【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫检测，尤其涉及一种apoe4的光激化学发光检测试剂、检测方法及其应用。
技术介绍
1、载脂蛋白e（apoe）是由肝细胞和脑组织等合成的一种分泌蛋白，可与不同细胞表面的多种受体结合，在脂质代谢、免疫调节和神经学等方面发挥关键作用。apoe有3种常见亚型，apoe2、apoe3、apoe4。其中，有研究表明apoe4除与血液中异常的脂质代谢有关，还可能会促进大脑内β-淀粉样蛋白（aβ）的沉积以及促进大脑内tau蛋白的异常磷酸化，被认为是动脉粥样硬化和阿尔兹海默病（alzheimer's disease，ad）的重要关联遗传风险因素。携带apoe ε4基因的人罹患ad的风险将显著增加。因此，apoe4检测可以提示阿尔茨海默症的发生风险。
2、通过基于pcr（polymerase chain reaction，聚合酶链式反应）技术进行基因分型检测是确定apoe等位基因状态的常用方法，例如利用实时pcr法、pcr-rflp（restrictionfragment length polymorphism，限制性片段长度多态性）法、荧光pcr-熔解曲线法等确定apoe的基因型，从而判断是否携带apoe ε4等位基因，具有灵敏度高、特异性强等优点，但同时需要专业的实验室设备和技术人员，操作复杂，耗时长，检测成本高，极大限制了其临床推广应用。
技术实现思路
1、为解决或部分解决相关技术中存在的问题，本申请提供一种apoe4的光激化学发光检测试剂、检测方法及其应用，增加了能够
2、本申请第一方面提供一种apoe4的光激化学发光检测试剂，其包括：
3、发光微球，其包被有第一抗体和第一标签分子；
4、第一配对分子，其能够特异性识别和结合至少两个第一标签分子；
5、第二抗体和第三抗体，均带有第二标签分子；
6、感光微球，其包被有能够特异性识别和结合所述第二标签分子的第二配对分子；
7、其中，所述第一抗体、第三抗体能够特异性识别和结合apoe蛋白，所述第二抗体能够特异性识别和结合apoe4亚型蛋白。
8、在一些实施方式中，所述第一标签分子和第一配对分子、第二标签分子和第二配对分子分别组成的两组特异性标签系统相互不发生反应。
9、在一些实施方式中，所述第一标签分子和所述第一配对分子组成的特异性标签系统选自tag-catcher系统，所述第二标签分子和所述第二配对分子组成的特异性标签系统选自生物素-亲和素系统。
10、在一些实施方式中，所述第一配对分子选自catcher的多聚体蛋白，且聚合度不低于2；优选为catcher的八聚体蛋白。
11、在一些实施方式中，所述第一配对分子的摩尔量低于或等于所述第一标签分子摩尔量。优选地，所述第一配对分子与所述第一标签分子的摩尔比为1:(1~16)。
12、在一些实施方式中，所述第一配对分子聚合度与其最适摩尔量呈负相关。所述第一配对分子聚合度与其最适摩尔量乘积优选为第一标签分子摩尔量的1~2.5倍。
13、在一些实施方式中，所述发光微球试剂中添加1~5m氯化钠和/或至少0.6%tritonx-405。
14、本申请第二方面提供一种apoe4的光激化学发光检测方法，其包括：
15、s1、将包含第一抗体和第一标签分子的发光微球试剂、包含第二标签分子的第二抗体试剂、包含第二配对分子的感光微球试剂与待测样本混合，得到包含“发光微球-apoe4亚型蛋白-感光微球”夹心免疫复合物的反应液；同时，将包含第一抗体和第一标签分子的发光微球试剂、包含第二标签分子的第三抗体试剂、包含第二配对分子的感光微球试剂与待测样本混合，得到包含“发光微球-apoe蛋白-感光微球”夹心免疫复合物的反应液；
16、s2、分别向两组反应液中加入第一配对分子试剂，得到两组混合溶液；
17、s3、分别用特定波长的光照射两组混合溶液，并检测发光值rlu1和rlu2，得到apoe4和apoe的检测结果；
18、s4、计算apoe4与apoe比值。
19、在一些实施方式中，步骤s2加入所述第一配对分子试剂后温育0~15min。
20、本申请第三方面提供一种如第一方面所述的试剂，或第二方面所述的检测方法在检测血液样本中的apoe4中的应用。
21、本申请提供的技术方案可以包括以下有益效果：通过在发光微球中同时包被抗体分子以及标签分子，再通过添加能够捕获至少两个该标签分子的工具蛋白可以使检测体系中的游离发光微球聚集到“发光微球-apoe4亚型蛋白-感光微球”或“发光微球-apoe蛋白-感光微球”夹心免疫复合物上，从而增加能够接收感光微球产生的活性氧的发光微球的量，提升活性氧利用率，整体上提升光激化学发光检测信号值，提升检测性能，满足apoe4的检测需求。通过调整检测试剂中盐离子浓度与表面活性剂浓度，能够减少非特异性吸附，提升样本比值的区分度，更好地满足apoe4的光激化学发光检测需求。自动化检测简便高效，无需复杂且昂贵的检测设备，易操作，且高通量、成本低，可检测无核酸信息的过往样本，能够广泛应用于apoe4的临床诊断。
22、应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本申请。
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1.一种APOE4的光激化学发光检测试剂，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述第一标签分子和第一配对分子、第二标签分子和第二配对分子分别组成的两组特异性标签系统相互不发生反应。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，所述第一标签分子和所述第一配对分子组成的特异性标签系统选自Tag-Catcher系统，所述第二标签分子和所述第二配对分子组成的特异性标签系统选自生物素-亲和素系统。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述第一配对分子选自Catcher的多聚体蛋白。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述第一配对分子的摩尔量低于或等于所述第一标签分子摩尔量。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述第一配对分子与所述第一标签分子的摩尔比为1:(1~16)。
7.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述第一配对分子聚合度与其最适摩尔量乘积为第一标签分子摩尔量的1~2.5倍。
8. 根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述发光微球试剂中添加1~
9.一种APOE4的光激化学发光检测方法，包括：
10.如权利要求1至8任一所述的试剂，或权利要求9所述的检测方法在检测血液样本中的APOE4中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种apoe4的光激化学发光检测试剂，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述第一标签分子和第一配对分子、第二标签分子和第二配对分子分别组成的两组特异性标签系统相互不发生反应。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，所述第一标签分子和所述第一配对分子组成的特异性标签系统选自tag-catcher系统，所述第二标签分子和所述第二配对分子组成的特异性标签系统选自生物素-亲和素系统。
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述第一配对分子选自catcher的多聚体蛋白。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述第一配...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾柳君，李珺山，吴晨，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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