【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物，具体地，涉及一种解脂耶氏酵母微卫星位点、一种用于扩增解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组、一种用于检测解脂耶氏酵母微卫星位点的试剂盒、解脂耶氏酵母微卫星位点及其检测方法在解脂耶氏酵母的分子分型、分子溯源、院感监测、群体遗传和系统进化分析中的应用、一种非诊断目的的解脂耶氏酵母的检测方法。
技术介绍
1、目前，用于解脂耶氏酵母的分子标记仅有its和d1d2标记。但这些分子标记的种内多态性较低，无法满足对解脂耶氏酵母的菌株间亲缘关系鉴定、分子溯源、院感监测、群体遗传学等需要。
2、微卫星（microsatellite），又称简单重复序列（simple sequence repeats，ssr）或短串联重复序列（short tandem repeats，str），指基因组dna上的短的串联重复序列，重复单元一般为1-5bp，重复次数为5-40次。通过pcr检测重复区域的长度，可以进行遗传多态性分析。由于微卫星等位基因具有突变速率快的特点，因此该检测方法具有多态性高、特异性好、通量高、成本低等优点，并且在生物遗传作图、群体遗传研究、个体间亲缘关系鉴定等方面已得到广泛应用。然而，目前在病原体方面应用较少。
3、因此，提出种内高度多态性的微卫星位点分子标记及其检测方法具有重要的临床意义。
技术实现思路
1、本公开的目的是提供一种解脂耶氏酵母微卫星位点、一种用于扩增解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组、一种用于检测解脂耶氏酵母微卫星位点的试剂盒、解脂耶氏酵母微卫星位点及
2、为了实现上述目的，本公开提第一方面提供一种解脂耶氏酵母微卫星位点，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为seq id no.1-4所示的核苷酸序列中的任意一个。
3、可选地，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为seq id no.1-4所示的核苷酸序列中的任意两个、三个或四个的组合。
4、本公开第二方面提供一种解脂耶氏酵母微卫星位点的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
5、s1、提取解脂耶氏酵母的总dna；
6、s2、以所述总dna为模板，利用荧光标记的引物组在pcr反应体系中进行pcr扩增反应；
7、s3、对pcr扩增产物中的荧光标记dna片段进行多态性检测；
8、所述解脂耶氏酵母微卫星位点为第一方面所述的解脂耶氏酵母微卫星位点；
9、所述引物组包含核苷酸序列如seq id no.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no.9-12所示的反向引物。
10、可选地，每20μl的pcr反应体系中含有2µl的扩增缓冲液、1.6-4µl的dntp混合物、0.5-1µl的taq dna聚合酶、1-3µl的gdna、0.2-0.4µl的正向引物、0.2-0.4µl的反向引物和余量的去离子水；所述正向引物的浓度为5-20μm，所述反向引物的浓度为5-20μm；其中，所述正向引物的5’端通过荧光染料进行fam和/或hex标记。
11、可选地，所述pcr扩增反应的反应程序包括：94℃ 5min，94℃ 30s，60℃ 45s，72℃50s，35个循环；72℃ 5min。
12、可选地，所述多态性检测包括：利用毛细管电泳检测pcr扩增产物中的荧光标记dna片段，通过分子量内标确定所述pcr扩增产物的等位片段的位置和相对分子量。
13、本公开第三方面提供一种用于扩增第一方面所述的解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组，所述引物组包括核苷酸序列如seq id no.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如seqid no.9-12所示的反向引物。
14、本公开第四方面提供一种用于检测第一方面所述的解脂耶氏酵母微卫星位点的试剂盒，所述试剂盒中包含第四方面所述的用于扩增解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组。
15、本公开第五方面提供第一方面所述的解脂耶氏酵母微卫星位点或第三方面所述的检测方法在解脂耶氏酵母的分子分型、分子溯源、院感监测、群体遗传和系统进化分析中的应用。
16、本公开第六方面提供一种非诊断目的的解脂耶氏酵母的检测方法，包括如下步骤：
17、s1、提取待测样品的总dna；
18、s2、以所述的总dna为模板，利用荧光标记的引物组在pcr反应体系中进行pcr扩增反应；
19、s3、分析pcr扩增产物；
20、所述引物组包含核苷酸序列如seq id no.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no.9-12所示的反向引物。
21、通过上述技术方案，本专利技术首次提供了解脂耶氏酵母微卫星位点、该解脂耶氏酵母微卫星位点的检测方法和特异性引物组，利用上述解脂耶氏酵母微卫星位点、检测方法以及特异性引物组进行解脂耶氏酵母的检测，具有多态性高、特异型好、通量高、成本低等优点，在解脂耶氏酵母分子流行病学、群体遗传研究等方面具有重要意义。
22、本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种解脂耶氏酵母微卫星位点，其特征在于，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为SEQID NO.1-4所示的核苷酸序列中的任意一个。
2.根据权利要求1所述的解脂耶氏酵母微卫星位点，其中，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为SEQ ID NO.1-4所示的核苷酸序列中的任意两个、三个或四个的组合。
3.一种解脂耶氏酵母微卫星位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，每20μL的PCR反应体系中含有2μL的扩增缓冲液、1.6-4µl的dNTP混合物、0.5-1μL的Taq DNA聚合酶、1-3μL的gDNA、0.2-0.4μL的正向引物、0.2-0.4μL的反向引物和余量的去离子水；
5.根据权利要求3所述的检测方法，其中，所述PCR扩增反应的反应程序包括：94℃5min，94℃ 30s，60℃ 45s，72℃ 50s，35个循环；72℃ 5min。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其中，所述多态性检测包括：利用毛细管电泳检测PCR扩增产物中的荧光标记DNA片段，通过分子量内标确定
7.一种用于扩增权利要求1所述的解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组，其特征在于，所述引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9-12所示的反向引物。
8.一种用于检测权利要求1所述的解脂耶氏酵母微卫星位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含权利要求7所述的用于扩增解脂耶氏酵母微卫星位点的引物组。
9.权利要求1-2中任意一项所述的解脂耶氏酵母微卫星位点或权利要求3-6中任一项所述的检测方法在解脂耶氏酵母的分子分型、分子溯源、院感监测、群体遗传和系统进化分析中的应用。
10.一种非诊断目的的解脂耶氏酵母的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种解脂耶氏酵母微卫星位点，其特征在于，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为seqid no.1-4所示的核苷酸序列中的任意一个。
2.根据权利要求1所述的解脂耶氏酵母微卫星位点，其中，所述解脂耶氏酵母微卫星位点为seq id no.1-4所示的核苷酸序列中的任意两个、三个或四个的组合。
3.一种解脂耶氏酵母微卫星位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，每20μl的pcr反应体系中含有2μl的扩增缓冲液、1.6-4µl的dntp混合物、0.5-1μl的taq dna聚合酶、1-3μl的gdna、0.2-0.4μl的正向引物、0.2-0.4μl的反向引物和余量的去离子水；
5.根据权利要求3所述的检测方法，其中，所述pcr扩增反应的反应程序包括：94℃5min，94℃ 30s，60℃ 45s，72℃ 50s，35个循环；72℃ 5min。...
【专利技术属性】
技术研发人员：郁谨菡，赵颖，徐英春，郭莉娜，罗征宇，李琰冰，康巍，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。