【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组培体细胞再生，具体涉及一种诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法。
技术介绍
1、胡黄连为中医临床常用的清虚热药，《中华人民共和国药典》2020年版规定其药材来源为玄参科植物胡黄连 picrorhiza scrophulariiflora pennell的干燥根茎。胡黄连味苦，性寒，入肝、胃、大肠经，具有退虚热、除疳热、清湿热的功效。现代药理研究表明，胡黄连具有保肝、抗炎、抗氧化应激及调节免疫等药理作用，临床常用于治疗肝炎、脂肪肝、肝硬化等肝脏疾病。目前，胡黄连已被分离鉴定出90多个成分，主要为环烯醚萜类、苯乙醇糖苷类、葫芦素类、酚苷类及芳香酸类。
2、我国胡黄连野生资源濒临灭绝，已被国家列为二级珍稀保护植物。当前胡黄连种苗在栽培中最大的问题是组培苗野外栽培成苗率较低，很难生根，且根茎生长缓慢，加之农药的使用、病虫害的侵袭、天气的变化以及种植地的不同，导致胡黄连的产量偏低，经济效益较低，农户种植积极性不高，栽培示范推广难度大。目前有关胡黄连植物组培技术研究较少，2007年薛润光等人对胡黄连的组织培养和植株再生进行了研究，采用带芽点的组织材料诱导芽生长的方式，但其增殖效率不高。2017年张高翔等人对胡黄连的茎段芽诱导和生根进行了初步研究，但其诱导不定芽的分化数量有限。因此，针对胡黄连体细胞胚诱导再生体系进行研究十分有必要。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种诱导胡
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
3、一种诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，包括以下步骤：
4、（1）种子消毒与萌发：取胡黄连种子，在超净工作台内，使用3%次氯酸钠消毒，然后用无菌水洗净，再用75%酒精消毒，无菌水洗净，循环2次，最后吸干种子表面的水分，播种于ms+30g/l糖+6g/l琼脂的培养基，ph 5.8，于22℃、16h光照+8h黑暗、光强2000-2500lx的条件下培养，至萌发生长成种子苗。
5、（2）胚性愈伤的诱导：在超净工作台内取出生长10d的胡黄连无菌种子苗，将下胚轴和茎段分别切至0.5±0.1cm，接种于ms+30g/l糖+6g/l琼脂+0.5mg/l 6-ba+1.0mg/lnaa、ph 5.8的胚性愈伤培养基中，于22℃、黑暗条件下，培养至获得胚性愈伤组织。
6、（3）芽诱导：将胚性愈伤组织接种到ms+30g/l糖+6g/l琼脂+0.5mg/l 6-ba、ph 5.8的培养基中，置于22℃、16h光照、光照强度2000-2500lx条件下培养，至出现不定芽。将不定芽转移到1/2ms+30g/l糖+6g/l琼脂+0.5mg/l 6-ba、ph 5.8的培养基培养，置于22℃、16h光照、光照强度2000-2500lx条件下培养20-60d，得到胡黄连体胚苗。
7、（4）生根培养：把胡黄连体胚苗转移到1/2ms+30g/l糖+6g/l琼脂+0.2mg/l 6-ba、ph 5.8的生根培养基，于22℃、16h光照、光照强度2000-2500lx的条件下培养，6-10d生根即可。
8、与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果：
9、1、本专利技术首次对分布在云南省西北部的珍稀濒危药用植物胡黄连，利用体细胞胚建立一个成熟完善的胡黄连体细胞胚离体再生技术，不仅可以解决目前组培技术上的增殖效率低的问题，还可以实现大量繁育优质种苗，更有利于为胡黄连优良种质资源的保存、繁殖以及遗传改良及增加次生代谢产物的产量等方面的研究奠定基础。
10、2、现有技术对胡黄连的组织培养采用的是“芽生芽”的方法，该方法比较传统，一个芽点只能生成一颗植物，繁殖效率低，本专利技术通过对体细胞胚进行诱导再生，使一个组织能产生多个芽，进而生成多株植物，从而大大提高了成株效率。
11、3、本专利技术所述的方法简化了植物再生过程，为制备组织培养材料节省了大量时间。并且体细胞克隆变异频率低，因此体细胞胚胎发生比器官发生更适合进行市场应用。此外，成熟的体细胞胚可以储存在液氮中，活化后仍能生长成健康的植物，并且在遗传和表观遗传水平上仍保持胚胎发生的特性，保证了材料的可持续性。
12、4、本专利技术所述的方法具有高效的分化效率，使得胚性细胞团中的胚性细胞得到充分发育，进而提高了体细胞胚再生效率和出芽效率，为生产应用提供了基础。
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1.一种诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）至步骤（4）中培养温度为22℃。
3.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）、步骤（3）、步骤（4）中光照培养的光周期为16h。
4.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）、步骤（3）、步骤（4）中光照强度为2000-2500Lx。
5.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）中所述消毒步骤为：先用3%次氯酸钠消毒5min，无菌水洗净，再用75%酒精消毒1min，无菌水洗净，循环2次，最后吸干种子表面的水分。
6.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（2）中取胡黄连无菌种子苗，将下胚轴和茎段分别切为0.5±0.1cm。
【技术特征摘要】
1.一种诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）至步骤（4）中培养温度为22℃。
3.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1）、步骤（3）、步骤（4）中光照培养的光周期为16h。
4.根据权利要求1所述的诱导胡黄连体细胞胚高效再生体系建立的方法，其特征在于，步骤（1...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁慧娟，杨少华，陈翠，戚淑威，康平德，徐天才，程远辉，杨文宏，孙恒，刘艳，
申请(专利权)人：云南省农业科学院高山经济植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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