【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及结合人cd137的经遮蔽抗cd137抗体及其抗原结合片段，组成其的组合物，及其在延迟和/或预防肿瘤生长的用途。
技术介绍
1、cd137(也称为cd137受体、4-1bb、tnfrsf9等)是肿瘤坏死因子受体超家族(tnfrs)的跨膜蛋白。目前对cd137的了解表明，其表达通常具有活化依赖性且存在于免疫细胞的广泛亚群中，包括活化nk和nkt细胞、调节性t细胞、树突细胞(dc)、被刺激的肥大细胞、分化中的骨髓细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞(wang,2009,immunologicalreviews 229:192-215)。cd137表达已证实存在于肿瘤血管系统上(broll,2001,amer.j.clin.pathol.115(4):543-549；seaman,2007,cancer cell 11:539-554)和发炎或动脉粥样硬化的内皮部位上(drenkard,2007faseb j.21:456-463；olofsson,2008,circulation 117:1292-1301)。刺激cd137的配体，即cd137配体(cd137l)，在活化的抗原呈递细胞(apc)、骨髓祖细胞和造血干细胞上表达。
2、人cd137是255个氨基酸的蛋白质(genbank登录号nm_001561；np_001552；seqidno.:1)。所述蛋白质包含信号序列(氨基酸残基1-17)，接着是细胞外结构域(169个氨基酸)、跨膜区(27个氨基酸)，以及细胞内结构域(42个氨基酸)(cheuk a
3、鼠和人t细胞的多项研究表明，cd137促进增强的细胞增殖、存活和细胞因子产生(croft,2009,nat rev immunol 9:271-285)。研究已表明，一些cd137激动剂单克隆抗体(mab)会增加共刺激分子表达并且显著增强细胞溶解性t淋巴细胞应答，从而在各种模型中产生抗肿瘤功效。cd137激动剂mab已在预防和治疗环境中展示出功效。此外，cd137单一疗法和组合疗法肿瘤模型已经建立了持久的抗肿瘤保护性t细胞记忆应答(lynch,2008,immunol rev.22:277-286)。cd137激动剂还显示出在多种本领域公认的自身免疫性模型中抑制自身免疫反应(vinay,2006,j mol med 84:726-736)。cd137的这种双重活性提供了抗肿瘤活性，同时阻止可与破坏免疫耐受性的免疫疗法相关的自身免疫副作用的潜力。
4、然而，由促效型抗cd137抗体引发的肝脏相关自身免疫毒性极大地限制了其在临床中的应用。对结合人cd137，增加cd137介导应答，并提供用于治疗各种疾病和病状(例如，癌症)且无免疫介导副作用的抗体存在长期未满足的需要。
技术实现思路
1、在一些实施方案中，本文提供的经遮蔽抗体包含遮蔽性肽(mp)和结合人cd137的抗体，其中抗体包含含有重链可变区(vh)的重链和含有轻链可变区(vl)的轻链；其中mp连接至vl的n末端，其中mp从n末端至c末端包含遮蔽性单元(mu)和连接单元(lu)，并且其中mu包含选自由seq id nos:1-7组成的组的氨基酸序列；并且其中vh包含tggvgvg(seq id no:36)中所示的cdr-h1，lidwaddkyyspslks(seq id no:37)中所示的cdr-h2，和ggsdtvigdwfay(seq id no:38)中所示的cdr-h3，并且其中vl包含rasqsigsyla(seq idno:39)中所示的cdr-l1，dasnlet(seq id no:40)中所示的cdr-l2，和qqgyylwt(seq idno:41)中所示的cdr-l3。在一些实施方案中，mp另包含与mu的n末端连接的n末端单元(nu)。在一些实施方案中，n末端单元长约1-10个氨基酸残基。在一些实施方案中，n末端单元包含e或evgsy(seq id no:77)。
2、在一些实施方案中，lu包含第一裂解位点。在一些实施方案中，第一裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa、基质金属蛋白酶-1/mmp-1、mmp-2、mmp-3、mmp-8、mmp-9、mmp-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/tev蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子x、psa、psma、组织蛋白酶d、组织蛋白酶k、组织蛋白酶s、adam10、adam12、adamts、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和tace。在一些实施方案中，第一裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa或mmp-9的蛋白酶裂解位点。在一些实施方案中，lu另包含至第一裂解位点c末端的第一接头(l1)。在一些实施方案中，lu另包含第二裂解位点。在一些实施方案中，第二裂解位点在l1的c末端。在一些实施方案中，第二裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa、基质金属蛋白酶-1/mmp-1、mmp-2、mmp-3、mmp-8、mmp-9、mmp-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/tev蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子x、psa、psma、组织蛋白酶d、组织蛋白酶k、组织蛋白酶s、adam10、adam12、adamts、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和tace。在一些实施方案中，第二裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa或mmp-9的蛋白酶裂解位点。在一些实施方案中，第一和第二裂解位点相同。在一些实施方案中，第一和第二裂解位点不同。在一些实施方案中，lu另包含至第二裂解位点c末端的第二接头(l2)。在一些实施方案中，lu包含选自由seq id nos:8-16组成的组的氨基酸序列。
3、在一些实施方案中，遮蔽性肽包含seq id nos:17-35中的任一者。在一些实施方案中，遮蔽性肽包含seq id no:34。在一些实施方案中，抗体包含seq id no:52中所示的vh和seq id no:53中所示的vl。在一些实施方案中，vh包含seq id no:52并且vl包含seq idno:58。
4、在一些实施方案中，经遮蔽抗体为全长抗体，其包含fc区。在一些实施方案中，fc区为人igg fc区或其变体。在一些实施方案中，人igg fc区或其变体为人igg1 fc区、人igg2 fc区、人igg4 fc区或前述任一者的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经遮蔽抗体，其包含遮蔽性肽(MP)和结合人CD137的抗体，
2.如权利要求1所述的经遮蔽抗体，其中所述MP另包含与所述MU的N末端连接的N末端单元(NU)。
3.如权利要求2所述的经遮蔽抗体，其中所述N末端单元长约1-10个氨基酸残基。
4.如权利要求3所述的经遮蔽抗体，其中所述N末端单元包含E或EVGSY(SEQ ID NO:77)。
5.如权利要求1至4中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述LU包含第一裂解位点。
6.如权利要求5所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/uPA、基质金属蛋白酶-1/MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/TEV蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-
7.如权利要求5所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/uPA或MMP-9的蛋白酶裂解位点。
8.如权利要求5或6所述的经遮蔽抗体，其中所述LU另包含第一接头(L1)。
9.如权利要求5至7中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述LU另包含第二裂解位点。
10.如权利要求8所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点在所述L1的C末端。
11.如权利要求9或10所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/uPA、基质金属蛋白酶-1/MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/TEV蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子X、PSA、PSMA、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、组织蛋白酶S、ADAM10、ADAM12、ADAMTS、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和TACE。
12.如权利要求11所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/uPA或MMP-9的蛋白酶裂解位点。
13.如权利要求9至12中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点和所述第二裂解位点相同。
14.如权利要求9至12中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点和所述第二裂解位点不同。
15.如权利要求10至14中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述LU另包含第二接头(L2)。
16.如权利要求5至15中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述LU包含选自由SEQ IDNOs:8-16组成的组的氨基酸序列。
17.如权利要求1至16中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述遮蔽性肽包含SEQ IDNOs:17-35中的任一者。
18.如权利要求17所述的经遮蔽抗体，其中所述遮蔽性肽包含SEQ ID NO:34。
19.如权利要求1至18中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:52中所示的VH和SEQ ID NO:53中所示的VL。
20.如权利要求18和19所述的经遮蔽抗体，其中所述VH包含SEQ ID NO:52及所述VL包含SEQ ID NO:58。
21.如权利要求1至20中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述经遮蔽抗体为全长抗体，其包含Fc区。
22.如权利要求21所述的经遮蔽抗体，其中所述Fc区为人IgG Fc区或其变体。
23.如权利要求22所述的经遮蔽抗体，其中所述人IgG Fc区或其变体为人IgG1 Fc区、人IgG2 Fc区、人IgG4 Fc区、或前述任一者的变体。
24.如权利要求23所述的经遮蔽抗体，包含含有选自由G236D；L328F；S239D；S267E；G236D和S267E；S239D和S267E；S267E和L328S；以及S267E和L328F；E233D和P238D；G237D和P238D；H268D和P238D；P271G和P238D；A330R和P238D；E233D，P238D和A330...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经遮蔽抗体，其包含遮蔽性肽(mp)和结合人cd137的抗体，
2.如权利要求1所述的经遮蔽抗体，其中所述mp另包含与所述mu的n末端连接的n末端单元(nu)。
3.如权利要求2所述的经遮蔽抗体，其中所述n末端单元长约1-10个氨基酸残基。
4.如权利要求3所述的经遮蔽抗体，其中所述n末端单元包含e或evgsy(seq id no:77)。
5.如权利要求1至4中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述lu包含第一裂解位点。
6.如权利要求5所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa、基质金属蛋白酶-1/mmp-1、mmp-2、mmp-3、mmp-8、mmp-9、mmp-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/tev蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子x、psa、psma、组织蛋白酶d、组织蛋白酶k、组织蛋白酶s、adam10、adam12、adamts、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和tace。
7.如权利要求5所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa或mmp-9的蛋白酶裂解位点。
8.如权利要求5或6所述的经遮蔽抗体，其中所述lu另包含第一接头(l1)。
9.如权利要求5至7中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述lu另包含第二裂解位点。
10.如权利要求8所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点在所述l1的c末端。
11.如权利要求9或10所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点为选自由以下蛋白酶的蛋白酶裂解位点组成的组：尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa、基质金属蛋白酶-1/mmp-1、mmp-2、mmp-3、mmp-8、mmp-9、mmp-14、烟草蚀刻病毒蛋白酶/tev蛋白酶、纤维蛋白溶酶、凝血酶、因子x、psa、psma、组织蛋白酶d、组织蛋白酶k、组织蛋白酶s、adam10、adam12、adamts、卡斯帕酶-1、卡斯帕酶-2、卡斯帕酶-3、卡斯帕酶-4、卡斯帕酶-5、卡斯帕酶-6、卡斯帕酶-7、卡斯帕酶-8、卡斯帕酶-9、卡斯帕酶-10、卡斯帕酶-11、卡斯帕酶-12、卡斯帕酶-13、卡斯帕酶-14和tace。
12.如权利要求11所述的经遮蔽抗体，其中所述第二裂解位点为尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化因子/upa或mmp-9的蛋白酶裂解位点。
13.如权利要求9至12中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点和所述第二裂解位点相同。
14.如权利要求9至12中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述第一裂解位点和所述第二裂解位点不同。
15.如权利要求10至14中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述lu另包含第二接头(l2)。
16.如权利要求5至15中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述lu包含选自由seq idnos:8-16组成的组的氨基酸序列。
17.如权利要求1至16中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述遮蔽性肽包含seq idnos:17-35中的任一者。
18.如权利要求17所述的经遮蔽抗体，其中所述遮蔽性肽包含seq id no:34。
19.如权利要求1至18中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述抗体包含seq id no:52中所示的vh和seq id no:53中所示的vl。
20.如权利要求18和19所述的经遮蔽抗体，其中所述vh包含seq id no:52及所述vl包含seq id no:58。
21.如权利要求1至20中任一项所述的经遮蔽抗体，其中所述经遮蔽抗体为全长抗体，其包含fc区。
22.如权利要求21所述的经遮蔽抗体，其中所述fc区为人igg fc区或其变体。
23.如权利要求22所述的经遮蔽抗体，其中所述人igg fc区或其变体为人igg1 fc区、人igg2 fc区、人igg4 fc区、或前述任一者的变体。
24.如权利要求23所述的经遮蔽抗体，包含含有选自由g236d；l328f；s239d；s267e；g236d和s267e；s239d和s267e；s267e和l328s；以及s267e和l328f；e233d和p238d；g237d和p238d；h268d和p238d；p271g和p238d；a330r和p238d；e233d，p238d和a330r；e233d，p231g，p238d和a330r；g237d，h268d，p238d和p271g；g237d，p238d，p271g和a330r；e233d，h268d，p238d，p271g和a330r；g237d，h268d，p238d，p271g和a330r；以及e233d，g237d，p238d，h268d，p271g和a330r；s2657a；t437r；k248e；以及t437r和k248e取代组成的组的人igg1 fc区变体，其中氨基酸编号根据eu索引。
25.如权利要求24所述的经遮蔽抗体，包含含有s267e和l328f取代的人igg1 fc区变体，其中氨基酸编号根据eu索引。
26.如权利要求25所述的经遮蔽抗体，包含含有seq id no:113或seq id no:114的fc区。
27.如权利要求18至26中任一项所述的经遮蔽抗体，包含seq id no:34中所示的遮蔽性肽，seq id no:52中所示的抗体重链可变区和seq id no:53中所示的抗体轻链可变区，以及包含s267e和l328f取代的人igg1 fc区变体，其中氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗培志，杜方勇，刘桂中，李艳，
申请(专利权)人：天演药业公司，
类型：发明
国别省市：
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