【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，属于代谢组学。
技术介绍
1、龟甲是一种具有良好生物活性的食药两用型水生副产物，为龟科动物的背甲和腹甲，营养成分丰富，主要包括蛋白、脂肪、矿物质元素及氨基酸等，始载于《神农本草经》，被列为上品，当时认为只有腹甲才具有营养药用价值，因此很长一段时间造成了背甲的巨大浪费，直至《中国药典》出版后，二者才被看作一个整体使用。尽管如此，目前临床和中医用药，仍以腹甲为主，这可能与背甲的药用价值研究尚未全面探索有关。而化学成分常作为揭示中药药理机制的关键环节。因此，进一步明确龟的背甲和腹甲化学成分构成情况，对后续深入研究龟背甲和腹甲药用价值差异、药理作用的生物学机制、龟甲资源的充分开发利用、以及提供鉴别背、腹甲科学有效的质量指标和监管标准等方面具有重要的推动意义。
2、非靶代谢组学是一种基于全谱分析的高通量的代谢组学技术，可有效分析同一样本不同部位化学成分分布和数量，目的是寻找差异性成分，解析样本中不同组织部位的表型差异原因。该技术具有发现未知的代谢物、检测覆盖度广及灵敏度高等优势。
3、综上，为了能够科学有效鉴别龟背甲、腹甲的差异。本专利技术以中华草龟的龟甲作为研究对象，借助非把代谢组学手段寻找背甲和腹甲提取物的差异化学成分。旨在为背甲资源开发利用、提供鉴别背腹甲之间的质量控制和监管标准，及其药效物质基础研究提供一定的理论指导。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，包括下列步骤：
3、步骤1：龟甲提取物的制备
4、将龟甲烘干，粉碎后得到龟甲粉；然后将龟甲粉加入水中，在55-80℃水浴中加热0.5-2h，重复1-5次；将上清液浓缩得到浓缩液，得到样品；
5、步骤2：代谢组学分析
6、使用液相色谱质谱联用技术对样品进行分析。
7、优选的技术方案为：所述样品分析包括样品制备、色谱分离和质谱检测；通过数据处理和峰识别等步骤，得到化学成分的信息，并与数据库进行匹配、注释和数据处理，随后对处理的数据进行物质分类统计、主成分分析、热图分析、正交偏最小二乘判别分析、接收者操作特征曲线分析来筛选区分背甲和腹甲间的化学标志物。
8、优选的技术方案为：将样品加入提取液；35 hz研磨处理4 min，冰水浴中超声5min；重复步骤2-3次；-40 ℃静置1 h;将样品4 ℃，12000 rpm，半径8.6cm；离心15 min；取上清于进样瓶中上机检测；所有样品另取等量上清混合成qc样品上机检测。
9、优选的技术方案为：提取液由甲醇:乙腈:水按照=2: 2: 1体积比混合后制得，含同位素标记内标混合物。
10、优选的技术方案为：使用 vanquish超高效液相色谱仪，通过waters acquity 上调lcbeh amide液相色谱柱对目标化合物进行色谱分离7；液相色谱a相为水相，含25 mmol/l乙酸铵和25 mmol/l氨水，b相为乙腈；样品盘温度：4 ℃，进样体积：2 μl。
11、优选的技术方案为：利用生物信息学分析网站对lc-ms分析的数据进行物质分类统计、主成分分析和热图分析。
12、优选的技术方案为：采用有监督的opls-da模型表征背甲和腹甲之间的差异变化，同时予以200次置换检验以判断模型是否存在过拟合现象。
13、由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：
14、本专利技术采用代谢组学技术，首次明了出龟背甲和腹甲的差异化学成分，并筛选出前10种具有显著差异的化学标志物，为了促进市场上背甲资源利用度，区分背、腹甲差异，提供了一种方便、快速、科学有效的鉴别方法。
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1.一种基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：所述样品分析包括样品制备、色谱分离和质谱检测；通过数据处理和峰识别等步骤，得到化学成分的信息，并与数据库进行匹配、注释和数据处理，随后对处理的数据进行物质分类统计、主成分分析、热图分析、正交偏最小二乘判别分析、接收者操作特征曲线分析来筛选区分背甲和腹甲间的化学标志物。
3.根据权利要求2所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：将样品加入提取液；35 Hz研磨处理4 min，冰水浴中超声5 min；重复步骤2-3次；-40 ℃静置1 h;将样品4 ℃，12000 rpm，半径8.6cm；离心15 min；取上清于进样瓶中上机检测；所有样品另取等量上清混合成QC样品上机检测。
4.根据权利要求3所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：提取液由甲醇:乙腈:水按照=2: 2: 1体积比混合后制得，含同位素标记内标混合物。
5.根据权利要求3所述的基
6.根据权利要求2所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：利用生物信息学分析网站对LC-MS分析的数据进行物质分类统计、主成分分析和热图分析。
7.根据权利要求2所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：采用有监督的OPLS-DA模型表征背甲和腹甲之间的差异变化，同时予以200次置换检验以判断模型是否存在过拟合现象。
...【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：所述样品分析包括样品制备、色谱分离和质谱检测；通过数据处理和峰识别等步骤，得到化学成分的信息，并与数据库进行匹配、注释和数据处理，随后对处理的数据进行物质分类统计、主成分分析、热图分析、正交偏最小二乘判别分析、接收者操作特征曲线分析来筛选区分背甲和腹甲间的化学标志物。
3.根据权利要求2所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和腹甲的方法，其特征在于：将样品加入提取液；35 hz研磨处理4 min，冰水浴中超声5 min；重复步骤2-3次；-40 ℃静置1 h;将样品4 ℃，12000 rpm，半径8.6cm；离心15 min；取上清于进样瓶中上机检测；所有样品另取等量上清混合成qc样品上机检测。
4.根据权利要求3所述的基于代谢组学鉴别中华草龟背甲和...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆剑锋，任梦影，林琳，姜绍通，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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