【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及一种制备抗体药物偶联物的新方法。背景概述抗体-药物偶联物(adc)是一种将小分子药物连接到单克隆抗体上的一种新药物形式，利用单克隆抗体的靶向功能，将小分子药物运输到靶部位发挥药效，减少毒副作用，提高了治疗窗口。近年来，抗体偶联药物是肿瘤精准治疗的热门方向之一，为肿瘤治疗带来希望。抗体-偶联药物(antibody-drug conjugates,adc)由靶向特异性抗原的抗体药物和小分子细胞毒药物通过连接子偶联而成,兼具传统小分子化疗的强大杀伤效应及抗体药物的肿瘤靶向性。截止到目前，全球已有十多款adc药物获批上市。抗体偶联药物由抗体、连接子、有效载荷(payload)等几部分组成。其中抗体和药物-连接体可以以不同的偶联方式连接。偶联方法主要分为非定点偶联和定点偶联。早期使用的是非定点偶联法，主要由赖氨酸偶联和半胱氨酸偶联，利用化学方法直接将药物与抗体上氨基酸残基进行偶联，不涉及抗体的改造或修饰，其偶联的毒素分子个数和偶联位点都不能确定，均一性欠佳。目前常用的定点偶联方式即通过基因工程位点或者特殊的连接头进行特异性偶联，实现更均一地偶联，能在特定位点实现细胞毒素的连接。定点偶联生产的抗体偶联药物可以减少因偶联位点和偶联个数不同而造成药效、药代以及质控的波动。目前常见的定点偶联方式有thiomab技术、非天然氨基酸偶联技术、谷氨酰胺酶促偶联技术、sortase转肽酶偶联技术以及thiobridge技术等。其中，利用抗体工程化或者酶促偶联对抗体的改造修饰可能会对抗体的结构稳定性有一定影响，同时对cmc有一定
技术介绍
技术实现思路
1、本专利技术提供一种抗体－药物偶联物的新制备方法，其通过特定的化学定点偶联方法，获得了高度均质的抗体偶联物分子，其dar2主峰占比达到99％以上。本专利技术的制备方法步骤少，操作简单，利于工业放大生产，同时制备的产品杂质少、纯度高，明显提高用药安全性，也降低了生产成本。通过本专利技术的偶联方法制备的抗肿瘤药具有优异的抗肿瘤效果和安全性(包括较高的稳定性和较小的副作用)。
2、第一方面
3、本专利技术提供用于制备抗体-药物偶联物(adc)的方法，该方法包括以下步骤：
4、(a)在含抗体的缓冲溶液中，加入金属盐或金属配合物、还原剂，然后进行孵育；
5、(b)向(a)中的反应溶液中加入含药连接子进行偶联；和
6、(c)使用疏水作用色谱方法，采用疏水凝胶型填料和盐溶液对于偶联物产物进行纯化，以获得高纯度的dar2-adc偶联物。
7、在一些实施方案中，步骤(a)中所述的金属盐或金属配合物中的金属可以选自zn、cd和hg等。
8、在一些实施方案中，步骤(a)中所述的金属盐或金属配合物选自下述中的一种或多种：zn、cd和hg的盐酸盐或硫酸盐、以及wo20本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于制备抗体-药物偶联物(ADC)的方法，该方法包括以下步骤：
2.权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中所述的金属盐或金属配合物中的金属可以选自Zn、Cd和Hg等，
3.权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(a)中所述的还原剂选自三(2-羧乙基)膦(TCEP)、二硫苏糖醇(DTT)、巯基乙胺和巯基乙醇，优选TCEP。
4.权利要求1-3中任何一项所述的方法，其中步骤(a)中的抗体的浓度为0.5-150mg/mL，例如4-30mg/mL，
5.权利要求1-4中任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的含药连接子的用量是1-8倍抗体摩尔当量，例如3-5倍抗体摩尔当量，
6.权利要求1-5中任何一项所述的方法，其中步骤(c)中所述疏水凝胶填料选自Butyl-650M、Butyl-4FF、Butyl-650S、Butyl-ImpRes和Phenyl Sepharose HP，和/或
7.权利要求1-6中任何一项所述的方法，其中在步骤(b)后包含步骤(b’):加入金属离子螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)进行反应
8.权利要求1-7中任何一项所述的方法，其中，在步骤(b’)后包含步骤(b”):加入脱氢抗坏血酸(DHAA)进行反应，
9.权利要求1-8中任何一项所述的方法，其中，所述方法获得的DAR2-ADC具有大于90％的纯度，所述纯度例如通过HIC-HPLC测得。
10.权利要求1-9中任何一项所述的方法，其中所述抗体选自人源化抗体、鼠源抗体、人抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体，
11.权利要求1-10中任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的含药连接子为式A-I所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，
12.权利要求11所述的方法，其中
13.权利要求11或12所述的方法，其中
14.权利要求11-13中任何一项所述的方法，其中D选自喜树碱类化合物、加利车霉素(calicheamicin)、美登木素生物碱(maytansinoids)、多拉司他汀(dolastatin)、澳瑞他汀类化合物和单端孢霉素(trichothecene)；
15.权利要求11-14中任何一项所述的方法，其中，含药连接子为式III所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，
16.权利要求15所述的方法，其中式III化合物进一步为式IIIA化合物：
17.权利要求15或16所述的方法，其中CPT为如下式I或式IA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，以及对应的具体化合物：
18.权利要求15或16所述的方法，其中所述喜树碱类化合物为式II所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
19.权利要求15或16所述的方法，其中，所述喜树碱类化合物(CPT)具有如下结构：
20.权利要求14-19中任一项所述的方法，其中喜树碱类化合物的氨基与A的羧基形成了酰胺键。
21.权利要求15-20中任一项所述的方法，其中CPT为式IV所示的依喜替康衍生物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
22.权利要求15-21中任一项所述的方法，其中，在式III’和式IIIA’中，D’为如下式I’所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，以及对应的具体化合物：
23.权利要求15-22中任一项所述的方法，其中
24.权利要求23所述的方法，其中，式V所示的化合物进一步为式V-A所示的化合物：
25.根据权利要求23所述的方法，其中式V所示的化合物进一步为式VI所示的化合物：
26.根据权利要求1-25中任何一项所述的方法，其中所述含药连接子选自以下化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
...【技术特征摘要】
1.一种用于制备抗体-药物偶联物(adc)的方法，该方法包括以下步骤：
2.权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中所述的金属盐或金属配合物中的金属可以选自zn、cd和hg等，
3.权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(a)中所述的还原剂选自三(2-羧乙基)膦(tcep)、二硫苏糖醇(dtt)、巯基乙胺和巯基乙醇，优选tcep。
4.权利要求1-3中任何一项所述的方法，其中步骤(a)中的抗体的浓度为0.5-150mg/ml，例如4-30mg/ml，
5.权利要求1-4中任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的含药连接子的用量是1-8倍抗体摩尔当量，例如3-5倍抗体摩尔当量，
6.权利要求1-5中任何一项所述的方法，其中步骤(c)中所述疏水凝胶填料选自butyl-650m、butyl-4ff、butyl-650s、butyl-impres和phenyl sepharose hp，和/或
7.权利要求1-6中任何一项所述的方法，其中在步骤(b)后包含步骤(b’):加入金属离子螯合剂例如乙二胺四乙酸(edta)进行反应，
8.权利要求1-7中任何一项所述的方法，其中，在步骤(b’)后包含步骤(b”):加入脱氢抗坏血酸(dhaa)进行反应，
9.权利要求1-8中任何一项所述的方法，其中，所述方法获得的dar2-adc具有大于90％的纯度，所述纯度例如通过hic-hplc测得。
10.权利要求1-9中任何一项所述的方法，其中所述抗体选自人源化抗体、鼠源抗体、人抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体，
11.权利要求1-10中任何一项所述的方法，其中步骤(b)中的含药连接子为式a-i所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，
12.权利要求11所述的方法，其中
13.权利要求11或12所述的方法，其中
14.权利要求11-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，朱会凯，陈宇航，王珍珍，谭小钉，
申请(专利权)人：江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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