本发明专利技术涉及一种甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg‑rep‑MBL、DNA分子、表达载体、宿主细胞，以及用途，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供了一种甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg‑rep‑MBL，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明专利技术还提供了该甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg‑rep‑MBL在制备预防或/和治疗冠状病毒感染的药物中的用途。本发明专利技术改造蛋白不与MASP2蛋白结合，从而明显减弱对补体凝集素途径的活化作用，同时保留其与甘露糖的结合特性，可以有效结合并阻断新型冠状病毒假病毒及其Delta突变株对HEK293T‑ACE2细胞的侵染，为该蛋白被设计为开发广谱抗冠状病毒感染的抑制剂或药物提供候选可能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-mbl、dna分子、表达载体、宿主细胞，以及在制备预防或/和治疗冠状病毒感染的药物中的用途，属于生物医药。
技术介绍
1、甘露聚糖结合凝集素（mbl）作为先天免疫的重要组分、补体激活过程中（补体凝集素途径）的固有成分，其在病毒感染中的识别和调节功能引起了广泛关注。人源的mbl具有明显的抗细菌、抗病毒活性，具有良好的成药性。从开发新药的合理性来看，把 mbl 作为一种药物应用于人体本身，相较于外源蛋白将具有低免疫原性等优点。但是，若将mbl以药用蛋白的形式大量注入体内，必然会导致补体凝集素途径（补体系统）的过度激活以及过度促进吞噬细胞的吞噬等问题，引发各类不良反应，使机体发生炎症性损伤甚至死亡。因此，在具有炎症的严重疾病过程中，平衡或控制补体系统激活与抑制不良反应，但不破坏其保护功能成为了当下研究的重点。
2、目前关于mbl的研究报道，主要集中在具体序列的功能。如ying l 等人报道，人mbl 基因的胶原样区（ clr ）中的三个点突变 cgt 52 tgt、ggc 54 gac 和 gga 57 gaa会导致 mbl 突变体蛋白结合甘露聚糖的能力比野生型 mbl 蛋白降低很多，并且mbl 突变体不能有效地激活补体凝集素途径。（ying l ,feng-ling l ,zhi-jun b , etal.defective activities, but not secretions, resulting from gene pointmutations of human mannan-binding lectin.[j].molecular medicine reports,2012,5(4): 1121-7.）russell w 等人对大鼠 mbl 进行了两种突变 (g25d和g28e)。发现 g28e突变体激活补体的效率比 g25d 突变体低 10 倍以上，而 g25d 突变体的活性又比野生型mbl 低 7 倍。进一步发现两种突变体 mbl 导致的补体激活减少是由于 masp-2 在与甘露聚糖包被表面结合时未能被有效激活。kurata h 等人分别从肝脏和血清中纯化并鉴定了肝脏 mbl (l-mbl) 和血清 mbl (s-mbl) 两种形式的人类 mbl，发现在人类肝脏中新合成的 mbl 在翻译后被加工成以上两种形式，二者间相差9个氨基酸。并在 cos-1 细胞中合成重组人 mbl，发现其在胶原样结构域前端缺乏包含9个氨基酸残基（ser-ser-pro-gly-ile-asn-gly-phe-pro）的序列，同时该蛋白没有激活补体的能力，表明该序列在人 mbl激活补体过程中起重要作用。（kurata h, sannoh t, kozutsumi y, yokota y, kawasaki t.structure and function of mannan-binding proteins isolated from human liverand serum. j biochem. 1994 jun;115(6):1148-54.）girija, u. v 等人发现 gly-x-y胶原重复序列 x 位置的赖氨酸残基，即 ficolin-a 中的lys(56)，对于 masp-2 结合至关重要，该残基存在于已知可激活补体的所有 ficolin 和 mbl 中，同时制备了一种 k56p和 m57o 双突变的重组蛋白，数据表明 lys56 和/或 met57 对与 masp-2 的结合、对有效的 masp 激活至关重要。在大鼠 mbl 中，等效突变（k46p 和 v47o）mbl 蛋白也消除了masp-2 结合和补体激活。（girija, u. v., dodds, a. w., roscher, s., reid, k.b.,&wallis, r. (2007). localization and characterization of the mannose-binding lectin (mbl)-associated-serine protease-2 binding site in ratficolin-a: equivalent binding sites within the collagenous domains of mblsand ficolins. journal of immunology (baltimore, md. : 1950), 179(1), 455–462.）daming zuo 等人根据人 mbl 中的 clr 序列设计并合成了一系列肽，这些肽被认为可以阻断mbl-masp 相互作用，以定位人 mbl 上的丝氨酸蛋白酶结合基序。结果表明，masp与位于胶原样结构域铰链区（由 gly-x-y 重复序列中断所形成）的 c 端结合。此外，发现r32c、g35d和 g37e突变蛋白与野生型mbl具有相似的丝氨酸蛋白酶结合特性，但突变型mbl蛋白与masps的结合远弱于野生型mbl蛋白与masps的结合。（zuo, d., cai, x., zhao,n., zhang, l.,&chen, z. (2010). location of mbl-associated serine proteasesbinding motifs on human mannan-binding lectin (mbl). protein and peptideletters, 17(1), 131–136）申请号cn201910560238.2，专利技术名称：一种含有人igg1fc和甘露聚糖结合凝集素c端的重组蛋白，供了一种含有人igg1fc和甘露聚糖结合凝集素c端的重组蛋白及编码该蛋白的序列得到优化的多核苷酸。该专利技术还提供了表达该重组蛋白的制备方法。含有所述序列得到优化的多核苷酸的质粒转染细胞表达的重组蛋白纯化后浓度为1.50mg/ml，是密码子未被优化的编码序列表达蛋白浓度的3倍。重组蛋白与占血液真菌感染90％以上的5种假丝酵母菌标准株及临床株都有很好的结合活性，证明重组蛋白与5种假丝酵母菌均可结合，而且此结合是由于重组蛋白mbl的crd区介导的。陈阿德等人研究了甘露聚糖结合凝集素（mbl）对人中性粒细胞（pmn）功能的影响。证明mbl以补体凝集素途径依赖方式增强pmn吞噬功能，并促进炎性细胞因子分泌（甘露聚糖结合凝集素对人中性粒细胞功能的影响，j south med univ, 2013, 33(6): 842-846）。
3、mbl为多聚体甘露糖/甘露聚糖糖结合蛋白，其单链分为n端、胶原样区（clr）、颈区与糖识别区域（crd）4 个部分，n端是mbl蛋白3条单体聚合的关键，而颈部和 crd 区域是mbl 能否识别并结合病原体的关键，其氨基酸序列为seq id no .1，核苷酸序列为seq idno .2。补体凝集素途径激活过程中，补体活化的前提是甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶 2（masp2）对 mbl-clr 中 ogkxgp 短基序的识本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-MBL，其特征在于：其氨基酸序列如 SEQID NO:3 所示，核苷酸序列如 SEQ ID NO:4 所示。
2.权利要求1所述的甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-MBL在制备预防或/和治疗冠状病毒感染的药物中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的药物是阻断 SRAS-CoV-2 感染的药物。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的SARS-CoV-2 包括原始毒株和突变毒株。
5.权利要求1所述的甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-MBL的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
6.一种DNA分子，其特征在于：所述DNA分子编码权利要求1所述的甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-MBL。
7.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体含有权利要求6所述的DNA分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞含有权利要求7所述的表达载体。
【技术特征摘要】
1.一种甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-mbl，其特征在于：其氨基酸序列如 seqid no:3 所示，核苷酸序列如 seq id no:4 所示。
2.权利要求1所述的甘露聚糖结合凝集素改造蛋白ppg-rep-mbl在制备预防或/和治疗冠状病毒感染的药物中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的药物是阻断 sras-cov-2 感染的药物。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的sars...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲍锦库，郑茹潇，吴传芳，郭婧，曹东炜，刘美林，左伟波，尤子鸣，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：
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