【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体类生物制剂，具体涉及一种无花果胞外类外泌体囊泡制备方法及应用。
技术介绍
1、炎症性肠病（ibd）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，在全球范围内影响着越来越多的人，主要包括溃疡性结肠炎（uc）和克罗恩病（cd）；其中，uc的特征为结肠粘膜弥漫性炎症，病程呈反复缓解期，目前针对uc的治疗方法仅仅具有一定的有效性，但是还存在一定不可接受的不良事件风险，临床上需要更有效的方法来治疗uc，因此，目前迫切需要开发更好的uc治疗药物，特别是能在发炎结肠局部发挥作用，且无全身暴露和相关副作用的药物，对uc结肠炎的治疗具有重要意义。
2、细胞外囊泡（extracellular vesicles, evs）是机体在生理或病理条件下由细胞分泌的单位膜包裹的结构，是各类囊泡的总称，其中，研究较多的是动物细胞分泌的直径30-150nm的外泌体（exosome）；外泌体在其脂质双分子结构内，携带大量的蛋白质、脂质、mrna和sirna等物质，使其在细胞通讯、细胞迁移、癌症疾病发生和发展过程中均发挥重要作用。
3、植物细胞来源的与外泌体类似的茶托样囊泡被命名为植物类外泌体样囊泡（plant exosome-like vesicles, pdelvs），随着研究的深入，pdelvs逐渐引起科学界越来越大的兴趣，多项研究发现，从葡萄、生姜和西兰花等植物中提取的类外泌体纳米囊泡可以改善小鼠肠肠炎作用。
4、无花果（ ficus carica）为药食两用食材，具有丰富的营养价值，其
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提供了一种无花果胞外类外泌体囊泡制备方法及应用，该方法中，采用差速-超速离心法方法对无花果汁液进行处理，得到无花果胞外类外泌体囊泡；该无花果胞外类外泌体囊泡为一种天然产物，能够作为药用原料使用；该药用原料能够在制备治疗炎症性肠炎药物中应用，具有良好的生物相容性。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，采用差速-超速离心法方法制备，其中，差速-超速离心的过程为：
4、将无花果汁液按照2000×g、离心20min，收集上清液a；
5、将上清液a按照3000×g、离心20min，收集上清液b；
6、将上清液b按照10000×g、离心60min，收集上清液c；
7、对上清液c进行过滤，得到滤液；
8、将滤液按照100000-120000×g、超速离心90-120min，收集沉淀，即为无花果胞外类外泌体囊泡。
9、使用过滤除菌的pbs溶液重悬沉淀，得到的无花果胞外类外泌体囊泡重悬液，对重悬液进行保存和鉴定。使用bca法测定无花果pdelvs的总蛋白含量，以蛋白浓度作为pdelvs的浓度进行后续应用。
10、优选的，所述无花果汁液为无花果果实汁液、无花果叶片汁液、无花果茎叶汁液、无花果乳浆中的一种或者多种混合。
11、优选的，无花果果实汁液、无花果叶片汁液和无花果茎叶汁液的制备过程为：
12、（1）清洗：将无花果材料用水进行初步清洗，然后用pbs溶液对其润洗；
13、（2）制汁：将洗净的无花果材料切成15±5mm的小块，加入pbs溶液，充分混匀后于榨汁机破碎，纱网过滤，去除无花果材料残渣，收集即可。
14、优选的，当无花果材料为无花果果实且需要长期贮存时，由于新鲜无花果果实含糖量高不易保存，即使4℃冷藏保存，也容易腐烂变质，因此，采用对新鲜无花果果实低温冷冻保存的方式贮存；该保存方式，不仅延长新鲜无花果果实的保存时间，而且在冻融刺激后使得细胞中的胞外类外泌体囊泡能够更多的释放出来，从而有效提高新鲜无花果果实来源的胞外类外泌体囊泡的产量。
15、优选的，在步骤（1）中，清洗过程在室温条件下进行，新鲜无花果果实为市购青皮和/或紫皮新鲜无花果；pbs溶液对无花果润洗3次。
16、优选的，对新鲜无花果果实清洗干净后，进行-20℃或-80℃冷冻保存，冷冻保存3-90天。
17、优选的，在步骤（2）中，无花果材料与pbs的重量体积（g/ml）比为1:3。
18、优选的，差速-超速离心过程在4±0.5℃的条件下进行。
19、优选的，在差速-超速离心过程中，将上清液c依次经过0.45µm和0.22µm滤膜过滤，得到滤液。
20、一种无花果胞外类外泌体囊泡作为药用原料的应用。
21、优选的，具体为将所述药用原料制备成药物、保健品或者美容产品的应用。
22、优选的，无花果胞外类外泌体囊泡在制备治疗炎症性肠炎药物中的应用。
23、优选的，所述药物的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂、口服液体剂、颗粒剂以及中药药剂中的任意一种或多种。
24、相对于现有技术，本专利技术的有益效果在于：
25、本专利技术中，使用低温冷冻法对无花果果实进行预处理，提高无花果果实胞外类外泌体囊泡的产率，解决无花果果实胞外类外泌体囊泡的产率低的问题；
26、将无花果材料清洗、制汁后得到无花果汁液，对无花果汁液通过差速-超速离心的方法制备得到无花果胞外类外泌体囊泡；该无花果胞外类外泌体囊泡具有良好生物相容性、抗氧化性；使用该无花果胞外类外泌体囊泡制备的药物，能够有效缓解溃疡性结肠炎，有望制备成能够治疗炎症性肠炎的天然药物产品；
27、本专利技术得到的无花果胞外类外泌体囊泡的尺寸为50-150nm；小颗粒的无花果胞外类外泌体囊泡在作为药物原料使用时能够更好的被吸收利用；
28、本专利技术的无花果胞外类外泌体囊泡作为药用原料制备成药物、保健品或者美容产品后进行使用，在形成具体的产品时，可以通过常规手段制备成以上任意的药物、保健品剂型或者美容产品，以满足不同的服用或摄入要求。
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1.一种无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，采用差速-超速离心法方法制备，其中，差速-超速离心的过程为：
2.如权利要求1所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，所述无花果汁液为无花果果实汁液、无花果叶片汁液、无花果茎叶汁液、无花果乳浆中的一种或者多种混合。
3.如权利要求2所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，无花果果实汁液、无花果叶片汁液和无花果茎叶汁液的制备过程为：
4.如权利要求3所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，当无花果材料为无花果果实且需要长期贮存时，采用低温冷冻的方式对新鲜无花果果实贮存。
5.如权利要求4所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，清洗过程在室温条件下进行，新鲜无花果果实为市购青皮和/或紫皮新鲜无花果；PBS溶液对无花果润洗3次。
6.如权利要求1所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，差速-超速离心过程在4±0.5℃的条件下进行。
7.如权利要求1所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，在
8.一种如权利要求1-7任一项所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法得到的无花果胞外类外泌体囊泡作为药用原料的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，具体为将所述药用原料制备成药物、保健品或者美容产品的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，无花果胞外类外泌体囊泡在制备治疗炎症性肠炎药物中的应用；所述药物的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂、口服液体剂、颗粒剂以及中药药剂中的任意一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，采用差速-超速离心法方法制备，其中，差速-超速离心的过程为：
2.如权利要求1所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，所述无花果汁液为无花果果实汁液、无花果叶片汁液、无花果茎叶汁液、无花果乳浆中的一种或者多种混合。
3.如权利要求2所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，无花果果实汁液、无花果叶片汁液和无花果茎叶汁液的制备过程为：
4.如权利要求3所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，当无花果材料为无花果果实且需要长期贮存时，采用低温冷冻的方式对新鲜无花果果实贮存。
5.如权利要求4所述的无花果胞外类外泌体囊泡制备方法，其特征在于，清洗过程在室温条件下进行，新鲜无花果果实为市购青皮和/或紫皮新鲜无花果；p...
【专利技术属性】
技术研发人员：董平轩，王鹏，朱超，付春华，蹇依廷，杨雨，门肖霞，
申请(专利权)人：德州学院，
类型：发明
国别省市：
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