【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物中间体检测领域，具体涉及氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法。
技术介绍
1、氯化琥珀胆碱是一种用于静脉给药的超短效去极化骨骼肌肉松弛剂，通用名为琥珀胆碱、司可林，化学名为二氯化2’,2-[(1,4-二氧代-1,4-亚丁基)双(氧)]双(n,n,n-三甲基乙胺)二水合物，化学式如式i所示，分子式为c14h30cl2n2o4·2h2o，分子量为397.34。
2、
3、氯化琥珀胆碱可替代乙酰胆碱，与胆碱能受体的运动终板结合产生去极化，肌松(弛缓性麻痹)作用起效很快，代谢迅速，临床得以广泛应用，目前尚无一种非去极化肌松药能完全具备其优点。氯化琥珀胆碱能提供较满意的气管内插管条件，已成为使用时间最长的肌松药，是目前困难插管和紧急插管时唯一被选用的肌松药。
4、在氯化琥珀胆碱原料药的主流合成工艺中，一般采用丁二酸(即琥珀酸)或其酐为起始原料，加入酰氯化试剂，如固体光气(btc)或二氯亚砜，dmf为引发剂，得到中间体丁二酰氯(即琥珀酰氯)，而后向上述反应液中加入氯化胆碱，经过后处理后得到氯化琥珀胆碱。
5、在氯化琥珀胆碱的制备过程中，涉及对反应中间体丁二酰氯的控制，丁二酰氯中间体中可能存在杂质：丁二酸、丁二酸单甲酯、2,3-二氯马来酸单甲酯和4-(4-甲基苯基)-4-氧代丁酸甲酯，这些杂质可能残留至氯化琥珀胆碱成品中，从而影响成品质量，故需要进行控制，尤其是丁二酸，其亦为氯化琥珀胆碱的降解杂质，在药典中明确需对其进行控制。
6、目前各国药典中，仅有usp药典对
7、目前，尚无文献报道丁二酰氯及上述4种杂质的检测方法，在氯化琥珀胆碱中间体丁二酰氯及其多个杂质测定中存在如下问题：
8、第一，杂质数量较多且极性相近，尤其是丁二酰氯与甲醇/水的衍生物丁二酸二甲酯和2，3-二氯马来酸单甲酯较难分离，对分析方法选择性要求较高，丁二酸极性较大，保留较差，且易与固定相中残留的硅羟基产生次级保留效应导致峰形较差。
9、第二，目标待测物的紫外吸收靠近末端。丁二酰氯中间体及其杂质的紫外吸收靠近末端，对流动相、添加剂种类的选择造成了困难。
10、由以上可见，对氯化琥珀胆碱中间体丁二酰氯及其多个杂质进行质量控制，尚有极大的探索空间。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，丁二酸、丁二酸单甲酯、2,3-二氯马来酸单甲酯和4-(4-甲基苯基)-4-氧代丁酸甲酯的分离度在2.0以上，线性良好，重复性良好，准确度高，实现了对氯化琥珀胆碱中间体丁二酰氯及其杂质的分离及质量控制，从而保障终产品氯化琥珀胆碱的质量。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，包括以下步骤：
4、对氯化琥珀胆碱中间体丁二酰氯的待测溶液进行高效液相色谱法检测，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.05～0.5％磷酸水溶液为流动相a、甲醇为流动相b进行梯度洗脱；检测波长：200～220nm；进样量：5～50μl；流速：0.5～1.5ml/min；色谱柱温度：30～60℃。
5、优选地，所述杂质包括丁二酸、丁二酸单甲酯、2,3-二氯马来酸单甲酯和4-(4-甲基苯基)-4-氧代丁酸甲酯。
6、进一步，所述洗脱过程为：以体积百分数为96～100％的流动相a、0～4％的流动相b为起始流动相等度洗脱6～12min后，梯度洗脱8～15min，流动相组成达10～40％的流动相a、50～90％的流动相b后等度洗脱12～20分钟，再恢复起始流动相进行平衡，平衡时间不小于5分钟。
7、优选地，所述色谱柱选自waters xbridge c18、waters atlantis t3、xtimatec18、waters acquity hss t3、inertsil ods-3。
8、又，所述色谱柱填料粒径≤4.6μm，长度≥150cm，内径≤5mm。
9、又，所述待测溶液中丁二酸二甲酯的浓度为3～8mg/ml。
10、丁二酰氯中间体及相关杂质的紫外吸收靠近末端，均存在末端吸收的问题，专利技术人意外地发现，通过采用以十八烷基硅烷键合硅胶(c18)为填充剂的色谱柱配合特定的酸性流动相，可以改善这些化合物的保留情况，如增加丁二酸的保留，改善丁二酸的峰形。然而，由于丁二酰氯中间体及其杂质的紫外吸收均靠近末端，多数流动相添加剂因紫外截止波长较大，可能会造成基线较差和目标物响应较差，因此对流动相种类的选择有较多限制。
11、丁二酸极性较大，保留较差，且易与固定相中残留的硅羟基产生次级保留效应导致峰形较差。本专利技术选择磷酸比例为0.05～0.5％，进一步增强了丁二酸的保留，改善峰形，并改善了目标峰的分离度。若磷酸比例过低，则增强保留和改善峰形的效果不明显，且丁二酸二甲酯与2，3-二氯马来酸单甲酯的分离度较差；若磷酸比例过高，目标峰的色谱行为改善有限，反而因流动相ph值过低，对色谱柱造成不可逆的损伤。
12、本专利技术中，杂质数量较多且极性相近，尤其是丁二酰氯与甲醇/水的衍生物丁二酸二甲酯和2，3-二氯马来酸单甲酯较难分离，针对各杂质的保留能力开发洗脱梯度，使所有杂质均可被洗脱出峰且较好分离。在洗脱时，以体积百分数为96～100％的流动相a、0～4％的流动相b为起始流动相等度洗脱，分离度更优，峰形更好。等度洗脱时，若有机溶剂比例过大则会导致各组分保留能力和分离度变差，有机相比例过小则有可能色谱峰展宽，对峰形有负面影响。梯度洗脱8～15min后流动相中流动相a的比例达10～40％，有助于增加丁二酸单甲酯、丁二酸二甲酯和2，3-二氯马来酸单甲酯的分离度，从而获得良好的专属性和能准确的定量。
13、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
14、本专利技术中，空白溶剂对各杂质检查无干扰，各杂质分离度在2.0以上，专属性较好；采用杂质对照品进行外标法定量，回收率在98～110％之间，准确度良好，保障了检测结果的准确性；线性相关系数r在0.998以上，线性良好，回收率rsd处于0.9～1.3％，重复性良好。
15、通过专属性、线性、重复性、准确度等试验对本专利技术方法进行方法学验证性考察，结果表明，本专利技术方法对所述四种杂质的检测专属性好，重复性好，准确度高，能够满足氯化琥珀胆碱中间体丁二酰氯杂质测定的需要。
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1.氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述杂质包括丁二酸、丁二酸单甲酯、2,3-二氯马来酸单甲酯和4-(4-甲基苯基)-4-氧代丁酸甲酯。
3.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程为：以体积百分数为96～100％的流动相A、0～4％的流动相B为起始流动相等度洗脱6～12min后，梯度洗脱8～15min，流动相组成达10～40％的流动相A、50～90％的流动相B后等度洗脱12～20分钟，再恢复起始流动相进行平衡，平衡时间不小于5分钟。
4.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱选自Waters XBridge C18、Waters Atlantis T3、Waters ACQUITY HSS T3或InertsilODS-3。
5.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱填料粒径≤4.6μm，长度≥150cm，
6.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述待测溶液中丁二酰氯的浓度为3～8mg/ml。
...【技术特征摘要】
1.氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述杂质包括丁二酸、丁二酸单甲酯、2,3-二氯马来酸单甲酯和4-(4-甲基苯基)-4-氧代丁酸甲酯。
3.根据权利要求1所述氯化琥珀胆碱中间体及相关杂质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程为：以体积百分数为96～100％的流动相a、0～4％的流动相b为起始流动相等度洗脱6～12min后，梯度洗脱8～15min，流动相组成达10～40％的流动相a、50～90％的流动相b后等度洗脱12～20分钟，再恢复起始流动...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨易可，程燕，金彩芬，梁屹，
申请(专利权)人：上海旭东海普药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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