【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学检测，特别涉及一种牛肉过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、过敏反应属于i型变态反应，是指已免疫的机体在再次接受相同物质的刺激时所发生的反应：过敏原进入机体，刺激b细胞增殖分化为浆细胞，产生特异性ige（specificimmununoglobulin e，sige）抗体。该抗体与肥大细胞和嗜碱性细胞表面结合，机体处于致敏状态。结合后的细胞称为致敏靶细胞，致敏状态可维持数周，长期不接触变应原，致敏状态会逐渐消失。当过敏原再次进入机体，与致敏靶细胞表面两个或两个以上相邻ige抗体结合，使膜细胞fcr发生交联，触发致敏靶细胞细胞脱颗粒，释放及合成组胺等生物活性介质，从而引发机体过敏。
2、牛肉过敏的患病率在全世界范围内从1%~10%不等，最常见的报告在欧洲国家。在特应性皮炎（ad）儿童中，牛肉过敏发生率从3.28%~6.52%不等，普通民众中为0.3%。并且伴随人民生活的日益改善对牛肉的需求也越来越大，对牛肉的过敏在近几年也在普遍上升。
3、目前定量检测人体血清或血浆中的牛肉过敏原特异性ige抗体的体外诊断试剂的国内产品有3家，反应原理均是基于抗原抗体反应的免疫学检测原理，包括：湖南浩欧博生物医药有限公司的牛肉（f27）过敏原特异性ige抗体检测试剂盒（磁微粒化学发光法，湘械注准20212402094）、江苏浩欧博生物医药股份有限公司的牛肉过敏原特异性ige抗体检测试剂盒（酶联免疫捕获法，苏械注准20202401703）和长沙海柯生物科技有限公司的牛肉f027过敏原特异
4、基于酶免手工操作的现有技术，操作繁琐，耗时长，通量小，且人血清中存在非特异性结合igg、iga、igm的干扰，会导致检测结果出现假阳性。
5、基于胶体金的现有技术，同样是手工实验，操作复杂，且受到方法学的限制，胶体金的灵敏度较化学发光相比存在差异。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种牛肉过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及其应用，采用链霉亲和素-生物素体系，对牛肉提取物进行预处理，并对牛肉过敏原提取物进行不同比例的生物素标记，通过制备生物素化-牛肉过敏原提取物溶液的方法，可以降低本底、提升特异性。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了生物素标记的牛肉过敏原溶液，制备方法包括：
4、步骤（a1）：将牛肉过敏原提取物进行柱吸附处理5~60 min，离心，获得的上清液35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃或100℃处理2~12h，透析，获得牛肉过敏原；
5、步骤（a2）：将生物素与所述牛肉过敏原以摩尔比1:(3~30)混合，2~8℃震荡0.5~4h，以截留分子量3.5 kd透析24 h，得到生物素标记的牛肉过敏原溶液。
6、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液所述制备方法中的所述牛肉过敏原提取物的制备方法包括：将牛肉均质化，离心，获得所述牛肉过敏原提取物。
7、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液所述制备方法中的所述牛肉过敏原提取物的制备方法里在离心后还包括对所述牛肉过敏原提取物冻干的步骤；
8、所述冻干包括将固体物质浓度为15%的牛肉过敏原提取物预冷冻、升华干燥、解析干燥，获得冻干粉。
9、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液所述制备方法中的所述柱吸附处理包括以下步骤：
10、（c1）、将层析介质与k2hpo4混匀，离心去上清；
11、（c2）、将所述牛肉过敏原提取物与所述层析介质以质量比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50混合5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min、35 min、40 min、45 min、50 min、55 min或60 min，离心获得纯化的材料。
12、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液所述制备方法中的所述层析介质包括钴离子亲和层析介质珠和/或镍离子亲和层析介质珠。
13、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液还包括ph为7~8的含防腐剂、表面活性剂和蛋白保护剂的磷酸盐缓冲液。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述生物素标记的牛肉过敏原溶液还包括含有抗体的阻断剂，所述抗体包括igg、igm、iga、anti-igg、anti-igm或anti-iga中的一种或多种。
15、本专利技术还提供了上述生物素标记的牛肉过敏原溶液在制备牛肉过敏原检测试剂盒中的应用。
16、本专利技术还提供了检测牛肉过敏原特异性ige的试剂盒，包括上述生物素标记的牛肉过敏原溶液。
17、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述试剂盒还包括包被链霉亲和素的磁微粒和标记辣根过氧化物酶的抗人ige抗体。
18、本专利技术还提供了检测牛肉过敏原特异性ige的方法，其基于上述试剂盒检测。
19、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法包括以下步骤：
20、步骤（d1）：将待测样品、所述包被链霉亲和素的磁微粒、所述生物素标记的牛肉过敏原溶液混合，孵育，去除上清，洗涤；
21、步骤（d2）：再与所述标记辣根过氧化物酶的抗人ige抗体混合，孵育，去除上清，洗涤；
22、步骤（d3）：加入底物，震荡混匀后测定化学发光强度；
23、步骤（d4）：根据标准曲线，计算得到所述待测样品中牛肉过敏原特异性ige的浓度。
24、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述包被链霉亲和素的磁微粒的浓度为0.1~3 mg/ml。
25、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述生物素标记的牛肉过敏原溶液中牛肉过敏原的浓度为0.1~40.0 μg/ml。
26、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述抗体的浓度为10~100 μg/ml。
27、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述底物包括鲁米诺和/或过氧化物。
28、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述孵育的温度为15~40℃。
29、在本专利技术的一些具体实施方案中，上述方法所述孵育的时间为5~40 min。
30、本专利技术的检测试剂盒及其应用有如下效果：
31、针对目前技术的无法准确定量、手工操作繁琐、特异性差的问题进行了优化，选择磁微粒发光平台：利用链霉亲和素制备磁微粒、辣根过氧化物酶标记抗人ige抗体的化学发光免疫分析法，全自动操作，保证检测结果的准确性、测试通量。
32、试剂盒在制备时，通过预本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，制备方法包括：
2.如权利要求1所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，还包括pH为7~8的含防腐剂、表面活性剂和蛋白保护剂的缓冲液。
3.如权利要求1或2所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，还包括含有抗体的阻断剂，所述抗体包括IgG、IgM、IgA、Anti-IgG、Anti-IgM、Anti-IgA中的至少一种。
4.如权利要求1至3任一项所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液在制备牛肉过敏原检测试剂盒中的应用。
5.检测牛肉过敏原特异性IgE的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括包被链霉亲和素的磁微粒和标记辣根过氧化物酶的抗人IgE抗体。
7.非诊断目的的检测牛肉过敏原特异性IgE的方法，其特征在于，基于如权利要求5或6所述的试剂盒检测。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，
10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于，包括：
...【技术特征摘要】
1.生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，制备方法包括：
2.如权利要求1所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，还包括ph为7~8的含防腐剂、表面活性剂和蛋白保护剂的缓冲液。
3.如权利要求1或2所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液，其特征在于，还包括含有抗体的阻断剂，所述抗体包括igg、igm、iga、anti-igg、anti-igm、anti-iga中的至少一种。
4.如权利要求1至3任一项所述的生物素标记的牛肉过敏原溶液在制备牛肉过敏原检测试剂盒中的应用。
5.检测牛...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱宇皇，乔丹木，赵冬红，李忠信，刘功成，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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