【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种识别高致病性血清4型禽腺病毒hexon蛋白第188位氨基酸的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、禽腺病毒(fadv)属于腺病毒科禽腺病毒属。根据限制性内切酶酶切图谱和血清交叉中和试验，fadv目前可分为5个种基因型(fadv-a,b,c,d,e)、12个血清型(fadv-1-7,8a,8b,9-11)。近年来，由高致病性血清4型禽腺病毒(fadv-4)感染引起的鸡的肝炎-心包积液综合征(hhs)在鸡群流行暴发，死亡率非常高，给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。fadv-4的基因组大小约为45kb，编码三种主要表面结构蛋白，包括六邻体(hexon)、五邻体(penton)和纤突蛋白(fiber)。
2、目前fadv-4分为高致病性和非致病性毒株，可以致病的fadv-4毒株致鸡死亡率为30％～90％。随着高致病性fadv-4大规模暴发，给家禽业造成了巨大经济损失。然而，目前尚无区分高致病性毒株和非致病性毒株的相关单抗和病原检测方法，现有的方法主要依赖基因测序来区分强弱毒株，费时费力。目前对于fadv-4的单克隆抗体主要以病毒和fiber、penton、hexon原核表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠制备抗体。fadv-4与fadv-10同属于基因c型，两者基因组的同源性很高，因此目前得到的fadv-4的单克隆抗体多为fadv广谱性单抗。现有技术中利用gst-fiber-1作为免疫原制备的两株抗体3b5与6h9可以识别fadv-4与fadv-10，不能特异性识别fadv-
技术实现思路
1、专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种识别高致病性fadv-4病毒hexon蛋白的单克隆抗体2c5及其杂交瘤细胞株，以解决现有技术不能有效识别高致病性以及非致病性fadv-4病毒的问题。本专利技术制备的单克隆抗体2c5特异性反应好，更为重要的是其仅特异性识别高致病性fadv-4，而与非致病性fadv-4和其他血清型的fadv没有交叉反应，可应用于实验室以及临床鉴别高致病性以及非致病性fadv-4。
2、本专利技术还提供所述的单克隆抗体识别的抗原表位及关键氨基酸。
3、技术方案：为了实现上述目的，本专利技术所述一种分泌抗血清4型禽腺病毒hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2c5株，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为cgmcc no.45829，保藏日期为2024年3月21日，分类命名为小鼠杂交瘤细胞，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(cgmcc)，地址：中国北京。
4、本专利技术所述抗血清4型禽腺病毒hexon蛋白单克隆抗体2c5，由所述杂交瘤细胞株2c5分泌得到。
5、其中，利用所述杂交瘤细胞株在小鼠腹腔中进行增殖，对腹水进行分离、纯化，产生所述识别高致病性fadv-4的单克隆抗体2c5。
6、其中，所述单克隆抗体2c5与高致病性fadv-4hexon蛋白抗原特异性结合，而与非致病性fadv-4hexon蛋白抗原不发生抗原抗体反应。
7、其中，所述单克隆抗体2c5的重链亚型为igg1。
8、其中，所述抗原表位位于高致病性血清4型禽腺病毒sd2015毒株hexon蛋白第185～190位氨基酸，该抗原表位的氨基酸序列为gpgrnp。
9、本专利技术所述的单克隆抗体2c5所识别的抗原表位关键氨基酸位点，所述抗原表位关键氨基酸位点为高致病性fadv-4hexon蛋白第188位氨基酸r(hexon r188)，即所述抗原表位的氨基酸序列为hexon 185-gpgrnp-190。
10、其中，所述hexon蛋白第188位氨基酸r为高致病性血清4型禽腺病毒特征氨基酸，即所述单克隆抗体2c5所识别抗原表位中的关键氨基酸为hexon蛋白中r188氨基酸。
11、本专利技术所述的单克隆抗体2c5在制备检测和识别高致病性血清4型禽腺病毒产品中的应用。
12、进一步地，所述产品包括诊断或检测高致病性fadv-4的试剂盒。
13、其中，所述高致病性血清4型禽腺病毒的分离毒株，包括如sd2015，ahfy15，jh13，jscz15。
14、优选的，所述产品基于以下一种或多种检测技术：western blot技术以及ifa技术。
15、本专利技术所述用于检测和识别高致病性血清4型禽腺病毒的试剂盒，所述试剂盒包括所述的单克隆抗体2c5以及试剂盒组成的辅助材料。
16、本专利技术在对hexon蛋白b细胞优势表位预测的基础上，对其进行了截短蛋白的表达，表达产物免疫小鼠，利用单克隆抗体杂交瘤技术，筛选出了一株能分泌针对fadv-4的hexon蛋白的单抗杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株2c5株。特性检测发现，该杂交瘤细胞株分泌的单抗2c5仅与高致病性fadv-4毒株反应，而与其他血清型禽腺病毒以及非致病性fadv-4毒株均不反应。表位鉴定进一步发现，单抗2c5识别表位位于185gpgrnp190，且发现hexon蛋白中第188位氨基酸r(r188aa)为单抗2c5识别的关键氨基酸。本专利技术中仅与高致病性fadv-4反应的单抗2c5的研制为建立可区分高致病性和非致病fadv-4的鉴别诊断技术，开展国内流行的高致病性fadv-4分子流行病学以及致病机制研究提供了分子靶标与生物材料。
17、本专利技术提供了一种识别高致病性血清4型禽腺病毒(fadv-4)六邻体(hexon)蛋白单克隆抗体2c5，经鉴定重链亚型为igg1，其识别的抗原表位的氨基酸序列为hexon蛋白185-gpgrnp-190，其中hexon蛋白中r188氨基酸是其识别的关键氨基酸。
18、hexon蛋白具有重要的属、种以及血清型特异性抗原表位，但由于hexon蛋白在原核表达系统中，多以包涵体的形式出现，不易纯化，抗原性差，阻碍了对于hexon单克隆抗体的研究。此外，由于fadv-4和fadv-10高度的同源性，目前尚无fadv-4hexon型特异性抗体和型特异性抗原表位的相关报道。以往的检测方法和单克隆抗体不能特异性识别fadv-4，更无区分高致病性和非致病性的检测方法及抗体。为了获得fadv-4型特异抗体，更精准的防控由fadv-4感染而引发的肝炎-心包积水综合征，本本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分泌抗血清4型禽腺病毒Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.45829，保藏日期为2024年3月21日。
2.一种抗血清4型禽腺病毒Hexon蛋白单克隆抗体2C5，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株2C5分泌得到。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体2C5，其特征在于，所述单克隆抗体2C5与高致病性FAdV-4Hexon蛋白抗原特异性结合，而与非致病性FAdV-4Hexon蛋白抗原不发生抗原抗体反应。
4.根据权利要求2所述的单克隆抗体2C5，其特征在于，所述单克隆抗体2C5的重链亚型为IgG1。
5.一种权利要求2所述的单克隆抗体2C5所识别的抗原表位，其特征在于，所述抗原表位位于高致病性血清4型禽腺病毒SD2015毒株Hexon蛋白第185～190位氨基酸，该抗原表位的氨基酸序列为GPGRNP。
6.一种权利要求2所述的单克隆抗体2C5所识别的抗原表位关键氨基酸位点，其特征在于，所述抗原表位关键氨基酸位点为高致病性FAdV-4Hexon
7.根据权利要求6所述的单克隆抗体2C5所识别的抗原表位关键氨基酸位点，其特征在于，所述Hexon蛋白第188位氨基酸R为高致病性血清4型禽腺病毒特征氨基酸。
8.一种权利要求2所述的单克隆抗体2C5在制备检测和识别高致病性血清4型禽腺病毒产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述高致病性血清4型禽腺病毒的分离毒株优选包括SD2015，AHFY15，JH13，JSCZ15。
10.一种用于检测和识别高致病性血清4型禽腺病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的单克隆抗体2C5以及试剂盒组成的辅助材料。
...【技术特征摘要】
1.一种分泌抗血清4型禽腺病毒hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2c5株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏编号为cgmcc no.45829，保藏日期为2024年3月21日。
2.一种抗血清4型禽腺病毒hexon蛋白单克隆抗体2c5，其特征在于，由权利要求1所述杂交瘤细胞株2c5分泌得到。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体2c5，其特征在于，所述单克隆抗体2c5与高致病性fadv-4hexon蛋白抗原特异性结合，而与非致病性fadv-4hexon蛋白抗原不发生抗原抗体反应。
4.根据权利要求2所述的单克隆抗体2c5，其特征在于，所述单克隆抗体2c5的重链亚型为igg1。
5.一种权利要求2所述的单克隆抗体2c5所识别的抗原表位，其特征在于，所述抗原表位位于高致病性血清4型禽腺病毒sd2015毒株hexon蛋白第185～190位氨基酸，该抗原表位的氨基...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤也，叶建强，谢泉，侯添馨，殷秋怡，梅义贤，王伟康，谢柏，刘时，马也，邵红霞，万志敏，李拓凡，秦爱建，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。