本发明专利技术提供了一种脱细胞羊膜基质水凝胶及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：羊膜组织预处理、清洗、脱细胞、研磨、冻干、消化和酸碱中和过程。本发明专利技术提供的脱细胞羊膜基质水凝胶在保留羊膜细胞基质中的胶原蛋白、纤维连接蛋白、糖蛋白等成分的同时，去除活性细胞，从源头降低了其免疫原性。本发明专利技术提供的脱细胞羊膜基质水凝胶可以模拟体内细胞所处的微环境，提供细胞黏附和生长所需的支持和信号，可用来构建组织工程支架，为细胞的定向生长和组织再生提供支持。此外，所述脱细胞羊膜基质水凝胶还可以作为药物载体，用于体内药物释放和治疗，在医学研究和临床应用中具有很高的应用潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水凝胶，尤其涉及一种脱细胞羊膜基质水凝胶及其制备方法。
技术介绍
1、全合成水凝胶近来被广泛尝试用于包括类器官在内的三维细胞培养，其优点在于合成材料的稳定性，以及结构的均一性。然而，全合成材料往往缺乏细胞生长所需的细胞因子，且生物相容性较差，因此，全合成水凝胶的细胞培养效果往往远逊于生物来源的基质水凝胶。
2、基质水凝胶是由可溶性细胞外基质组成的综合复合物，其基本组分涵盖了胶原蛋白、层纤黏连蛋白以及巢蛋白等要素。基质水凝胶在生物学实验中扮演着重要角色，其应用范围广泛。首先，它可用于处理细胞培养板，有助于细胞的附着和生长。其次，可铺设于transwell小室中，以研究肿瘤细胞的侵袭能力。此外，还可用于细胞系或病人来源的细胞的三维培养，从而形成类器官结构，为抗肿瘤药物筛选提供模型。目前，ehs(engelbreth-holm-swarm)基质水凝胶是主要的类型之一，该基质水凝胶主要从ehs细胞中提取而得。然而，ehs细胞本身无法在体外培养，因而限制了其在生产上的扩增规模，给基质水凝胶的批量生产带来了极大挑战。此外，制备ehs基质水凝胶需要在小鼠体内接种骨肉瘤，而这一来源于肿瘤的特性，严重制约了其相关细胞疗法在临床上的应用前景。
3、羊膜是胎儿周围的一层天然薄膜，是胚胎发育过程中形成的重要组织之一。它富含胶原蛋白、弹性纤维和透明质酸等成分，具有良好的生物相容性和生物活性，可用于角膜移植和皮肤移植等领域的组织修复，是理想的细胞外基质来源。
技术实现思路
>1、有鉴于此，本专利技术提供了一种脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，包括以下步骤：2、(1)羊膜组织预处理和脱细胞：将新鲜羊膜置于液氮中冷冻，取出融化，反复3-5次，得到脱细胞羊膜；
3、(2)将步骤(1)所述脱细胞羊膜再次置于液氮中进行冷冻，取出后依次进行研磨、过筛，得到脱细胞羊膜粉；
4、(3)将步骤(2)所述脱细胞羊膜粉冻干，得到冻干脱细胞羊膜粉；
5、(4)将步骤(3)所述冻干脱细胞羊膜粉与胃蛋白酶混合，接着加入浓度为0.01m盐酸溶液中，进行消化，消化完成后，降低环境温度至0-4℃，然后将体系ph调节为中性，得到混合溶液，最后在所述混合溶液中加入pbs缓冲溶液，静置，得到脱细胞羊膜基质水凝胶。
6、进一步的，步骤(1)所述冷冻时间为10-15min，所述融化的温度为37-40℃。
7、本专利技术通过将细胞冷冻使细胞内形成冰粒，然后在室温(或40℃)条件下融化。冷冻后导致剩余胞液的盐浓度增高，引起细胞的溶胀破碎，减少试剂的用量。
8、进一步的，步骤(1)所述羊膜组织预处理具体为：收集既往体健，传染性疾病血清学筛查全阴性的25至35岁产妇产后的新鲜羊膜组织，采用无菌生理盐水清洗干净、去除绒毛膜后裁成2*2厘米的小块；置于0-4℃的无菌生理盐水中，转速为150-200rpm的条件下漂洗30-35分钟，再用0-4℃去离子水于转速为150-200rpm的条件下漂洗30-35分钟。
9、进一步的，步骤(2)所述过筛为过200目筛。
10、进一步的，步骤(3)所述冻干温度为-70～-80℃，冻干时间为36-48小时。
11、进一步的，步骤(4)所述冻干脱细胞羊膜粉与胃蛋白酶的质量比为10-14：3。
12、进一步的，步骤(4)所述pbs缓冲溶液的用量为混合溶液的9-10倍。
13、进一步的，本专利技术还提供了由所述方法制备得到的脱细胞羊膜基质水凝胶，以及脱细胞羊膜基质水凝胶在细胞培养、组织工程、载药体系领域中的应用。
14、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
15、本专利技术通过引入脱细胞技术和水凝胶制备技术，制备得到脱细胞羊膜基质水凝胶。所述脱细胞羊膜基质水凝胶在保留羊膜细胞基质中的胶原蛋白、纤维连接蛋白、糖蛋白等成分的同时，去除活性细胞，从源头降低了其免疫原性。在细胞培养中，可以模拟体内细胞所处的微环境，提供细胞黏附和生长所需的支持和信号，有助于细胞的体外培养和扩增。在组织工程中，脱细胞羊膜基质水凝胶可用来构建组织工程支架，为细胞的定向生长和组织再生提供支持。此外，所述脱细胞羊膜基质水凝胶还可以作为药物载体，用于体内药物释放和治疗。由于其良好的生物相容性和生物活性，脱细胞羊膜基质水凝胶在医学研究和临床应用中具有很高的潜力。
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【技术保护点】
1.一种脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述冷冻时间为10min。
3.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述融化的温度为37℃。
4.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述羊膜组织预处理具体为：收集既往体健，传染性疾病血清学筛查全阴性的25至35岁产妇产后的新鲜羊膜组织，采用无菌生理盐水清洗干净、去除绒毛膜后裁成2*2厘米的小块；置于0-4℃的无菌生理盐水中，转速为150rpm的条件下漂洗30分钟，再用0-4℃去离子水于转速为150rpm的条件下漂洗30分钟。
5.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述过筛为过200目筛。
6.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述冻干温度为-70～-80℃，冻干时间为36-48小时。
7.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述冻干脱细胞羊膜粉与胃蛋白酶的质量比为10-14：3。
8.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述PBS缓冲溶液的用量为混合溶液的10倍。
9.根据权利要求1-8任一项所述方法制备得到的脱细胞羊膜基质水凝胶。
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【技术特征摘要】
1.一种脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述冷冻时间为10min。
3.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述融化的温度为37℃。
4.根据权利要求1所述脱细胞羊膜基质水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述羊膜组织预处理具体为：收集既往体健，传染性疾病血清学筛查全阴性的25至35岁产妇产后的新鲜羊膜组织，采用无菌生理盐水清洗干净、去除绒毛膜后裁成2*2厘米的小块；置于0-4℃的无菌生理盐水中，转速为150rpm的条件下漂洗30分钟，再用0-4℃去离子水于转速为150...
【专利技术属性】
技术研发人员：李贵刚，谭咏耀，王玮，徐玲娟，王云明，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：
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