【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及特异性识别fxiia的抗体，及其制备方法和用途，包括用其治疗血栓形成、与fxii/fxiia诱导的激肽形成相关疾病、fxii/fxiia诱导的补体活化相关疾病、接触激活系统相关的疾病、炎症相关疾病。
技术介绍
1、因子xii(fxii)是一种80kda的糖蛋白，血浆浓度约为40μg/ml(约500nmol/l)。血浆中的fxii主要在肝脏中合成。fxii在激活凝血的内源性途径以及激肽释放酶-激肽(kallikrein-kinin)系统中发挥作用。fxii通过暴露于带负电荷的表面(例如聚阴离子表面、玻璃、聚磷酸盐、鞣花酸等)进行自体激活(auto-activation)，产生活性形式fxiia。激活的fxiia能够切割血浆激肽释放酶原(prekallikrein,pk)，产生活性的血浆激肽释放酶(pkal)；随后，激活的pkal能够将fxii切割为fxiia；形成的fxiia激活更多的pk，产生更多的pkal，从而形成正反馈环和放大效应。
2、激活的fxiia由重链和轻链组成，重链和轻链之间由二硫键连接。重链包含以下结构域：纤连蛋白ii型结构域、表皮生长因子(egf)样结构域i、纤连蛋白i型结构域、表皮生长因子样结构域ii、kringle结构域和富含脯氨酸的结构域，其对于fxii是独特的。重链包含与带负电荷表面结合的区域，轻链包含丝氨酸蛋白酶典型的催化结构域，因此fxii具有与丝氨酸蛋白酶家族其他成员相似的结构域组成。fxii轻链上的活性位点由典型的催化三联残基his40、asp89和ser191组成。该
3、fxii缺陷，被称为hageman特质，最先被oscar ratnoff确认为一种缺陷，导致表面激活的血液凝固试验例如部分凝血活酶时间(ptt)延长(ratnoff等人，1955，j clininvest,34:602-13.)。earl davie是第一个提纯hageman因子的人，并根据惯例将其命名为xii因子。他和ratnoff首先证明了fxii激活血浆凝血酶前体fxi，后来又证明了fxia激活fix(ratnoff等人，1961，j clin invest,40:803-19；ratnoff等人，1962，biochemistry,1:677-85.)。这些结果是他们与r.g.macfarland同时提出凝血级联假说的基础，也是启动血液凝固的接触激活假说的基础。已知凝血因子xii的缺乏与增加的自发或损伤相关出血并发症并不相关，而是fxii的缺乏与静脉血栓形成的风险增加相关(kuhli c等人，2004，am jophthalmol,137:459-464；halbmayer wm等人，1993，wien med wochenschr.143:43-50)。之后的研究也表明，fxii缺陷型小鼠不会发生自发性或过度损伤相关的出血，但对胶原蛋白和肾上腺素诱导的血栓栓塞有保护作用，fxii缺失小鼠输注人fxii可恢复损伤性血栓形成(renne t等人，2005,j exp med；202(2):271–281)。这些结果表明fxii在病理性血栓形成过程中发挥中重要作用，因此干扰或阻断fxii活性可能适合于阻断病原性动脉血栓形成及其临床后果。
4、fxii不仅在内源性凝血途径中发挥作用，通过fxiia激活或其他方式形成的pkal能够启动激肽释放酶-激肽系统。pkal切割高分子量激肽原(hk)释放缓激肽(bradykinin)和激肽原片段(即chk)。缓激肽通过与g蛋白偶联受体缓激肽b2和b1受体结合而影响血管通透性。c1-inh作为fxiia和pkal的主要抑制剂，调控接触激活系统。c1-inh的血浆水平不足或功能异常引起fxiia和pkal持续激活，导致缓激肽的形成增加(caccia等人，2014，pediatr allergy immunol pulmonol.；27(4):159–163)。遗传性血管性水肿(hae)综合征是一组由于c1-inh缺乏或缺陷(最常见的i型和ii型)，或由于fxiia(iii型)、纤溶蛋白或血管生成素1功能增加引起的疾病(bafunno v等人，2018，j allergy clin immunol；141:1009–17.)。在c1-inh缺乏的i型hae中，fxiia和pkal都没有受到足够的抑制，导致缓激肽的产生增强，从而使血管通透性增加。迄今为止，除了功能获得的血管生成素i机制外，所有这些不同的机制都导致局部缓激肽向组织的传递增加，缓激肽引起血管舒张，增加血管通透性，导致血管性水肿(caccia等人，2014，pediatr allergy immunol pulmonol.；27(4):159–163)。阻断缓激肽b2受体可减轻许多hae患者的症状。重要的是，通过注射c1-inh替代产品抑制接触激活系统的活性酶，或通过单克隆抗体或非肽模拟物抑制pkal也可以改善和预防大多数患者的i型和ii型hae(banerji等人，2018，jama，320:2108–21；-pürsüne等人，2018，n engl j med；379:352–62.)。
5、专利申请wo2013014092a1公开了抗fxii/fxiia的单克隆抗体或其抗原结合片段，该抗体对于人fxiia-β的结合亲和力是对人fxii的结合亲和力的2倍以上，并且能够抑制人fxiia的酰胺裂解活性。专利申请wo2017015431a1公开了抗fxiia抗体和使用抗fxii抗体治疗与fxii有关的疾病的方法。
6、本领域仍然需要有效抑制或以其他方式拮抗fxii的治疗性抗体，以及治疗通过fxii介导的疾病或病症的相关方法，例如血栓形成，与fxii/fxiia诱导的激肽形成相关疾病，fxii/fxiia诱导的补体活化相关疾病，接触激活系统相关的疾病。
7、本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公开的专利申请中披露的内容，以引用方式全部并入本文中。
8、申请概述
9、在一些实施例中，提供一种分离的抗fxiia抗体，其包含：(i)vh，所述vh包含：hc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:1，hc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:10，和hc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:22；以及vl，所述vl包含：lc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:34，lc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:48，和lc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:56本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体包含：
2.根据权利要求1中所述的分离的抗FXIIa抗体，其包含：
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体与人FXIIa结合的Kd值为0.1pM至1nM。
4.根据权利要求1-3中任一项的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体包含Fc片段。
5.根据权利要求4中的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体是全长的IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。
6.根据权利要求5中的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体是全长的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
7.根据权利要求1-6中任一项的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体是嵌合的、人的或人源化的抗体。
8.根据权利要求1-3中任一项的分离的抗FXIIa抗体，其中所述抗FXIIa抗体是抗原结合片段，所述抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab)’2、Fab’-SH、单链Fv(scFv)、Fv片段
9.一种分离的编码权利要求1-8中任一项所述的抗FXIIa抗体的核酸分子。
10.一种包含权利要求9中所述的核酸分子的载体。
11.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗FXIIa抗体、权利要求9中所述的核酸分子或权利要求10中所述的载体。
12.一种制备抗FXIIa抗体的方法，其包含：
13.一种药物组合物，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗FXIIa抗体、权利要求9中所述的核酸分子、权利要求10中所述的载体、权利要求11中所述的分离的宿主细胞或由权利要求12中所述方法制备得到的抗体，以及药学上可接受的载体。
14.权利要求1-8中任一项所述的抗体、权利要求9中所述的核酸分子、权利要求10中所述的载体、权利要求11中所述的宿主细胞、由权利要求12中所述方法制备得到的抗体、或权利要求13中所述的药物组合物在制备治疗有此需求的个体疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症是与FXIIa信号通路失调导致的疾病和/或病症，例如血栓形成、与FXII/FXIIa诱导的激肽形成相关疾病、FXII/FXIIa诱导的补体活化相关疾病、接触激活系统相关的疾病、炎症相关疾病。
15.根据权利要求14中的用途，其中所述疾病或病症选自静脉、动脉或毛细血管血栓形成、心脏内血栓形成、在将人或动物受试者的血液与人工表面接触过程中和/或之后的血栓形成、血栓栓塞、动脉粥样硬化、间质性肺病、炎症、神经炎症性疾病、神经创伤性疾病、外伤性脑损伤、补体激活、纤维蛋白溶解、血管生成、遗传性血管性水肿(HAE)、肺部细菌感染、锥虫属感染、低血压休克、胰腺炎、chagas疾病、关节痛风、关节炎、弥漫性血管内凝血和败血症、黄斑水肿、糖尿病视网膜病、高血压性视网膜病、年龄相关性黄斑变性、视网膜静脉阻塞、器官缺血、远端缺血再灌注损伤(IRI)、慢性肾脏疾病、肾纤维化、多发性硬化症。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体包含：
2.根据权利要求1中所述的分离的抗fxiia抗体，其包含：
3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体与人fxiia结合的kd值为0.1pm至1nm。
4.根据权利要求1-3中任一项的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体包含fc片段。
5.根据权利要求4中的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体是全长的iga、igd、ige、igg或igm抗体。
6.根据权利要求5中的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体是全长的igg1、igg2、igg3或igg4抗体。
7.根据权利要求1-6中任一项的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体是嵌合的、人的或人源化的抗体。
8.根据权利要求1-3中任一项的分离的抗fxiia抗体，其中所述抗fxiia抗体是抗原结合片段，所述抗原结合片段选自fab、fab’、f(ab)’2、fab’-sh、单链fv(scfv)、fv片段、dab、fd、纳米抗体(nanobody)、双链抗体(diabody)和线性抗体。
9.一种分离的编码权利要求1-8中任一项所述的抗fxiia抗体的核酸分子。
10.一种包含权利要求9中所述的核酸分子的载体。
11.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗fxiia抗体、权利要求9中所述的核酸分子或权利要求10中所述的载...
【专利技术属性】
技术研发人员：张超，刘洪洋，李平，
申请(专利权)人：舒泰神北京生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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