【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，更具体地涉及一种b7-h3嵌合抗原受体修饰的vδ1 t细胞及其应用。
技术介绍
1、目前，基于αβt细胞开发的嵌合抗原受体修饰的car-t细胞疗法针对血液肿瘤的治疗，取得了显著的临床进展，但针对实体肿瘤的临床进展却相对缓慢，这与car-αβt细胞在实体瘤中存在归巢障碍、实体肿瘤微环境对car-αβt细胞的抑制、以及实体瘤高度的抗原异质性等因素密切相关，因此，急需开发一种新的细胞疗法提高对实体肿瘤的临床疗效。
2、基于αβt细胞开发的嵌合抗原受体修饰的t细胞疗法(简称car-t)在治疗b细胞和浆细胞来源的恶性血液肿瘤方面取得了显著的临床疗效，2017年fda批准第一款cd19-car-t产品上市也标志细胞免疫疗法的革命性成功。但car-t治疗实体肿瘤的临床进展却相对缓慢，这与car-t细胞存在实体瘤归巢障碍、肿瘤微环境对car-t细胞的抑制、以及实体瘤高度的抗原异质性等因素密切相关。另外自体car-t细胞产品固有的局限性也限制了其运用，比如制备周期长、费用高、及定制化的过程增加细胞制备风险等。鉴于此，一方面为了克服实体肿瘤的挑战，另一方面为了克服自体car-t产品的局限性，更多的基于固有免疫细胞的同种异体产品正在被探索，比如：γδt细胞、nk细胞、巨噬细胞、nkt细胞等。
3、γδt细胞与其它固有免疫细胞(比如nk细胞)不同，γδt细胞被认为是先天免疫反应和适应性免疫反应之间的桥梁，在肿瘤免疫监视中发挥重要作用。首先与αβt不同，γδt细胞识别肿瘤抗原不依赖于mhc复合物的形成，表示γδ
4、γδt细胞占外周血中淋巴细胞的1％-5％，组成tcr的γ链和δ链种类比较丰富。其中外周血中常见的亚型为vδ1，vδ1是大约占总γδt细胞中80％，是最常见的亚型，而vδ1占总细胞比例非常低。到目前为止，大多数研究都集中在vδ1细胞上，因为vδ1细胞可以被磷酸化抗原(pags)激活，如在肿瘤细胞中积累的异戊烯基焦磷酸盐(ipp)，以及存在于细菌、真菌和原生动物病原体中的(e)-4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸盐(hmbpp)。vδ1细胞不仅在外周血中罕见，而且体外分离和激活更为复杂，难以大规模生产用于临床应用。此外，由于γδt细胞固有的抗病毒特性，慢病毒载体制备car的转导效率很低，已成为car-γδt开发的世界性技术障碍。vδ1 t细胞主要存在于上皮和黏膜组织中，天然高表达趋化因子受体和趋化因子，具有更强的归巢能力，并且其在实体瘤组织中的浸润已被证实与患者良好预后密切相关。vδ1细胞的tcr对抗原的识别高度敏感，可以广谱识别肿瘤因压力信号诱导产生的磷酯类抗原。
5、目前，现有技术中还不存在成熟的基于vδ1 t的car-t疗法，本领域还需要开发新的car-vδ1 t细胞以及相关的治疗方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种b7-h3嵌合抗原受体修饰的vδ1 t细胞及其应用。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体(car)，所述嵌合抗原受体的结构如下式i所示：
3、l-scfv-h-tm-c-cd3ζ-il2(i)
4、其中，
5、l为无或信号肽序列；
6、scfv为靶向b7-h3的scfv；
7、h为铰链区；
8、tm为跨膜结构域；
9、c为共刺激信号分子；
10、cd3ζ为源于cd3ζ的胞浆信号传导序列；
11、il2为无或白介素2(il-2)编码序列；
12、各“-”分别为连接上述元件的连接肽或肽键。
13、在另一优选例中，所述的scfv具有靶向b7-h3的轻链可变区和重链可变区，所述重链可变区具有如下的互补决定区cdr：
14、hcdr1：gftfsty(seq id no.2)，
15、hcdr2：lsggt(seq id no.3)，
16、hcdr3：ryghdhyyamdy(seq id no.4)；且
17、所述轻链可变区具有如下的互补决定区cdr：
18、lcdr1：aasssvsssylh(seq id no.6)
19、lcdr2：stsnlas(seq id no.7)
20、lcdr3：qyhrspwt(seq id no.8)。
21、在另一优选例中，所述的scfv具有如seq id no.1所示的重链可变区和/或如seqid no.2所示的轻链可变区。
22、在另一优选例中，所述抗体重链可变区和抗体轻链可变区通过连接肽相连。
23、在另一优选例中，所述连接肽氨基酸序列序列如(g4s)n所示，其中n为2-6，较佳地3-4。
24、在另一优选例中，所述的scfv氨基酸序列如seq id no.9所示。
25、在另一优选例中，所述的l为选自下组的蛋白的信号肽：cd8、cd28、gm-csf、cd4、cd137、或其组合。
26、在另一优选例中，所述的l为cd8来源的信号肽。
27、在另一优选例中，l的氨基酸序列如seq id no.10所示。
28、在另一优选例中，所述的h为选自下组的蛋白的铰链区：cd8、cd28、cd137、或其组合。
29、在另一优选例中，所述的tm为选自下组的蛋白的跨膜结构域：icos、cd8、cd28、cd3epsilon、cd45、cd4、cd5、cd9、cd16、b7-h3、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、或其组合。
30、在另一优选例中，所述的c为选自下组的蛋白的共刺激信号分子：icos(cd278)、4-1bb(cd137)、dap10、cd28、ox40、cd2、cd7、cd27、cd30、cd40、cd70、cd134、pd1、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、nkg2d、gitr、tlr2、或其组合。
31、在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体具有fc来源的铰链区，其氨基酸序列如seqid no.11所示。
32、在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体具有cd8来源的铰链区和/或跨膜结构域。
33、在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体包括如seq id no.12所示本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式I所示：
2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的嵌合抗原受体具有Fc来源的铰链区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
3.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的嵌合抗原受体具有CD28来源的跨膜结构域和/或共刺激信号分子。
4.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，IL2通过N端的自剪切元件与所述嵌合抗原受体相连。
5.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.19、20、21、22或23所示。
6.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.19或23所示。
7.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的嵌合抗原受体(CAR)。
8.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求7所述的核酸分子。
9.一种工程化的免疫细胞，其特征在于，所述的免疫细胞表达有
10.如权利要求9所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为Vδ1T细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体(car)，其特征在于，所述嵌合抗原受体的结构如下式i所示：
2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的嵌合抗原受体具有fc来源的铰链区，其氨基酸序列如seq id no.11所示。
3.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述的嵌合抗原受体具有cd28来源的跨膜结构域和/或共刺激信号分子。
4.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，il2通过n端的自剪切元件与所述嵌合抗原受体相连。
5.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，游凤涛，姜丽翠，
申请(专利权)人：博生吉医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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