【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种抑制乳腺癌增长的重组羟基化胶原蛋白及其制备方法与应用。
技术介绍
1、乳腺癌，mammary cancer，是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病与多种因素相关，包括遗传、生殖因素、性激素、营养与饮食、环境因素等。目前常见的治疗手段有手术治疗、放射治疗、化学治疗、内分泌治疗和靶向治疗。
2、胶原蛋白是哺乳动物中最重要和最丰富的蛋白质之一，在人体的皮肤、结缔组织和骨骼以及其它组织中发现的结构蛋白。在人体内胶原蛋白的含量约为总蛋白质的30％。胶原蛋白是一种结构蛋白，细胞外基质的主要成分。iii型胶原蛋白由三条肽链向右卷曲扭成三股螺旋状。一级结构分析表明，其多肽链很长的区段序列是由gly-x-y氨基酸序列重复而成。其中，x通常为脯氨酸，y通常为羟脯氨酸和羟赖氨酸，后两种氨基酸在其他蛋白质中很少见。
3、ddr是盘状结构域受体，discoid in domain receptors，ddrs，属于受体酪氨酸激酶，receptor tyrosine kinases，rtks的超家族成员，包含ddr1和ddr2两个成员。相关研究证实，ddr1不仅与机体正常的生长发育相关，也是促进肿瘤发生发展的重要因素，ddr1主要的结合位点是来自于天然iii型胶原蛋白中的gvmgfo序列。因天然iii型胶原蛋白中的gvmgfo序列，导致其抗肿瘤能力较弱。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种抑制乳腺癌增长的重组羟
2、本专利技术所采用的技术方案是，一种抑制乳腺癌增长的重组胶原蛋白，氨基酸序列如seq id no.1所示，核苷酸序列如seq id no.2所示。
3、所述重组胶原蛋白用于制备抗乳腺癌制剂。
4、一种具有羟基化功能且增强所述重组胶原蛋白抑制乳腺癌增长的序列，氨基酸序列如seq id no.4所示，核苷酸序列如seq id no.5所示。
5、一种表达载体，包含如seq id no.2所示的核苷酸序列。
6、一种表达载体，包含如seq id no.5所示的核苷酸序列。
7、一种宿主细胞，包含上述任一项所述的表达载体。
8、所述宿主细胞为毕赤酵母、酿酒酵母、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的任意一种。
9、利用所述宿主细胞制备重组胶原蛋白的方法，在培养基中培养所述宿主细胞，诱导重组胶原蛋白表达后进行纯化，获得重组胶原蛋白。
10、所述纯化方法选自盐析法、超滤法、亲和层析法和凝胶过滤层析法中的任意一种
11、本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种抑制乳腺癌增长的重组胶原蛋白，氨基酸序列如seq id no.1所示。专利技术人通过对全长天然iii型胶原蛋白的8个不同位点进行替换，在不改变天然全长氨基酸总长度的情况下增加gvmgfo位点个数，使原本的结合位点变为9个，同时保留端肽使其具有形成三螺旋结构的潜力。天然胶原蛋白的gvmgfo中为羟脯氨酸，而毕赤酵母不含有羟基化基因所以只能得到含有脯氨酸的gvmgfp。由于羟脯氨酸在合成过程中维持胶原蛋白的三螺旋结构及其生物学特性方面起着重要作用，具有脯氨酰4-羟化酶的哺乳动物细胞可以通过翻译后修饰产生羟基化胶原，因此通过对获得的重组胶原蛋白进行羟基化修饰，制备具有更高抑制癌细胞增殖效果且性质更稳定的重组羟基化胶原蛋白。
12、相比较于天然iii型胶原蛋白，本专利技术所述的重组羟基化胶原蛋白的抑制癌细胞增殖效果提升41％以上。通过本专利技术所述重组羟基化胶原蛋白中的模块化方法，能够制造具有与ddr靶向结合的特定全长变体，并且由于与天然胶原长度相当，具有更广阔的使用范围。目前癌症多采用化疗，在杀死癌细胞的同时也会对正常细胞造成伤害，而采用重组胶原蛋白用作乳腺癌中的治疗成分，将大大降低对人体的不良反应。
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1.一种抑制乳腺癌增长的重组胶原蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种编码如权利要求1所述重组胶原蛋白的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
3.根据权利要求1所述重组胶原蛋白的应用，其特征在于，所述重组胶原蛋白用于制备抗乳腺癌制剂。
4.一种具有羟基化功能且增强如权利要求1所述重组胶原蛋白抑制乳腺癌增长的序列，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
5.一种表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的核苷酸序列。
6.一种表达载体，其特征在于，包含如权利要求4所述的核苷酸序列。
7.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求5或权利要求6任一项所述的表达载体。
8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为毕赤酵母、酿酒酵母、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的任意一种。
9.利用权利要求7所述宿主细胞制备重组胶原蛋白的方法，其特征在于，在培养基中培养所述宿主细胞，诱导重组胶原蛋
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述纯化方法选自盐析法、超滤法、亲和层析法和凝胶过滤层析法中的任意一种。
...【技术特征摘要】
1.一种抑制乳腺癌增长的重组胶原蛋白，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.一种编码如权利要求1所述重组胶原蛋白的基因，其特征在于，核苷酸序列如seq idno.2所示。
3.根据权利要求1所述重组胶原蛋白的应用，其特征在于，所述重组胶原蛋白用于制备抗乳腺癌制剂。
4.一种具有羟基化功能且增强如权利要求1所述重组胶原蛋白抑制乳腺癌增长的序列，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.4所示，核苷酸序列如seq id no.5所示。
5.一种表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的核苷酸序列。
【专利技术属性】
技术研发人员：李伟娜，张雅倩，范代娣，董雪，周子桐，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：
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