【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种外泌体保存液及其制备方法和应用。
技术介绍
1、外泌体是直径范围约为40至160nm(平均约100nm)的细胞外囊泡，可以包含细胞的许多成分，包括dna、rna、脂质、代谢物以及胞质和细胞表面蛋白。外泌体参与物质运输，还携带和传递重要的生物信息，在介导免疫抗原递呈、树突状细胞的活化、神经退行性疾病发生、肿瘤细胞抗原的转移及肿瘤诊断治疗中发挥重要作用。
2、外泌体具有双层脂膜的囊泡结构，其稳定性较好，可保护内部生物分子免受体液中各种酶的影响，从而保持其完整性和生物活性。但提取后的外泌体的完整性和生物活性可能受到保存介质、保存温度和时间等因素的影响。目前，外泌体被提取后一般悬浮于pbs缓冲液，最常用的储存方法为冷冻保存，但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变，也可能导致多层囊泡的形成和聚集，反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。虽然-80℃被公认是各种生物标本最适宜的保存温度，但是冻融过程容易造成囊泡破坏，使外泌体中含有大量“污染物”，而且在处理或运输过程中有时很难维持这种低温条件。4℃保存虽然能够使囊泡保持良好的完整性，但是容易导致外泌体中蛋白和核酸的损失。因此，如何有效保存外泌体，一直以来都是外泌体研究领域的一个难题，开发保存液及保存方法是外泌体研究领域热点之一。
3、如cn111226902a公开一种外泌体保存液及外泌体的保存方法，外泌体保存液，包括牛血清白蛋白、海藻糖、甘油、二甲基亚砜和磷酸盐缓冲液，将所述外泌体保存液置于85℃～95℃
4、综上所述，开发配方简单、易于操作的外泌体保存液，对于外泌体研究领域具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种外泌体保存液及其制备方法和应用，设计全新的外泌体保存液配方，配方简单，能够长期稳定保存外泌体。
2、为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种外泌体保存液，所述外泌体保存液包括吐温、白蛋白和缓冲液。
4、本专利技术中，设计全新的外泌体保存液配方，吐温增加其他有效成分的溶解度，抑制大分子蛋白的自动聚合，提高其稳定性；白蛋白调节细胞内水分动态平衡，维持细胞渗透压相对稳定；缓冲液提供适合液态环境；三种组分协同配合，能在低温下长期保存外泌体，且不影响其活性。
5、优选地，所述吐温包括吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81或吐温85中任意一种或至少两种的组合，优选地，包括吐温20 和吐温40的组合。
6、优选地，所述白蛋白包括人血清白蛋白和/或牛血清白蛋白。
7、优选地，所述缓冲液包括pbs缓冲液和/或醋酸钠缓冲液。
8、优选地，所述外泌体保存液中吐温的浓度为0.001％～0.1％(v/v)，包括但不限于0.002％(v/v)、0.003％(v/v)、0.005％(v/v)、0.006％(v/v)、0.007％(v/v)、0.01％(v/v)、0.05％(v/v)、0.06％(v/v)、0.07％(v/v)、0.08％(v/v)或0.09％(v/v)。
9、优选地，所述外泌体保存液中白蛋白的浓度为0.01％～1％(v/v)，包括但不限于0.02％(v/v)、0.03％(v/v)、0.05％(v/v)、0.06％(v/v)、0.1％(v/v)、0.2％(v/v)、0.5％(v/v)、0.6％(v/v)、0.7％(v/v)、0.8％(v/v)或0.9％(v/v)。
10、优选地，所述外泌体保存液中缓冲液的浓度为1～100mmol/l，包括但不限于2mmol/l、3mmol/l、4mmol/l、5mmol/l、6mmol/l、10mmol/l、15mmol/l、20mmol/l、30mmol/l、50mmol/l、60mmol/l、80mmol/l、90mmol/l、95mmol/l、96mmol/l、97mmol/l、98mmol/l或99mmol/l。
11、优选地，所述外泌体保存液包括0.001％～0.1％(v/v)吐温、0.01％～1％(v/v)白蛋白和1～100mmol/l缓冲液。
12、第二方面，本专利技术提供第一方面所述的外泌体保存液的制备方法，所述制备方法包括：
13、将吐温、白蛋白和缓冲液混合，得到所述外泌体保存液。
14、第三方面，本专利技术提供第一方面所述的外泌体保存液在外泌体保存中的应用。
15、第四方面，本专利技术提供一种外泌体的保存方法，所述方法包括：
16、将外泌体与第一方面所述的外泌体保存液混合。
17、优选地，所述外泌体的保存方法还包括进行冷冻保存的步骤。
18、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
19、本专利技术开发一种配方简单、能够有效维持外泌体活性及数量的外泌体保存液，以吐温、白蛋白和缓冲液三种组分协同配合，可用于外泌体的短期保存、长期冻存以及冻干保存。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液包括吐温、白蛋白和缓冲液。
2.根据权利要求1所述的外泌体保存液，其特征在于，所述吐温包括吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81或吐温85中任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1或2所述的外泌体保存液，其特征在于，所述白蛋白包括人血清白蛋白和/或牛血清白蛋白。
4.根据权利要求1-3任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述缓冲液包括PBS缓冲液和/或醋酸钠缓冲液。
5.根据权利1-4任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液中吐温的浓度为0.001％～0.1％(v/v)。
6.根据权利1-5任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液中白蛋白的浓度为0.01％～1％(v/v)；
7.根据权利1-6任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液包括0.001％～0.1％(v/v)吐温、0.01％～1％(v/v)白蛋白和1～100mmol/L缓冲液。
8.一种权利要求1-7任一项所述
9.权利要求1-7任一项所述的外泌体保存液在外泌体保存中的应用。
10.一种外泌体的保存方法，其特征在于，所述方法包括：将外泌体与权利要求1-7任一项所述的外泌体保存液混合。
...【技术特征摘要】
1.一种外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液包括吐温、白蛋白和缓冲液。
2.根据权利要求1所述的外泌体保存液，其特征在于，所述吐温包括吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81或吐温85中任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1或2所述的外泌体保存液，其特征在于，所述白蛋白包括人血清白蛋白和/或牛血清白蛋白。
4.根据权利要求1-3任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述缓冲液包括pbs缓冲液和/或醋酸钠缓冲液。
5.根据权利1-4任一项所述的外泌体保存液，其特征在于，所述外泌体保存液中吐温的浓度为0.001％～0.1％(v/v)。...
【专利技术属性】
技术研发人员：严涵，曹越，张昊，
申请(专利权)人：南京逸微健华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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