【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种工程化仿生树突状细胞囊泡偶联抗原肽肿瘤疫苗及制备方法与应用。
技术介绍
1、黑色素瘤疫苗的核心目标是增强免疫反应，以杀伤肿瘤、建立持久的抗肿瘤免疫记忆，并避免不良反应。然而，目前大部分黑色素瘤疫苗仍处于临床研究阶段，面临两大主要挑战：一是如何精确选择有效的肿瘤抗原，二是如何克服由肿瘤细胞建立的高度免疫抑制微环境。单纯依赖细胞或其裂解物的疫苗在产生免疫效应方面效果有限，如免疫原性不足或潜在的致瘤风险。因此，寻找有效的抗原来源和创新的疫苗载体显得尤为关键。
2、树突状细胞(dc)是专业的抗原呈递细胞，可感知各种病原体，以刺激强大而适当的免疫反应。dc能够产生激活t细胞的全部信号，在肿瘤免疫反应的启动、编程和调节中起着极其重要的作用。源于dc的纳米级细胞囊泡能够模拟母细胞的生理功能，并作为疫苗载体呈递肿瘤抗原，具有优异的应用前景。但其在开发和应用过程中仍面临多项技术难点，例如dc能够释放多种类型的囊泡(如外泌体和微囊泡)，有效分离和纯化特定类型的dc囊泡显得尤为重要。同时，dc囊泡在储存和运输时稳定性较差，易发生降解或活性丧失。因此，如何克服上述dc囊泡的应用瓶颈，成为当前亟需解决的关键问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种工程化仿生树突状细胞囊泡，易被抗原递呈细胞(apc)识别并被dc呈递到t细胞，能刺激肿瘤免疫微环境中的促进型免疫细胞增强免疫反应。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下
3、本专利技术提供了一种工程化仿生树突状细胞囊泡，工程化仿生树突状细胞囊泡的内部载有干扰素基因刺激受体的激动剂，工程化仿生树突状细胞囊泡的外膜表面偶联黑色素瘤抗原肽gp100，所述黑色素瘤抗原肽gp100的氨基酸序列为imdqvpfsv(seq id no.1)。
4、优选的，所述干扰素基因刺激受体的激动剂包括diabzi。
5、优选的，所述工程化仿生树突状细胞囊泡的粒径为50～300nm。
6、优选的，所述黑色素瘤抗原肽gp100为c端经过二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和peg1000修饰的gp100。
7、本专利技术还提供了上述工程化仿生树突状细胞囊泡的制备方法，包括如下步骤：将树突状细胞与含有激动剂的缓冲液混合，获得细胞重悬液；对所述细胞重悬液进行挤压处理，得到仿生树突状细胞囊泡；将仿生树突状细胞囊泡与含有黑色素瘤抗原肽gp100的缓冲液混合搅拌，获得工程化仿生树突状细胞囊泡。
8、优选的，所述细胞重悬液中树突状细胞的密度为2.0×106～5.0×106个/ml，所述细胞重悬液中激动剂的浓度大于0且在2.54μg/ml以下。
9、优选的，将仿生树突状细胞囊泡与含有黑色素瘤抗原肽gp100的缓冲液混合后，黑色素瘤抗原肽gp100的浓度为大于0且在5μg/ml以下。
10、本专利技术还提供了上述工程化仿生树突状细胞囊泡或上述制备方法在制备黑色素瘤疫苗中的应用。
11、本专利技术还提供了一种黑色素瘤疫苗，所述黑色素瘤疫苗包括上述工程化仿生树突状细胞囊泡，所述黑色素瘤疫苗中所述工程化仿生树突状细胞囊泡的浓度为200～400μg/ml。
12、优选的，所述黑色素瘤疫苗中还包括海藻糖，所述黑色素瘤疫苗中海藻糖的质量浓度为2％～5％。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术提供的工程化仿生树突状细胞囊泡，一方面，抗原肽gp100会触发淋巴结部位的dc等多种免疫细胞超活化，促进dc的抗原呈递程序，增强效应t细胞的杀伤能力；另一方面，囊泡中装载的干扰素基因刺激受体的激动剂，不仅能够促使免疫细胞(如dc和巨噬细胞)激活，还增强它们对病原体和异常细胞的识别能力，同时诱导多种免疫细胞分泌i型干扰素(ifn-α和ifn-β)，促使肿瘤细胞发生凋亡和免疫细胞产生免疫记忆效应，防止肿瘤的复发和转移。本专利技术提供的工程化仿生树突状细胞囊泡为未来肿瘤疫苗的研究和应用提供了新的方向和可能。另外，本专利技术提供的黑色素瘤疫苗能够有效抑制肿瘤生长并促进肿瘤组织凋亡。
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1.一种工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，工程化仿生树突状细胞囊泡的内部载有干扰素基因刺激受体的激动剂，工程化仿生树突状细胞囊泡的外膜表面偶联黑色素瘤抗原肽gp100，所述黑色素瘤抗原肽gp100的氨基酸序列为IMDQVPFSV。
2.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述干扰素基因刺激受体的激动剂包括diABZI。
3.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述工程化仿生树突状细胞囊泡的粒径为50～300nm。
4.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述黑色素瘤抗原肽gp100为C端经过二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和PEG1000修饰的gp100。
5.权利要求1-4任意一项所述工程化仿生树突状细胞囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将树突状细胞与含有激动剂的缓冲液混合，获得细胞重悬液；对所述细胞重悬液进行挤压处理，得到仿生树突状细胞囊泡；将仿生树突状细胞囊泡与含有黑色素瘤抗原肽gp100的缓冲液混合搅拌，获得工程化仿生树突状细胞囊泡。
6.根据权利
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，将仿生树突状细胞囊泡与含有黑色素瘤抗原肽gp100的缓冲液混合后，黑色素瘤抗原肽gp100的浓度为大于0且在5μg/mL以下。
8.权利要求1-4任意一项所述工程化仿生树突状细胞囊泡或权利要求5-7任意一项所述制备方法在制备黑色素瘤疫苗中的应用。
9.一种黑色素瘤疫苗，其特征在于，所述黑色素瘤疫苗包括权利要求1-4任意一项所述工程化仿生树突状细胞囊泡，所述黑色素瘤疫苗中所述工程化仿生树突状细胞囊泡的浓度为200～400μg/mL。
10.根据权利要求9所述的黑色素瘤疫苗，其特征在于，所述黑色素瘤疫苗还包括海藻糖，所述黑色素瘤疫苗中海藻糖的质量浓度为2％～5％。
...【技术特征摘要】
1.一种工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，工程化仿生树突状细胞囊泡的内部载有干扰素基因刺激受体的激动剂，工程化仿生树突状细胞囊泡的外膜表面偶联黑色素瘤抗原肽gp100，所述黑色素瘤抗原肽gp100的氨基酸序列为imdqvpfsv。
2.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述干扰素基因刺激受体的激动剂包括diabzi。
3.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述工程化仿生树突状细胞囊泡的粒径为50～300nm。
4.根据权利要求1所述的工程化仿生树突状细胞囊泡，其特征在于，所述黑色素瘤抗原肽gp100为c端经过二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和peg1000修饰的gp100。
5.权利要求1-4任意一项所述工程化仿生树突状细胞囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将树突状细胞与含有激动剂的缓冲液混合，获得细胞重悬液；对所述细胞重悬液进行挤压处理，得到仿生树突状细胞囊泡；将仿生树突状细胞囊泡与含有黑色素瘤抗原肽gp...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱全刚，刘俊，台宗光，陈中建，陆家叶，缪丰泽，丁乐，张馨月，王汝奕，严涵，丁炜宏，
申请(专利权)人：上海市皮肤病医院，
类型：发明
国别省市：
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