【技术实现步骤摘要】
本申请案主张2017年5月15日申请的美国临时申请案序列号第62/506,561号、2017年5月15日申请的美国临时申请案序列号第62/506,569号、2017年5月15日申请的美国临时申请案序列号第62/506,574号、2017年9月27日申请的美国临时申请案序列号第62/564,083号、2017年10月3日申请的美国临时申请案序列号第62/567,334号、2018年1月16日申请的美国临时申请案序列号第62/618,021号、2018年1月31日申请的美国临时申请案序列号第62/624,638号、及2018年4月20日申请的美国临时申请案序列号第62/660,758号的权益，主张这些申请案中每一者的优先权且其中每一者以全文引用方式并入本文。本专利技术涉及医学、遗传学及重组醣蛋白生物化学领域，且具体来说，是关于重组人类α-葡萄醣苷酶(recombinant humanα-glucosidase；rhgaa)组合物，其具有较高总含量的带甘露糖-6-磷酸酯的n-聚醣，从而有效地靶向细胞上的cimpr且随后将rhgaa递送至溶酶体，在溶酶体中，所述rhgaa可分解异常高水平的所累积肝醣。本专利技术的rhgaa相较于传统rhgaa产品展现优异的对肌细胞的靶向及向溶酶体之后续递送且展现其他药物动力学性质，使得其尤其有效地用于患有庞贝病的受试者的酶替代疗法。本专利技术也提供用于治疗庞贝病的方法，其包含向个体施用rhgaa及药理学伴护蛋白的组合。例如，在一些实施例中，本专利技术提供用于治疗庞贝病的方法，其包含向个体施用rhgaa及美格鲁特(miglust
技术介绍
1、庞贝病为一种由缺乏酸性α-葡萄醣苷酶(gaa)活性而产生的遗传性溶酶体贮积症。患有庞贝病的人缺少酸性α-葡萄醣苷酶(gaa)或具有降低水平的酸性α-葡萄醣苷酶，所述酶将肝醣分解成作为肌肉的主要能量来源的葡萄糖。这种酶缺乏引起溶酶体中过量的肝醣累积，这些溶酶体为含有一般地分解肝醣及其他细胞碎屑或废产物的酶的细胞内胞器。在患有庞贝病的受试者的某些组织、尤其上肌肉中的肝醣累积削弱细胞正常起作用的能力。在庞贝病中，肝醣并未适当地代谢且逐渐地累积在溶酶体中，尤其在骨骼肌细胞及在疾病的婴儿型发病形式中是累积在心肌细胞中。肝醣的累积破坏肌肉及神经细胞以及其他受影响组织中的那些细胞。
2、传统上，取决于发病的年龄，庞贝病在临床上被视为早期婴儿型形式或晚发型形式。发病的年龄趋向于与引起庞贝病的遗传突变的严重性平行。最严重的遗传突变引起gaa活性的完全损失且在婴儿期期间表现为早期发病疾病。减少gaa活性但并未完全消除的遗传突变与患有延迟型发病及进程的庞贝病形式相关联。婴儿型发病庞贝病在出生后不就表现且特征在于肌肉虚弱、呼吸功能不全及心力衰竭。未治疗时，通常在两年内是致命的。青少年及成年发病的庞贝病在生命稍后期表现且通常比婴儿型发病的疾病更缓慢地进程。虽然这形式的疾病通常不影响心脏，但其也可造成死亡，这是因为骨骼肌及涉及呼吸的肌肉的弱化。
3、庞贝病的当前非舒减治疗涉及使用重组人类gaa(recombinant human gaa；rhgaa)的酶替代疗法(enzyme replacement therapy；ert)，所述重组人类gaa是已知为或阿葡糖苷酶α。这种传统酶替代疗法设法通过施用rhgaa替换溶酶体中遗漏的gaa因此恢复细胞分解溶酶体肝醣的能力来治疗庞贝病。及是通过genzyme作为生物学剂生产或出售且通过美国食品及药物管理局批准的传统形式的rhgaa，且参考physician's desk reference(2014)(其据这以引用方式并入)来描述。阿葡糖苷酶α是鉴定为化学名称[199-精胺酸,223-组胺酸]前驱升-α-葡萄醣苷酶(人类)；分子式为c4758h7262n1274o1369s35；cas编号420794-05-0。这些产品是施用至患有庞贝病的受试者，所述庞贝病也称为ii型肝醣储积病(glycogen storage disease typeii；gsd-ii)或酸性麦芽糖酶缺乏病。
4、rhgaa分子的细胞吸收是通过特殊碳水化合物甘露糖-6-磷酸酯(m6p)促进，所述碳水化合物结合至存在于诸如肌细胞的靶细胞上的阳离子独立性甘露糖-6-磷酸酯受体(cation-independent mannose-6-phosphate receptor；cimpr)。在结合之后，rhgaa分子通过靶细胞吸收且随后转运至细胞内的溶酶体中。然而，大多数传统rhgaa产品缺少高总含量的带单m6p及双m6p的n-聚醣(也就是说，分别是带有一个m6p残基的n-聚醣或带有两个m6p残基的n-聚醣)，从而限制其通过cimpr的细胞吸收及溶酶体递送，因此使得传统酶替代疗法低效。例如，虽然20mg/kg或更高剂量的传统rhgaa产品确实改善庞贝病的一些方面，但其尤其不能充分地(i)治疗隐伏的细胞功能障碍，(ii)恢复肌肉结构，或(iii)减少在诸如骨骼肌的许多靶组织中的累积肝醣以逆转疾病进程。另外，较高剂量可对受试者以及治疗受试者的医学专业人士施加另外的负担，诸如使静脉内施用rhgaa所需的输注时间加长。仍然存在对进一步改善用于治疗庞贝病的酶替代疗法的需要，诸如具有改善组织吸收、改善酶活性、改善稳定性、或减少免疫原性的rhgaa。
5、gaa或rhgaa的醣基化可通过磷酸转移酶及canfield等人的美国专利第6,534,300号所描述的揭露酶来活体外(in vitro)酶促修饰以产生m6p基团。酶促醣基化不能充分受控且产生具有不合需要的免疫学及药理学性质的rhgaa。经酶促修饰的rhgaa可仅含有高甘露糖n-聚醣，其全部可潜在地经磷酸转移酶/揭露酶活体外酶促磷酸化且可含有每gaa平均5-6个m6p基团。通过gaa的活体外酶促治疗产生的醣基化型式是有问题的，因为另外的末端甘露糖残基、尤其非磷酸化末端甘露糖残基负面地影响修饰后rhgaa的药物动力学。当这种经酶促修饰产品活体内施用时，这些甘露糖基团增加gaa的非大量清除，增加经酶促修饰gaa通过免疫细胞的吸收，且因为达到靶组织的gaa较少而减少rhgaa治疗功效，这些靶组织诸如心脏或骨骼肌肌细胞。例如，末端非磷酸化甘露糖残基为肝及脾中的甘露糖受体的已知配位体，其导致经酶促修饰rhgaa的快速清除及rhgaa对靶组织的减少靶向。此外，具有带末端非磷酸化甘露糖残基的高甘露糖n-聚醣的经酶促修饰gaa的醣基化型式类似于在酵母及霉菌中产生的醣蛋白上的醣基化型式，且增加触发对经酶促修饰rhgaa的免疫或过敏性反应、诸如危急生命的严重过敏(过敏性)或高敏性反应的风险。
6、鉴于传统rhgaa产品及磷酸化rhgaa的活体外方法的这些缺陷，专利技术人致力于寻找一种经确认方式来产生具有优化n-聚醣分布的rhgaa以增强生物分布及溶酶体吸收且进而最小化rhgaa在一旦被施用时的非大量清除。本专利技术为稳定或衰退的庞贝症患者提供一种有效疗法，其在细胞水平逆转本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhGAA)分子的群体；
2.根据权利要求1所述的方法，其中逆转疾病进程包括减小的所述受试者的肌肉中的溶酶体大小。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中逆转疾病进程包括解决的所述受试者的肌肉中的自噬堆积。
4.根据权利要求3所述的方法，其中在治疗之后所述受试者中分析的肌肉纤维的少于65％具有自噬堆积。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述受试者是ERT切换患者。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述ERT切换患者先前已经用阿葡糖苷酶α治疗了至少两年。
7.根据权利要求1-6所述的方法，其中在治疗之后所述受试者中分析的肌肉纤维的至少36％具有正常或接近正常的外观。
8.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhGAA)分子的群体；
9.根
10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中在治疗之后，在一次、两次、三次、四次、五次、或六次施用之后评定时，所述受试者的肌肉中的所述肝醣含量是比当以相同剂量施用阿葡糖苷酶α时更有效地减少。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在治疗之后所述受试者的肌肉中的所述肝醣含量是比当以相同剂量施用阿葡糖苷酶α时至少约10％、20％、30％、50％、75％、或90％更有效地减少。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述肝醣含量是在六次施用之后评定。
13.根据权利要求8-12中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗之后展现减少水平的尿己糖四醣。
14.根据权利要求13所述的方法，其中在治疗之后六个月时尿己糖四醣的所述水平相较于基线减少至少30％。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ERT切换患者或无行动力的ERT切换患者，且其中在治疗之后六个月时所述受试者的尿己糖四醣的水平相较于基线减少至少35％。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ERT原始患者且在治疗之后六个月时所述受试者的尿己糖四醣的水平相较于基线减少至少45％。
17.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhGAA)分子的群体；
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述受试者中的所述改善的运动功能是通过选自由以下各项组成的群的至少一种运动功能测试测量：六分钟步行测试(6MWT)、计时起立行走测试、四层楼梯攀爬测试、十米步行测试、Gowers氏测试、步态-楼梯-gower-椅子(GSGC)测试、或前述的组合。
19.根据权利要求18所述的方法，其中相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6MWT距离增加至少20米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试减少至少0.6秒，在治疗之后六个月时所述受试者的十米步行测试时间减少至少0.7秒，在治疗之后六个月时所述受试者的Gowers氏测试时间减少至少1秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的GSGC记分减少至少1。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ERT切换患者，且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6MWT距离增加至少20米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1.5秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试时间减少至少0.6秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的Gowers氏测试时间减少至少1秒。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ERT原始患者，且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6MWT距离增加至少40米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试减少至少0.6秒，在治疗之后六个月时所述受试者的十米步行测试时间减少至少0.7秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的GSGC记分减少至少1。
22.根据权利要求18所述的...
【技术特征摘要】
1.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhgaa)分子的群体；
2.根据权利要求1所述的方法，其中逆转疾病进程包括减小的所述受试者的肌肉中的溶酶体大小。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中逆转疾病进程包括解决的所述受试者的肌肉中的自噬堆积。
4.根据权利要求3所述的方法，其中在治疗之后所述受试者中分析的肌肉纤维的少于65％具有自噬堆积。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述受试者是ert切换患者。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述ert切换患者先前已经用阿葡糖苷酶α治疗了至少两年。
7.根据权利要求1-6所述的方法，其中在治疗之后所述受试者中分析的肌肉纤维的至少36％具有正常或接近正常的外观。
8.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhgaa)分子的群体；
9.根据权利要求8所述的方法，其中在治疗之后所述受试者的肌肉中的所述肝醣含量以比当以相同剂量施用阿葡糖苷酶α时的速率快至少约1.25、1.5、1.75、2.0、或3.0倍的速率减少。
10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，其中在治疗之后，在一次、两次、三次、四次、五次、或六次施用之后评定时，所述受试者的肌肉中的所述肝醣含量是比当以相同剂量施用阿葡糖苷酶α时更有效地减少。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在治疗之后所述受试者的肌肉中的所述肝醣含量是比当以相同剂量施用阿葡糖苷酶α时至少约10％、20％、30％、50％、75％、或90％更有效地减少。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其中所述肝醣含量是在六次施用之后评定。
13.根据权利要求8-12中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗之后展现减少水平的尿己糖四醣。
14.根据权利要求13所述的方法，其中在治疗之后六个月时尿己糖四醣的所述水平相较于基线减少至少30％。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert切换患者或无行动力的ert切换患者，且其中在治疗之后六个月时所述受试者的尿己糖四醣的水平相较于基线减少至少35％。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert原始患者且在治疗之后六个月时所述受试者的尿己糖四醣的水平相较于基线减少至少45％。
17.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhgaa)分子的群体；
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述受试者中的所述改善的运动功能是通过选自由以下各项组成的群的至少一种运动功能测试测量：六分钟步行测试(6mwt)、计时起立行走测试、四层楼梯攀爬测试、十米步行测试、gowers氏测试、步态-楼梯-gower-椅子(gsgc)测试、或前述的组合。
19.根据权利要求18所述的方法，其中相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6mwt距离增加至少20米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试减少至少0.6秒，在治疗之后六个月时所述受试者的十米步行测试时间减少至少0.7秒，在治疗之后六个月时所述受试者的gowers氏测试时间减少至少1秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的gsgc记分减少至少1。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert切换患者，且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6mwt距离增加至少20米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1.5秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试时间减少至少0.6秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的gowers氏测试时间减少至少1秒。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert原始患者，且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的6mwt距离增加至少40米，在治疗之后六个月时所述受试者的计时起立行走测试时间减少至少1秒，在治疗之后六个月时所述受试者的四层楼梯攀爬测试减少至少0.6秒，在治疗之后六个月时所述受试者的十米步行测试时间减少至少0.7秒，或在治疗之后六个月时所述受试者的gsgc记分减少至少1。
22.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者先前接收阿葡糖苷酶α酶替代疗法，其中相较于在所述先前阿葡糖苷酶α酶替代疗法之后所述受试者的运动功能测试结果，在利用rhgaa的所述群体治疗之后所述受试者展现至少一种运动功能的改善。
23.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhgaa)分子的群体；
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者的所述改善的上身力量是通过徒手肌肉力量记分测量。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert切换患者且在治疗之后六个月时展现相较于基线的至少1的上身徒手肌肉力量记分的改善。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述受试者为无行动力的ert切换患者且在治疗之后六个月时展现相较于基线的至少5.5的上身徒手肌肉力量记分的改善。
27.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者的所述改善的上身力量为改善的上肢力量，其中上肢力量是通过选自由以下各项组成的群的至少一种上肢肌群的定量肌肉测试或徒手肌肉测试测量：肩膀内收、肩膀外展、肘屈曲、及肘伸展。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述受试者为无行动力的ert切换患者，且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的肩膀内收改善至少8磅的力，在治疗之后六个月时所述受试者的肩膀外展改善至少1磅的力，在治疗之后六个月时所述受试者的肘屈曲改善至少2磅的力，或在治疗之后六个月时所述受试者的肘伸展改善至少5磅的力。
29.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者为有行动力的且在治疗之后进一步展现改善的下身力量及/或全身力量。
30.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者先前接收阿葡糖苷酶α酶替代疗法，其中相较于在所述先前阿葡糖苷酶α酶替代疗法之后所述受试者的上身力量，在利用rhgaa的所述群体治疗之后所述受试者展现上身力量的改善。
31.一种治疗有需要的受试者的庞贝病的方法，其包含以下步骤：向所述受试者施用来自中国仓鼠卵巢(cho)细胞的重组人类酸性α-葡萄醣苷酶(rhgaa)分子的群体；
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述受试者中的所述改善的肺功能是通过选自由以下各项组成的群的至少一个肺功能测试来测量：直立用力肺活量(fvc)测试、最大呼气压(mep)测试、最大吸气压(mip)测试、及前述的组合。
33.根据权利要求32所述的方法，其中相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的fvc改善至少4％，在治疗之后六个月时所述受试者的mep改善至少16厘米水柱，或在治疗之后六个月时所述受试者的mip改善至少0.3厘米水柱。
34.根据权利要求32所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert切换患者且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的mep改善至少16厘米水柱。
35.根据权利要求32所述的方法，其中所述受试者为有行动力的ert原始患者且其中，相较于基线，在治疗之后六个月时所述受试者的fvc改善至少4％或在治疗之后六个月时所述受试者的mip改善至少11厘米水柱。
36.根据权利要求32所述的方法，其中所述受试者先前接收阿葡糖苷酶α酶替代疗法，其中相较于在所述先前阿葡糖苷酶α酶替代疗法之后所述受试者的肺功能测试结果，在利用rh...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·杜，拉塞尔·戈乔尔，里奇·肯纳，易·伦，亨·査尔，谢尔盖·特斯勒，温迪·桑德兰，恩里克·迪隆，
申请(专利权)人：阿米库斯治疗学公司，
类型：发明
国别省市：
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