【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于单核苷酸多态性检测的微粒探针。
技术介绍
1、同一物种生物体基因组中所包含的遗传密码并不是完全相同的，这些核苷酸序列中的差异被称为多态性。删除或插入1到10个核苷酸、特定核苷酸序列的重复等都属于多态性的例子。如果单个核苷酸被另一个核苷酸取代，则称为单核苷酸(碱基)多态性(snp)。
2、单核苷酸多态性(snps)指的是dna单个碱基序列的变化，并且与众多遗传特性相关。大约每1000个碱基序列中有一个snp，它们是个体间遗传性疾病发病率和药物抗性差异的主要原因。根据四种碱基(a、g、c、t)的变化，snps可以分为总共四种类型(c:g->t:a、c:g->g:c、c:a->g:t、t:a->a:t)。其中，胞嘧啶(c)和胸腺嘧啶(t)之间的多态性即c/t型snp约占总数的70％左右。
3、由于诸如个体疾病预测和个人化医疗等原因，snp分析的重要性日益增加，因此对于snp的有效检测方法的研究一直在持续进行，目前已经开发出了多种识别snp的方法。代表性的例子包括作为非等位基因特异性方法的单链构象多态性(sscp)分析和迷你测序法，以及作为等位基因特异性方法的使用分子信标和连接酶分析的rt-pcr法。
4、在过去的20年里，已经开发了许多snp筛查方法，但基于连接酶的snp分析方法作为一种有前景的方法在分析效率方面被提出。这种方法有几个优点。首先，它能够实现多重分析，并且可以与流式细胞术、微阵列、微流控、毛细管等微量分析方法结合，同时对各种样品进行snp分
5、因此，需要一种新的snp分析方法，能够在没有误差的情况下确认g:c配对和g:t错配的连接反应。
技术实现思路
1、【技术问题】
2、为了解决上述问题，本专利技术旨在提供一种用于单核苷酸多态性的微粒探针。
3、【技术方案】
4、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种用于单核苷酸多态性的微粒探针，包括：微粒；引入到所述微粒表面并与目标核酸含有互补序列的捕获探针；以及引入到所述微粒表面并通过外部刺激产生信号的报告核酸。
5、在一个实施例中，所述捕获探针可以包含引导rna。
6、在一个实施例中，所述引导rna包含具有能够与基因的目标位点杂交的核苷酸序列的crispr rna(crrna)和反式激活crrna(tracrrna)。
7、在一个实施例中，所述引导rna与所述目标核酸结合，并在遇到裂合酶(lyase)时，切割目标核酸和报告核酸。
8、在一个实施例中，所述报告核酸可能是标记有发光物质的核酸。
9、在一个实施例中，所述报告核酸可能是在基因剪刀系统使用时被切割的碱基序列。
10、在一个实施例中，所述微粒内部可以包含磁性颗粒。
11、在一个实施例中，所述微粒可以具有核壳结构，该结构具有包含磁性物质的核和厚度均匀包围核的壳层。
12、在一个实施例中，所述微粒可以具有不浮于水中的尺寸和比重。
13、本专利技术还提供了一种用于分析单碱基多态性的试剂盒，包括用于单核苷酸多态性的微粒探针、裂合酶和核酸扩增试剂。
14、本专利技术还提供了一种分析单碱基多态性的方法，包括以下步骤：(a)从样品中提取用于分析单碱基多态性的目标核酸；(b)扩增所述目标核酸；(c)提供一种用于单核苷酸多态性的微粒探针，所述微粒探针包括微粒、引入到所述微粒的表面并与目标核酸含有互补序列的引导rna，以及引入到所述微粒的表面并通过外部刺激产生信号的报告核酸；(d)将用于分析单碱基多态性的微粒的引导rna与目标核酸反应，形成所述用于单核苷酸多态性的微粒探针与所述目标核酸的复合体；(e)将裂合酶与用于分析单碱基多态性的微粒的引导rna结合；(f)通过所述裂合酶的激活反应切割所述目标核酸和所述报告核酸的每个碱基序列；以及(g)通过测量由所述外部刺激引起的复合体发出的信号的开闭来检测所述目标核酸。
15、在一个实施例中，可以通过使用两种或多种用于分析单碱基多态性的微粒探针并测量每种探针的发光差异来识别目标核酸的存在与否来进行目标核酸的检测。
16、在一个实施例中，用于单核苷酸多态性的微粒探针可以具有微棒(microrod)形状。
17、【有益效果】
18、根据本专利技术的用于单核苷酸多态性的微粒探针使用了比传统磁性颗粒(特别是磁珠)具有更高磁性的微粒，因此可以使用磁铁高效地进行混合或移动，并且可以低成本制造。因此，本专利技术能够以比现有单碱基多态性分析设备更低的成本进行相同的分析。
19、此外，根据本专利技术的用于单核苷酸多态性的微粒探针通过引入基因剪刀技术，能够准确识别和检测单碱基多态性。
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1.一种用于单核苷酸多态性的微粒探针，包括：
2.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述捕获探针包含引导RNA。
3.根据权利要求2所述的微粒探针，其中所述引导RNA包含具有能够与基因的目标位点杂交的核苷酸序列的CRISPR RNA(crRNA)和反式激活crRNA(tracrRNA)。
4.根据权利要求2所述的微粒探针，其中所述引导RNA与所述目标核酸结合，并在遇到裂合酶时，切割所述目标核酸和所述报告核酸。
5.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述报告核酸是标记有发光物质的核酸。
6.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述报告核酸在基因剪刀系统中使用时成为被切割的碱基序列。
7.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述微粒的内部包含磁性颗粒。
8.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述微粒具有核壳结构，所述核壳结构具有包含磁性物质的核和厚度均匀包围核的壳层。
9.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述微粒具有不浮于水中的尺寸和比重。
10.一种用于分析单碱基多态性的试剂盒
11.一种分析单碱基多态性的方法，包括以下步骤：
12.根据权利要求11所述的分析单碱基多态性的方法，其中所述目标核酸的检测是通过使用用于分析两种或多种单碱基多态性的微粒探针并测量每种探针的发光差异来识别目标核酸的存在与否。
13.根据权利要求11所述的分析单碱基多态性的方法，其中所述用于分析单碱基多态性的微粒探针具有微棒形状。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于单核苷酸多态性的微粒探针，包括：
2.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述捕获探针包含引导rna。
3.根据权利要求2所述的微粒探针，其中所述引导rna包含具有能够与基因的目标位点杂交的核苷酸序列的crispr rna(crrna)和反式激活crrna(tracrrna)。
4.根据权利要求2所述的微粒探针，其中所述引导rna与所述目标核酸结合，并在遇到裂合酶时，切割所述目标核酸和所述报告核酸。
5.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述报告核酸是标记有发光物质的核酸。
6.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述报告核酸在基因剪刀系统中使用时成为被切割的碱基序列。
7.根据权利要求1所述的微粒探针，其中所述微粒的内部包含磁性颗粒。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑勇均，
申请(专利权)人：易兹代亚科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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