一种包含AAV-9抗原结合结构域的结合蛋白制造技术

技术编号：43687915 阅读：5 留言：0更新日期：2024-12-18 21:06

本发明专利技术涉及一种包含AAV‑9抗原结合结构域的结合蛋白，涉及免疫技术领域，1.所述抗原结合结构域包括互补决定区CDR‑VH1、互补决定区CDR‑VH2、互补决定区CDR‑VH 3；所述互补决定区CDR‑VH1的氨基酸序列为D‑Y‑T‑M‑X1，所述X1为A、H、S、T或N中的任意一种；所述互补决定区CDR‑VH2的氨基酸序列为A‑V‑S‑W‑S‑G‑S‑X2‑T‑X3‑Y‑A‑D‑S‑V‑X4‑G，所述X2是F、T、N、S或R中的任意一种，所述X3是K、Y、F、H或D中的任意一种，所述X4是K、R、E、A或Q中的任意一种；所述互补决定区CDR‑VH 3的氨基酸序列为G‑S‑T‑G‑P‑L‑A‑X5‑R‑T‑S‑P‑G‑D‑Y‑D‑X6，所述X5是A、Q、G、T或V中的任意一种，X6是R、Y、S、F或H中的任意一种。本发明专利技术中的结合蛋白活性强，与AAV‑9具有很高的亲和力，且与目前市面上常见的AVV‑9抗体相比，具有更优的亲和力。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫，尤其是涉及一种包含aav-9抗原结合结构域的结合蛋白。

技术介绍

1、腺病毒相关病毒(aav)最早是在20世纪60年代中期从实验室腺病毒(adv)制剂中发现的，并且很快就在人体组织中发现。在纯科学的好奇心驱使下，一些研究小组开始了解基本aav生物学的过程，此时并没有意识到其作为人类基因治疗平台的巨大潜力。在aav研究的前15-20年中，aav的几个重要方面被表征，包括其基因组构型和组成、dna复制和转录、感染潜伏期和病毒粒子组装。

2、aav属于细小病毒科dependoparvovirus属。它的生命周期依赖于辅助病毒的存在，例如adv。aav存在于多种脊椎动物中，包括人类和非人类灵长类动物(nhp)。目前的共识认为aav不会引起任何人类疾病。它由直径约26nm的二十面体蛋白质衣壳和～4.7kb的单链dna基因组组成。衣壳包含三种类型的亚基vp1、vp2和vp3，总共60种拷贝，比例为1:1:10(vp1:vp2:vp3)。现阶段研究人员已发现12种人类aav血清型(aav1至aav12)和100多种非人类灵长动物aav血清型。不同aav血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别，这也导致不同血清型转染的组织类型、细胞类型和感染效率也各不相同。

3、现如今，重组aav(raav)已经成为体内基因治疗递送的主要平台。第一种raav基因治疗产品是uniqure公司的alipogene tiparvovec(glybera)，于2012

4、aav的物理滴度一般是指基因组滴度或者衣壳滴度。基因组滴度常采用qpcr、digital droplet pcr(ddpcr)检测，qpcr由于样品制备，引物设计，pcr效率等差异，不同批次不同实验室会产生实验偏差，ddpcr虽然能克服一些qpcr的局限，不同样品处理方法仍然会产生偏差。而衣壳滴度主要是通过elisa方法进行检测，elisa方法具有可靠及重现性好的优点。对于应用于基因治疗的不同血清型的aav载体，尤其是经过序列结构优化改造的aav载体，都有需求开发出特异性抗体作为捕获和检测抗体，以elisa方法测定aav滴度。有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

1、本专利技术涉及一种新颖的包含aav-9抗原结合结构域的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。

2、其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区；或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与avv-9具有kd≤8.14×10 9的亲和力：

3、互补决定区cdr-vh1为d-y-t-m-x1，其中，x1是a、h、s、t或n中的任意一种。

4、互补决定区cdr-vh2为a-v-s-w-s-g-s-x2-t-x3-y-a-d-s-v-x4-g，其中，x2是f、t、n、s或r中的任意一种，x3是k、y、f、h或d中的任意一种，x4是k、r、e、a或q中的任意一种；

5、互补决定区cdr-vh3为g-s-t-g-p-l-a-x5-r-t-s-p-g-d-y-d-x6，其中，x5是a、q、g、t或v中的任意一种，x6是r、y、s、f或h中的任意一种。

6、本专利技术一个重要的优点在于，该结合蛋白活性强，与aav-9具有很高的亲和力，且与目前市面上常见的avv-9抗体相比，具有更优的亲和力。

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【技术保护点】

1.一种包含AAV-9抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括互补决定区CDR-VH1、互补决定区CDR-VH2、互补决定区CDR-VH3；

2.根据权利要求1所述的包含AAV-9抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，所述互补决定区CDR-VH2的氨基酸序列为A-V-S-W-S-G-S-X2-T-X3-Y-A-D-S-V-X4-G，所述X2是F、T、N、S或R中的任意一种，所述X3是K、Y、F、H或D中的任意一种，所述X4是K、R、E、A或Q中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的包含AAV-9抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于：所述互补决定区CDR-VH3的氨基酸序列为G-S-T-G-P-L-A-X5-R-T-S-P-G-D-Y-D-X6，所述X5是A、Q、G、T或V中的任意一种，X6是R、Y、S、F或H中的任意一种。

4.如权利要求1-3任一所述的包含AAV-9抗原结合结构域的结合蛋白在高特异性结合AAV9病毒颗粒/AAV9载体上的应用，其特征在于，其与AAV-9具有KD≤8.14×108的亲和力。

【技术特征摘要】

1.一种包含aav-9抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括互补决定区cdr-vh1、互补决定区cdr-vh2、互补决定区cdr-vh3；

2.根据权利要求1所述的包含aav-9抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，所述互补决定区cdr-vh2的氨基酸序列为a-v-s-w-s-g-s-x2-t-x3-y-a-d-s-v-x4-g，所述x2是f、t、n、s或r中的任意一种，所述x3是k、y、f、h或d中的任意一种，所述x4是k、r、e、a或q中的任意一...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨玲玲，吴奎锋，付娇玲，李因来，
申请(专利权)人：杭州艾策生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：

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