离心后10分钟，合并上清液，减压浓缩至原体积的1/4，向浓缩液中边搅拌边缓慢加入95%乙醇至终浓度分别为40%、60%和80%，静置过夜；将不同醇沉部位的沉淀物冻干，得到粗多糖，分别命名为ambp 40、ambp 60和ambp 80。
3.根据权利要求2所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，所述步骤s2中，将400mg ambp 60溶于10 ml蒸馏水中，离心，取上清液，通过deae sepharose fast flow柱进行纯化，依次使用不同浓度的氯化钠溶液进行梯度洗脱，流速1.5 ml/min，用自动部分收集器收集各梯度的洗脱液，通过苯酚-硫酸法在490 nm波长下测定各管中洗脱液的糖含量，以收集管数为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制多糖的洗脱曲线，合并收集相同的多糖流分，浓缩后冷冻干燥，得到一个主要的多糖组分ambp60-1。
4.根据权利要求3所述的一种小根蒜多糖制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，通过sephadex g-50柱纯化，用超纯水洗脱，流速0.5 ml/min，通过苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线...
【专利技术属性】
技术研发人员：林培，王琦琦，王奇，姚新生，姚志红，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：
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