【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，具体涉及一种防治番茄典型病害的微生物菌剂及其制备方法。
技术介绍
1、番茄(lycopersicon esculentum mill.)，茄科番茄属(solanaceae)。番茄原产于南美洲地区，含有多种对人体有益的维生素、矿物元素和纤维素，有抗衰老、减少癌症发生的功效，在医疗、食品、保健等领域有着巨大的发展前景。
2、目前番茄各地普遍种植，栽培面积逐年扩大。在栽种过程中病害种类较多且较重。病害发生使得西红柿产量及质量下降，给农民造成很大的经济损失。番茄的常发病害主要有灰霉病、早疫病、叶霉病、病毒病、青枯病、晚疫病、线虫病、溃疡病等。随着种植面积的不断扩大及多年连作，病害发生逐步加重，新病害相继出现，且常常多种病害同时发生，给防治加大了难度。
3、微生物菌剂是一种利用微生物及其生命活动的产物，具有直接或间接改良土壤、恢复地力、预防各种植物病害、维持根际微生物区系平衡和降解有毒害物质等的作用，利用微生物菌剂可降低致病菌的抗药性，且对果品安全健康，对环境无污染。目前针对番茄病害研究的微生物菌剂大多是针对番茄的某一种常见病害具有较好的防治效果，无法同时对多种病虫害同时达到高效的防治效果。例如中国专利cn104087541a其公开了一种防治番茄早疫病的生防菌株及其应用，中国专利cn103952352a中公开了一种环状芽孢杆菌及微生物菌剂和它们的应用，其主要对番茄灰霉病具有良好的防治效果。虽然之类微生物菌株对于番茄某一类病害具有明显的防治效果，但是在实际生产中，番茄的各类病害并不是单独产生的，
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种防治番茄典型病害的微生物菌剂及其制备方法，将微生物菌剂进行合理的复配使用，使真菌和细菌协同作用，有效防治多种番茄典型病害。
2、为实现上述技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：
3、一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，包括以下成分：渐绿木霉菌(trichodermaviridescens)、钩状木霉菌(trichoderma hamatum)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、褐球固氮菌(azotobacter chroococcum)，体积比为1:1:1:1；
4、所述渐绿木霉菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，菌株编号为cgmcc no.5.1040；原始保藏时间为2005年8月8日；
5、所述钩状木霉菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，菌株编号为cgmcc no.3.7249；原始保藏时间为2005年7月8日；
6、所述地衣芽孢杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，菌株保藏编号为cgmcc no.1.7677；原始保藏时间为2008年6月24日；
7、所述褐球固氮菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，菌株编号为cgmcc no.1.5803；原始保藏时间为2005年6月27日。
8、本专利技术所用四种微生物菌株均可通过中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心菌株目录查询购买，无需进行重复生物保藏。
9、优选的，所述微生物菌剂为液剂。
10、优选的，所述渐绿木霉菌的孢子数为2×108cfu/ml；所述钩状木霉菌的孢子数为2×108cfu/ml；所述微生物菌剂中地衣芽孢杆菌活菌量为2×108cfu/ml，褐球固氮菌活菌量为2×108cfu/ml。
11、一种防治番茄典型病害的微生物菌剂的制备方法，包括以下制备步骤：
12、(1)将渐绿木霉菌、钩状木霉菌试管斜面菌种活化，挑取菌种分别放入装有100ml马铃薯葡萄糖液体培养基中，170r/min，25-28℃下培养48h，获得种子液；将种子液按10％的接种量接种于发酵培养液中，170r/min，25-28℃下培养96h，获得培养液，此时培养液长满渐绿木霉和钩状木霉的菌丝和孢子，利用无菌水洗孢子，四层纱布过滤，分别再稀释得到渐绿木霉菌液和钩状木霉菌液，保证稀释后得到的两种木霉菌液的孢子浓度都为2×108cfu/ml；
13、(2)将褐球固氮菌解冻后接种于pda培养基中，28℃进行活化培养；活化培养后，挑取1％的接种量加入至发酵培养液，25-28℃，150r/min进行发酵培养，直至获得活菌量为2×108cfu/ml的发酵菌液；
14、(3)将地衣芽孢杆菌解冻后接种于lb固体培养基中，28-30℃培养1天，活化菌株；挑取活化后的地衣芽孢杆菌接种于lb液体培养基中，28-30℃，220r/min发酵培养，直至获得活菌量为2×108cfu/ml的发酵菌液；
15、(4)将四种发酵菌液按照体积比1:1:1:1混合后，得到终产品微生物菌剂。
16、lb固体培养基采用常规培养基。
17、pda培养基制备方法：马铃薯200克，加水煮烂，过滤后取滤液，再加葡萄糖20克、琼脂15-20克，加水至1000毫升，自然ph。
18、发酵培养液即马铃薯葡萄糖液体培养基(pdb)的组成：马铃薯300g/l，葡萄糖20g/l，蒸馏水加至1000ml，ph为5.6～5.8。
19、本专利技术微生物菌剂对番茄根腐病、灰霉病、枯萎病、早疫病具有良好的防治效果。
20、本申请的菌剂可在种子期使用，也可在植物成株期或种苗期灌根使用。制备的微生物菌剂稀释100倍，每株使用25ml。连续使用2次，每次间隔10天。
21、本专利技术具有以下有益效果：
22、首先本专利技术复配渐绿木霉和钩状木霉，其对多种番茄致病菌具有拮抗作用，可以防治多种番茄典型病害。本专利技术筛选的渐绿木霉和钩状木霉，能够分泌多种胞外酶，如纤维素酶、壳多糖酶等，这些酶可以降解病原菌的细胞壁，从而抑制病原菌的生长；同时其能够产生多种挥发性和非挥发性的代谢产物，这些代谢产物对病原菌有明显的抑菌作用；
23、其次引入地衣芽孢杆菌和褐球固氮菌，地衣芽孢杆菌能够产生多种抗菌物质，直接抑制病原菌的生长繁殖，同时地衣芽孢杆菌能诱导植物产生系统抗性，能显著降低植物发病率；同时所选的地衣芽孢杆菌，褐球固氮菌具有良好的固氮能力，改善土壤微生态环境，提高土壤养分含量，从而为其他植物促生菌提供更好的生长环境，还能够生成吲哚乙酸，溶磷活性和铁载体生成等促进植物生长，有助于缓解病害对番茄产量的危害，促进番茄产量和品质的提升。同时该固氮菌对果蔬类灰霉病和枯萎病的病原菌有一定的抑制作用。
24、渐绿木霉和钩状木霉、地衣芽孢杆菌和褐球固氮菌联合使用，相互促进，对于番茄根腐病、灰霉病、枯萎病、早疫病病原菌呈现良好的协同抑制作用。真菌和细菌的协同，不仅解决本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，包括以下成分：渐绿木霉菌(Trichoderma viridescens)、钩状木霉菌(Trichoderma hamatum)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)，体积比为1:1:1:1；
2.根据权利要求1所述的一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液剂。
3.根据权利要求1所述的一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，所述渐绿木霉菌的孢子数为2×108cfu/mL；所述钩状木霉菌的孢子数为2×108cfu/mL；所述微生物菌剂中地衣芽孢杆菌活菌量为2×108cfu/mL，褐球固氮菌活菌量为2×108cfu/mL。
4.一种权利要求1-3任意一项所述的防治典型病害的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
5.一种权利要求1-3任意一项所述微生物菌剂在防治番茄典型病害中的应用。
6.根据权利要求5所述微生物菌剂在防治番茄典型病害中的应用，其特
...【技术特征摘要】
1.一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，包括以下成分：渐绿木霉菌(trichoderma viridescens)、钩状木霉菌(trichoderma hamatum)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、褐球固氮菌(azotobacter chroococcum)，体积比为1:1:1:1；
2.根据权利要求1所述的一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液剂。
3.根据权利要求1所述的一种防治番茄典型病害的微生物菌剂，其特征在于，所述渐绿木...
【专利技术属性】
技术研发人员：周义新，王涛，刘媛媛，陈万阳，焦义能，黄杰，刘子荣，
申请(专利权)人：湖北茂盛生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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