【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种鉴定龙血树品种的ssr分子标记的引物组及应用。
技术介绍
1、龙血竭是我国传统名贵中药，具有活血散淤、定痛止痛、生肌敛疮的功效，距今已有上千年的应用历史。据文献记载，分布于非洲的龙血树属(dracaena)植物是龙血竭最早的植物来源。中国产龙血竭基原植物为龙血树属植物海南龙血树(d.cambodiana pierreex gagnep)和剑叶龙血树(d.cochinchinensis(lour.)s.c.chen)。此外，来源于东南亚龙血树属其他种的龙血树也是龙血竭的重要来源。
2、由于对龙血竭药材需求的增加，对其资源植物的掠夺性采伐及生态环境的破坏，导致野生龙血树资源已濒临灭绝，目前海南龙血树和剑叶龙血树均被列为国家二级珍稀濒危植物，原产地非洲的索科特拉龙血树(d.cinnabaribalf.f.)同样处于濒临灭绝的境地，东南亚“伐树取脂”的方式已被对个国家禁止。目前，世界各国对野生龙血树的保护工作已从单纯的保护转变为保护和栽培养护并行。
3、据调查目前国内人工种植的龙血树以海南龙血树为主，另外还有香龙血树、剑叶龙血树、黑珍珠和太空铁等。龙血树在形态上相似，且龙血竭基原植物名称的使用一直较混乱，这导致市场上龙血竭药材的来源植物混乱，主要药效成分有较大差异，这制约了“龙血竭”产业的健康发展，给临床用药上造成了一定的安全隐患。因此开发一种对龙血树植物的精准鉴定的方法十分必要，这不仅对明确龙血竭药材的基原植物，而且对龙血树的优良品种选育具有重要的意义。
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1、针对目前龙血树种质资源混乱以及龙血树微卫星标记开发的现状，本专利技术提供如下技术方案：
2、本专利技术第一方面提供了一种用于龙血树品种鉴定的ssr分子标记引物组，所述引物组包括以下16对引物：
3、引物对dssr-080包括上游引物dssr-080-f和下游引物dssr-080-r，dssr-080-f序列为tcttcgtggaggccctgata，dssr-080-r序列为ggggaaggcaaaggagagag；
4、引物对dssr-050包括上游引物dssr-050-f和下游引物dssr-050-r，dssr-050-f序列为ccgaccatggacaagaagct，dssr-050-r序列为agtttgcaacctgggttcca；
5、引物对dssr-063包括上游引物dssr-063-f和下游引物dssr-063-r，dssr-063-f序列为tcttgatcttccggcagcag，dssr-063-r序列为tgcaccttggcttcgtagag；
6、引物对dssr-174包括上游引物dssr-174-f和下游引物dssr-174-r，dssr-174-f序列为aggcccacacttttcccaaa，dssr-174-r序列为gccaaacaataacgagcccc；
7、引物对dssr-087包括上游引物dssr-087-f和下游引物dssr-087-r，dssr-087-f序列为tggtgaagatgttggcctcc，dssr-087-r序列为aggggcagcacatttctctc；
8、引物对dssr-187包括上游引物dssr-187-f和下游引物dssr-187-r，dssr-187-f序列为cgccatgctcaagtcctact，dssr-187-r序列为gacccacagctcatccatcc；
9、引物对dssr-086包括上游引物dssr-086-f和下游引物dssr-086-r，dssr-086-f序列为catgcggccattattgtggg，dssr-086-r序列为ccactgctcttccaagggaa；
10、引物对dssr-056包括上游引物dssr-056-f和下游引物dssr-056-r，dssr-056-f序列为gcttaaagggtgtgcttggc，dssr-056-r序列为ggcttgcaggaatttctggc；
11、引物对dssr-039包括上游引物dssr-039-f和下游引物dssr-039-r，dssr-039-f序列为ttgacgttcatgtccctgca，dssr-039-r序列为agaaacagttcagctcggca；
12、引物对dssr-013包括上游引物dssr-086-f和下游引物dssr-086-r，dssr-086-f序列为tgccctgttgttttcttcgt，dssr-086-r序列为gtttgtagtgcccaccctgt；
13、引物对dssr-079包括上游引物dssr-079-f和下游引物dssr-079-r，dssr-079-f序列为aaaaccatagccacgaccgt，dssr-079-r序列为gcaggccctgtagttggatt；
14、引物对dssr-065包括上游引物dssr-065-f和下游引物dssr-065-r，dssr-065-f序列为tccctaatggtacctcgcca，dssr-065-r序列为ggaggtttttaccggcagga；
15、引物对dssr-006包括上游引物dssr-006-f和下游引物dssr-006-r，dssr-006-f序列为ataatccccggagctaacgc，dssr-006-r序列为tgattagggcgacggattgg；
16、引物对dssr-026包括上游引物dssr-026-f和下游引物dssr-026-r，dssr-026-f序列为acaagtgtgagccttgggac，dssr-026-r序列为tcacgacgattgatccacaa；
17、引物对dssr-022包括上游引物dssr-022-f和下游引物dssr-022-r，dssr-022-f序列为ccactgttggtcatgcttct，dssr-022-r序列为caacctgttgaggcagaggt；
18、引物对dssr-188包括上游引物dssr-188-f和下游引物dssr-188-r，dssr-188-f序列为tagaacggcactgaacccag，dssr-188-r序列为ttcaacagaactgcctgcca。
19、本专利技术第二方面提供了上述ssr分子标记引物组在龙血树种质资源遗传分析中的应用。
20、本专利技术第三方面提供了一种龙血树种质资源遗传分析的方法，包含如下步骤：
21、(1)提取待分析样品dna：采集龙血树幼嫩叶片，提取基因组dna；
22、(2)合成特异性荧光引物：筛选并合成权利要求1所述的16对引物；
23、(3)pcr扩增：采用荧光pcr反应分别利用所述的16对引物对步骤(1)中的基因组dna进行pcr扩增；
24、(4)遗传分析：统计观测等本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于龙血树品种鉴定的SSR分子标记引物组，其特征在于，所述引物组包括以下16对引物：
2.权利要求1所述的SSR分子标记引物组在龙血树种质资源遗传分析中的应用。
3.一种龙血树种质资源遗传分析的方法，其特征在于，包含如下步骤：
4.权利要求1所述的SSR分子标记引物组在鉴定不同的龙血树品种及龙血树属物种中的应用。
5.一种龙血树品种的鉴定方法，其特征在于，包含如下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种龙血树品种的鉴定方法，其特征在于，所述步骤b中，PCR扩增的体系为：25μL，其中2x EcoTaqPCR SuperMix 12.5μL，正、反引物各1μl，DNA模板20ng，最后用ddH2O补足；PCR扩增的程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，62～52℃梯度退火30s，72℃延伸30s，运行10个循环；95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，运行25个循环；72℃延伸20min。
【技术特征摘要】
1.一种用于龙血树品种鉴定的ssr分子标记引物组，其特征在于，所述引物组包括以下16对引物：
2.权利要求1所述的ssr分子标记引物组在龙血树种质资源遗传分析中的应用。
3.一种龙血树种质资源遗传分析的方法，其特征在于，包含如下步骤：
4.权利要求1所述的ssr分子标记引物组在鉴定不同的龙血树品种及龙血树属物种中的应用。
5.一种龙血树品种的鉴定方法，其特征在于，包含如下步骤：
6...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏建和，张玉秀，刘培卫，吴海莹，李思鹏，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：
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