【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物材料，具体地，涉及一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体及其制备方法。
技术介绍
1、植物精油是从芳香植物中提取的脂溶性天然化合物，具有挥发性和丰富的香气，通常被描述为含有挥发性芳香化合物的浓缩疏水液体状物质，是由不同的单萜、单萜类、倍半萜类和其他挥发物(酯类、酮类、芳香酚类、醇类、醛类、醚类、碳氢化合物、香豆素和有机酸)组成的天然提取物。牛至精油(oregano essential oil，oeo)是从牛至中提取的淡黄色液体，是非常强效的天然抗菌剂，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有一定的抗杀作用，是最具有广谱抗菌作用的药物添加剂。由于其高效、无毒、无刺激性，可有效杀灭多种细菌和霉菌，在医药、化工和食品等领域有着广泛的应用。此外，oeo也具有一定的抗氧化活性，其主要化合物对伞花烃和γ-萜品烯可通过抑制活性氧产生酶(如脂氧合酶和黄质氧化酶)来促进其生物抗氧化活性。oeo的抗菌和抗氧化活性可归因于其中含有大量的酚类化合物，主要是精油中的香芹酚和百里香酚发挥作用。但是oeo具有挥发性强、水溶性差，且对光照、氧气、温度较为敏感等缺陷，极大地限制了其作为食品保鲜剂的应用，存在生物利用度低等问题。因此充分利用oeo良好抗氧化和抗菌活性的优点，将其开发成稳定安全的食品保鲜剂具有重要意义。
2、聚赖氨酸(poly-l-lysine，pl)是微生物代谢产物的多肽，对细菌和真菌均有抑制作用，这种抑制作用主要取决于其分子量大小。pl的抑菌机制依赖于与微生物表面的静电相互作用，通过干扰细胞物质、能量和信息的传递，破坏微生物的细
3、纳米脂质体(nanoliposomes，nls)是一种可自组装的磷脂载体系统，由带极性基团的脂类分散在溶液介质中而形成，广泛用于包封亲水性物质于水性隔室中，或者是将亲脂性和两亲性物质包封在同心磷脂层中。nls由于其具有生物相容性、生物降解性、非免疫原性、无毒、靶向缓释等优点，可用于封装抗菌药物以主动靶向菌群，是目前基于封装给药技术的良好替代方案之一。然而，nls的磷脂膜在低ph和酶的存在下会被破坏，导致被包裹的活性物质泄漏，因此可以通过静电相互作用形成静电桥来稳定nls表面。
4、目前在使用多肽表面修饰nls对酚类精油进行封装和递送方面还没有广泛的研究，此外，关于多肽作为nls表面改性剂的研究较少，其是否能增强nls的稳定性及其是否能与酚类精油发挥协同抗菌抗氧化作用还有待探讨。
技术实现思路
1、本申请是基于专利技术人对以下问题的发现和认识作出的：
2、使用多肽表面修饰nls对酚类精油进行封装和递送方面还没有广泛的研究。本专利技术采用薄膜水化超声波分散法制备酚类精油纳米脂质体，首先，专利技术人采用单因素和正交试验法优化其制备工艺，获得了包封率(高达78％)远高于现有薄膜水化超声波分散法的牛至精油纳米脂质体，然后通过静电自组装对酚类精油纳米脂质体表面进行不同浓度多肽修饰，经过对多肽修饰的酚类精油纳米脂质体的吸附率、粒径分布、ph、浊度、结构、环境稳定性、抗氧化活性和抗菌活性进行研究，专利技术人意外的发现聚赖氨酸能够有效修饰包封有牛至精油的纳米脂质体，增强牛至精油纳米脂质体的稳定性并与酚类精油发挥协同抗菌、抗氧化作用，意外的获得了包封率高，粒径均一，能够有效抑制细菌生长和繁殖，且具有强抗氧化性能的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体。
3、因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体的制备方法。根据本专利技术的实施方案，所述方法包括：(1)将大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油依次进行旋蒸、薄膜水化和超声波分散，以获得牛至精油纳米脂质体悬浮液；(2)将所述牛至精油纳米脂质体悬浮液与聚赖氨酸依次进行混合、搅拌处理以获得所述多肽修饰的酚类精油纳米脂质体。
4、专利技术人对制备酚类精油纳米脂质体的方法进行优化，根据本专利技术实施例的方法制备获得的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体具有非常高的牛至精油包封率，且聚赖氨酸能够对所述牛至精油纳米脂质体表面进行吸附，使其形成一个更加稳定的复合物，由此纳米脂质体的包封率得以进一步提高，此外，经实验验证，聚赖氨酸能够与牛至精油发挥协同抗菌、抗氧化作用，使得纳米脂质体的抗菌和抗氧化作用得以增强，且由于该纳米脂质体的成分均为可食性材料，所以其应用场景包括医疗、食品、化妆品、护肤品等领域，应用价值很高。
5、根据本专利技术的实施方案，上述纳米脂质体的制备方法还可以包括下列附加技术特征中的至少之一：
6、根据本专利技术的实施方案，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油的质量比为10：(1～2)：(4～8)。由此，能够获得牛至精油包封率远高于现有技术的酚类精油纳米脂质体。
7、根据本专利技术的实施方案，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油的质量比为10：(1.25～1.75)：(5～7)。由此，能够获得牛至精油包封率进一步提高的酚类精油纳米脂质体。
8、根据本专利技术的实施方案，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油的质量比为10：1.5：5。
9、根据本专利技术的实施方案，在所述旋蒸前，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油预先溶解于无水乙醇中。
10、根据本专利技术的实施方案，所述大豆卵磷脂的浓度为10mg/ml，和/或所述胆固醇的浓度为1.00～2.00mg/ml，和/或所述牛至精油的浓度为4～8mg/ml。
11、在本专利技术的一些具体实施例中，进行旋蒸前，称取200mg大豆卵磷脂和20～40mg胆固醇固体至50ml圆底烧瓶中，称取所述牛至精油80～160mg预先溶解于20ml无水乙醇中，所述牛至精油的浓度为4～8mg/ml，将该溶解于无水乙醇的牛至精油转移至上述50ml圆底烧瓶中，同大豆卵磷脂和胆固醇一起超声分散后进行旋蒸。
12、根据本专利技术的实施方案，所述旋蒸的温度为35℃～45℃，在一些具体的实施方案中，所述旋蒸的温度优选为40℃。所述旋蒸通过旋转蒸发器蒸发溶剂，留下一层干燥的脂质薄膜。
13、根据本专利技术的实施方案，所述薄膜水化是在表面活性剂和ph值为6.4～8.0的pbs缓冲溶液中进行的。在制备纳米脂质体的过程中，大豆卵磷脂和胆固醇可以形成脂质双层结构，这是脂质体的基本骨架。pbs(磷酸盐缓冲液)使大豆卵磷脂和胆固醇形成均匀的脂质溶液，并维持溶液的ph值在一个相对稳定的范围内，脂质的电荷状态和水合性有利于脂质体的形成，pbs的ph值范围还要满足与生物体内环境相近的需求，这有助于提高脂质体的生物相容性和减少对生物组织的潜在损害，在适宜的ph值下，还可以减少脂质成分的水解或氧化，对脂质体的形成、稳定性和功能性均至关重要。
14、根据本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油的质量比为10：(1～2)：(4～8)；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述旋蒸前，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油预先溶解于无水乙醇中；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述旋蒸的温度为35℃～45℃，优选为40℃；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述超声波分散之后，进行步骤(2)之前，对所述超声波分散之后的产物依次进行粉碎处理和离心处理；
6.一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体，其特征在于，所述纳米脂质体是采用权利要求1～5任一项所述的方法制备的。
7.根据权利要求6所述的纳米脂质体，其特征在于，牛至精油包封在所述纳米脂质体中，聚赖氨酸修饰在所述纳米脂质体的表面；
8.一种药物或保鲜剂，其特征在于，包含利用权利要求1～5任一项所述的方法制备的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体或权利要求6～7中任一项所述的多肽修饰的酚
9.利用权利要求1～5任一项所述的方法制备的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体或权利要求6～7中任一项所述的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解和/或治疗致病菌引起的相关疾病；
10.利用权利要求1～6任一项所述的方法制备的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体或权利要求7～8中任一项所述的多肽修饰的酚类精油纳米脂质体在制备生鲜食品保鲜剂中的用途，所述保鲜剂用于抑制细菌；
...【技术特征摘要】
1.一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油的质量比为10：(1～2)：(4～8)；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述旋蒸前，所述大豆卵磷脂、胆固醇和牛至精油预先溶解于无水乙醇中；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述旋蒸的温度为35℃～45℃，优选为40℃；
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述超声波分散之后，进行步骤(2)之前，对所述超声波分散之后的产物依次进行粉碎处理和离心处理；
6.一种多肽修饰的酚类精油纳米脂质体，其特征在于，所述纳米脂质体是采用权利要求1～5任一项所述的方法制备的。
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