【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药材料，具体涉及一种促骨形成多肽及其应用。
技术介绍
1、目前临床实践中唯一可用的促骨形成药物是甲状旁腺激素衍生肽(pth 1-34，特立帕肽)，循证临床数据表明间歇性服用特立帕肽是治疗骨质疏松症的一种行之有效的方法，然而其对骨折愈合与骨再生的获益仍需更多临床研究予以评估(eben g.e.,cliffordj.r.emerging insights into the comparative effectiveness of anabolictherapies for osteoporosis.nat.rev.endocrinol.17,31-46(2021))。
2、既往的研究表明，经典wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在骨骼稳态、骨发育、骨再生和骨代谢中作用广泛。激活经典wnt通路能够在动物模型中促进骨形成(tristanw.f.等人，development of selective bispecific wnt mimetics for bone loss andrepair.nat.commun.12,3247(2021))。因此，经典的wnt信号通路也是开发骨再生药物的重要靶点，如romosozumab和重组wnt3a(rhwnt3a)等经典wnt激动剂已经用于促骨形成领域。然而，在实际应用与临床转化的过程中发现此类经典wnt激动剂药物的使用可能导致肿瘤发生风险和重大不良反应，其原因是由于对经典wnt/β-catenin信号的过度激活。这些不可忽略的风险限制了相关药物的开
3、因此，本领域存在对于开发在不激活经典wnt信号通路的前提下发挥促成骨作用的新的治疗方案和药物的未满足的需求。
技术实现思路
1、本专利技术人先前的研究表明，wnt7b(wnt family member 7b)的骨合成代谢作用独立于β-catenin存在，无激活经典wnt通路风险(fanyuan y.等人，wnt7b-inducedsox11functions enhance self-renewal and osteogenic commitment of bone marrowmesenchymal stemcells.stem cells.38,1020-1033(2020))。因此，本专利技术拟通过对wnt7b的thumb和index结构域衍生多肽的开发，证明wnt7b来源的多肽可以通过不激活经典wnt信号通路在骨质疏松与极限骨缺损模型中发挥促成骨作用，并在小鼠、猪等多物种中均验证了该衍生多肽的对于骨质疏松的治疗效果和促进骨折修复再生的疗效，此效果与msc的自我更新与成骨分化增强密切相关，由wnt7b衍生多肽激活reck/gpr124/ca2+/nfatc1信号轴介导。因此，本专利技术拟解决目前wnt激活剂在临床应用的弊端并提供全新的促骨形成药物，填补了低风险骨形成药物开发的空白，为新一代骨质疏松与骨折愈合等骨丢失、骨损伤疾病的治疗提供了新策略。
2、分离的多肽或其变体
3、在一个方面，本专利技术提供了一种分离的多肽或其变体，其中，所述多肽由wnt7b蛋白的第200-217位氨基酸和第323-336位氨基酸组成；
4、其中，所述变体与其所源自的多肽相异在于一个或多个(包括但不限于，1个、2个、3个、4个、5个或更多个)氨基酸残基的置换(例如保守置换)、缺失或添加，且保留了其所源自的多肽的生物学功能。
5、在本文中，本专利技术的多肽或其变体的生物学功能包括但不限于，促进骨形成、骨再生、骨修复和/或治疗骨质疏松症。
6、在某些实施方案中，所述wnt7b蛋白为人源。在某些实施方案中，所述wnt7b蛋白具有如seq id no：1所示的氨基酸序列。
7、在某些实施方案中，本专利技术的分离的多肽由wnt7b蛋白的第200-217位氨基酸与第323-336位氨基酸直接连接组成。
8、在某些实施方案中，wnt7b蛋白的第200-217位氨基酸对应于wnt7b的thumb结构域，其序列如seq id no：2所示。
9、在某些实施方案中，wnt7b蛋白的第323-336位氨基酸对应于wnt7b的index结构域，其序列如seq id no：3所示。
10、在某些实施方案中，所述分离的多肽包含如seq id no：4所示的氨基酸序列。
11、在某些实施方案中，所述变体包含如seq id no：5-7所示的氨基酸序列。
12、融合蛋白
13、在另一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，其包含本专利技术的分离的多肽(或其变体)和另外的多肽。
14、在某些实施方案中，所述另外的多肽选自蛋白标签、靶向部分或其任意组合。
15、在本文中，蛋白标签是本领域熟知的，其实例包括但不限于his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp或生物素，并且本领域技术人员已知如何根据期望目的(例如，纯化、检测或示踪)选择合适的蛋白标签。
16、在本文中，术语“靶向部分”是指，能够将本专利技术的多肽(或其变体)引导至所期望的位置的结构域，所述期望的位置可以为特定的组织、特定的细胞、甚至特定的细胞内位置(例如细胞核、核糖体、内质网、溶酶体或过氧化物酶体)。本领域技术人员已知如何通过期望位置的特性设计相应的靶向结构域。在某些实施方案中，所述靶向部分包括配体、受体或抗体或其结合结构域。
17、在某些实施方案中，所述另外的多肽任选地通过接头连接至本专利技术的多肽(或其变体)的n端或c端。在某些实施方案中，所述接头为包含一个或多个(例如，1个，2个，3个，4个或5个)氨基酸(如，gly或ser)的序列。
18、多肽及融合蛋白的制备
19、本专利技术的多肽或其变体或融合蛋白不受其产生方式的限定，例如，其可以通过基因工程方法(重组技术)产生，也可以通过化学合成方法产生，例如可通过在合适的树脂上进行固相合成来制备产生。
20、在另一方面，本专利技术提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本专利技术的多肽或其变体或融合蛋白的核苷酸序列。
21、在另一方面，本专利技术还提供了一种载体，其包含如上所述的分离的核酸分子。本专利技术的载体可以是克隆载体，也可以是表达载体。在某些实施方案中，本专利技术的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体，柯斯质粒等等。
22、在另一方面，本专利技术还提供了包含本专利技术的分离的核酸分子或载体的宿主细胞。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞(例如sf9细胞)，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。
23、在另一方面，本专利技术还提供了制备本专利技术的多肽或其变体或融合蛋白的方法，其包括，在允许所述多肽或其变体或融合蛋白表达的条件下，培养本专利技术的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述多肽或其变体或融合蛋白。
24、药物组合物...
【技术保护点】
1.一种分离的多肽或其变体，其特征在于，所述多肽由WNT7B蛋白的第200-217位氨基酸和第323-336位氨基酸组成，
2.根据权利要求1所述的分离的多肽或其变体，其特征在于，所述WNT7B蛋白具有如SEQID NO：1所示的氨基酸序列，所述分离的多肽包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的分离的多肽或其变体，其特征在于，所述变体包含如SEQ IDNO：5-7所示的氨基酸序列。
4.一种融合蛋白，其特征在于，包含根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体和另外的多肽；
5.一种分离的核酸分子，其特征在于，包含编码根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体或根据权利要求4所述的融合蛋白的核苷酸序列。
6.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求5所述的分离的核酸分子。
7.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求5所述的分离的核酸分子或根据权利要求6所述的载体。
8.一种药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物任选地还包含另外的药学活性剂；
10.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体、根据权利要求4所述的融合蛋白、根据权利要求5所述的分离的核酸分子、根据权利要求6所述的载体、根据权利要求7所述的宿主细胞或根据权利要求8或9所述的药物组合物在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于促进骨形成、骨再生、骨修复和/或预防和/或治疗骨质疏松症。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽或其变体，其特征在于，所述多肽由wnt7b蛋白的第200-217位氨基酸和第323-336位氨基酸组成，
2.根据权利要求1所述的分离的多肽或其变体，其特征在于，所述wnt7b蛋白具有如seqid no：1所示的氨基酸序列，所述分离的多肽包含如seq id no：4所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的分离的多肽或其变体，其特征在于，所述变体包含如seq idno：5-7所示的氨基酸序列。
4.一种融合蛋白，其特征在于，包含根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体和另外的多肽；
5.一种分离的核酸分子，其特征在于，包含编码根据权利要求1-3中任一项所述的分离的多肽或其变体或根据权利要求4所述的融合蛋白的核苷酸序列。
6.一种载体，其特征在于，包含根据权利要求5所述的分离的核酸分子。
【专利技术属性】
技术研发人员：余钒源，李飞飞，喻鹏，韩楚依，王怡天，杨雪，叶玲，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：
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