【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物医学检测的，尤其是涉及一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒。
技术介绍
1、猫艾滋病又称猫获得性免疫缺陷症病毒(feline immunodeficiency virus，fiv)，由此种病毒所感染而引发的疾病与引起人类aids的hiv病毒，在构造及核甘酸的序列上具有相关性，感染了猫艾滋病的猫咪也常会产生类似人类aids所引发的免疫不全临床症状。
2、fiv感染的潜伏期较长，一般3年，从感染到慢性死亡的期限可长达5年或更长。该病是一种致死率极高的病症，现阶段还没有可以有效治疗的疫苗，主要是控制在继发感染和缓解临床症状。
3、猫白血病是猫常见的非创伤性致死疾病，是由猫白血病病毒(feline leukaemiavirus，felv)和猫肉瘤病毒引起的恶性肿瘤性传染病。主要引起猫肿瘤并造成免疫系统抑制，也可感染其他种类猫科动物。该病在世界上许多国家的猫中发生，发病率和死亡率都很高，是猫的一种严重传染病，90％以上感染猫终身带毒，现阶段还没有可以有效治愈的方法。
4、目前市场上对于猫艾滋、猫白血病的检测方法主要为pcr检测法、酶联免疫检测法和胶体金检测法，其中，pcr检测法和酶联免疫检测法准确率高，但方法学操作步骤复杂、耗时长、必须借助相关仪器设备，并且操作人员必须经过专业培训才能胜任，从而限制了普通用户的使用。
5、胶体金检测法操作简单，但敏感性低；免疫荧光检测法敏感性较胶体金检测法略高，但也需要借助相应设备观察结果。
6、目前市面上同时快
7、因此，建立一种快速、高灵敏度同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的方法尤为重要，可为临床诊断提供技术支持。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本申请提供一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，具有使用方便、操作简单、便于推广的优点，且不需要额外添加抗凝猫红细胞的物质，即可保持膜面背景干净，并且能区分猫艾滋/猫白血病感染。
2、第一方面，本申请提供一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，采用如下的技术方案：
3、一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，所述试剂盒包括酶标蛋白工作液，所述酶标蛋白工作液为含有终浓度为0.083％-0.125％酶标偶联物的工作液，酶标偶联物为含有hrp标记的fiv重组抗原1和felv单克隆抗体1的偶联物。
4、优选的，酶标偶联物的制备方法，步骤如下：
5、将辣根过氧化物酶溶解于乙酸钠溶液中，加入高碘酸钠进行混合后，加入乙二醇进行混合，再加入氯化钠溶液进行混合后，加入无水乙醇进行混合，离心，得到沉淀；
6、将沉淀溶解于碳酸盐缓冲液中，加入fiv重组抗原1、felv单克隆抗体1和反应剂进行混合，再加入硼氢化钠进行混合后，纯化，得到酶标偶联物。
7、优选的，所述反应剂为椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱(chsb)和/或十八烷基羟基磺基甜菜碱(dhsb)。
8、通过采用上述技术方案，椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、十八烷基羟基磺基甜菜碱二者均为两性离子表面活性剂，在酸性及碱性条件下均具有优良的稳定性，具有良好的抗静电效果，加入反应剂，有效减少hrp与标记蛋白之间，因阴阳离子静电吸附造成的聚集和沉淀，提高产品特异性；另外，二者均具有良好的分散性和亲水性，可以使待标记蛋白在反应液中分散的更均匀有效提高偶联效率，提高产品灵敏度。
9、优选的，加入高碘酸钠溶液进行混合的温度为2-8℃，反应时间为10-30分钟。
10、更优选的，加入高碘酸钠溶液进行混合的温度为2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃。
11、更优选的，加入高碘酸钠溶液进行混合的反应时间为10分钟、15分钟、20分钟、25分钟或30分钟。
12、优选的，加入乙二醇进行反应的时间为20-40分钟。
13、更优选的，加入乙二醇进行反应的时间为20分钟、25分钟、30分钟、35分钟或40分钟。
14、优选的，加入fiv重组抗原1、felv单克隆抗体1和反应剂，进行混合的温度为20-30℃，反应时间为2-3h。
15、更优选的，加入fiv重组抗原1、felv单克隆抗体1和反应剂，进行混合的温度为20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃。
16、更优选的，加入fiv重组抗原1、felv单克隆抗体1和反应剂，进行反应的时间为2h、2.1h、2.2h、2.3h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h、2.9h或3h。
17、优选的，加入硼氢化钠进行混合的时间为0.5-1.5h。
18、更优选的，加入硼氢化钠进行混合的时间为0.5h、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、1.0h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h或1.5h。
19、优选的，辣根过氧化物酶与高碘酸钠质量比为1:(1.5-2)。
20、优选的，辣根过氧化物酶与乙二醇质量比为1:(1.1-1.7)。
21、优选的，辣根过氧化物酶与碳酸盐缓冲液的质量体积比为5mg:1ml；其中，碳酸盐缓冲液浓度为0.05m。
22、优选的，辣根过氧化物酶与fiv重组抗原1质量比为1:(0.5-1)。
23、优选的，辣根过氧化物酶与felv单克隆抗体1质量比为1:(0.5-1)。
24、优选的，辣根过氧化物酶与反应剂质量比为1:(0.2-0.6)。
25、优选的，辣根过氧化物酶与硼氢化钠质量比为1:(0.8-1.2)。
26、优选的，辣根过氧化物酶与乙酸钠溶液的质量体积比为10mg:1ml；其中，乙酸钠溶液浓度为0.1m。
27、优选的，辣根过氧化物酶与氯化钠溶液的质量体积比为100mg:3ml；其中，氯化钠溶液浓度为200g/l。
28、优选的，辣根过氧化物酶与无水乙醇的质量体积比为10mg:1.2ml。
29、优选的，所述酶标蛋白工作液的制备步骤如下：用工作液稀释酶标偶联物，其中，稀释酶标偶联物所用的工作液的组分包括2.42-6g/l tris、4.5-9g/l氯化钠、5-10g/lbsa、50-100g/l海藻糖、5-10g/l聚(乙二醇)-block-聚(丙二醇)-block-聚(乙二醇)以及50-100g/l甘油。
30、通过采用上述技术方案，对工作液的组分进行改进，加入聚(乙二醇)-block-聚(丙二醇)-block-聚(乙二醇)为聚醚多元醇，能很好地与酶标偶联物包合形成非共价复合物，其羟基与蛋白质中的极性基团形成氢键，从而本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括酶标蛋白工作液、试纸条和冲洗液，其中，所述酶标蛋白工作液为含有终浓度为0.083%-0.125%酶标偶联物的工作液，所述酶标偶联物为含有辣根过氧化物酶标记的FIV重组抗原1和FeLV单克隆抗体1的偶联物。
2.根据权利要求1所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于，所述酶标偶联物的制备方法，步骤如下：
3.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述反应剂为椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱和/或十八烷基羟基磺基甜菜碱。
4.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：加入高碘酸钠溶液进行混合的温度为2-8℃，反应时间为10-30分钟；
5.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶与高碘酸钠质量比为1:（1.5-2）；
6.根据权利要求1所述的一种
7.根据权利要求1所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述试纸条包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上包被有一条质控线以及二条检测线。
8.根据权利要求7所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述质控线包被有羊抗鼠IgG。
9.根据权利要求7所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述二条检测线分别包被有FeLV单克隆抗体2、FIV重组抗原2。
10.根据权利要求1所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述冲洗液为含有3，3'，5，5'-四甲基联苯胺的缓冲液，其中，辣根过氧化物酶和3，3'，5，5'-四甲基联苯胺的质量比为1:（27000-40500）。
...【技术特征摘要】
1.一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括酶标蛋白工作液、试纸条和冲洗液，其中，所述酶标蛋白工作液为含有终浓度为0.083%-0.125%酶标偶联物的工作液，所述酶标偶联物为含有辣根过氧化物酶标记的fiv重组抗原1和felv单克隆抗体1的偶联物。
2.根据权利要求1所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于，所述酶标偶联物的制备方法，步骤如下：
3.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述反应剂为椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱和/或十八烷基羟基磺基甜菜碱。
4.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：加入高碘酸钠溶液进行混合的温度为2-8℃，反应时间为10-30分钟；
5.根据权利要求2所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶与高碘酸钠质量比为1:（1.5-2）；
6.根据权利要求1所述的一种基于酶层析法同时检测猫艾滋抗体、猫白血病抗原的试剂盒，其特征在于，所述酶标蛋白工作液的制备步骤如下：用工作液稀...
【专利技术属性】
技术研发人员：缪佳颖，童坤，肖潇，黄磊，
申请(专利权)人：申基宜兴健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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