【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物酶，具体为一种用于核酸酶活性测定的荧光探针及其检测试剂和应用。
技术介绍
1、核酸酶是一种普遍存在于环境和生物材料中的酶，能够降解dna和rna，对许多实验都会造成干扰。在生物工程、疫苗生产、制药和食品加工等领域，核酸酶残留会对产品质量产生重要影响。核酸酶可以降解所有形式的dna和rna，且不具有碱基识别特异性。因此，核酸酶常用于重组蛋白药物、疫苗样品、细胞和基因治疗病毒样品中的核酸去除，降低核酸残留毒性风险，提高产品安全性；另外，在蛋白分析样品制备、改善重组蛋白纯化工艺、提高蛋白产量、细胞冻存等方面也可通过使用核酸酶处理核酸来达到理想实验效果。
2、通过核酸酶处理生物制品的过程中，可能会引入微量核酸酶残留，会对后续生物制品的应用和安全性造成一定的影响。因此，在生物制品的安全性监管中，核酸酶的残留量是衡量生物制品质量的重要指标之一。
技术实现思路
1、本专利技术的技术方案如下：
2、一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，所述荧光探针的序列为seq id no.1、seqid no.2、seq id n.3、seq id no.4、seq id no.5、seq id no.6或seq id no.7的任意一种所示；
3、所述荧光探针的荧光基团为vic、fam或hex的任意一种，所述荧光探针的淬灭基团为dabcyl、tamra或bhq1的任意一种。
4、优选的，所述荧光探针的序列为seq id no.6所示，所述荧光探针的
5、优选的，所述荧光探针的底物浓度为2μm、4μm、6μm或8μm的任意一种。
6、优选的，所述荧光探针反应的buffer体系包括：100～400mm tris ph8.0，500～700mm kcl，20～40mm mgcl2。
7、优选的，所述荧光探针反应的buffer体系包括100～400mm tris ph8.0，500～700mm kcl，20～40mm mgcl2以及0.8％甘油。
8、优选的，所述荧光探针反应的buffer体系包括100～400mm tris ph8.0，500～700mm kcl，20～40mm mgcl2、0.8％甘油以及200mg/l核糖。
9、优选的，所述荧光探针反应的buffer体系包括100mm tris ph8.0，500mm kcl，20mm mgcl2、0.8％甘油以及200mg/l核糖。
10、优选的，所述荧光探针检测待测样品所使用全能核酸酶标准品的氨基酸序列如seq id no.9所示。
11、优选的，所述荧光探针检测待测样品所使用的全能核酸酶标准品按如下方法稀释至10u/ml；
12、273ku/ml稀释至1000u/ml，再稀释至20u/ml，再稀释至10u/ml，具体包括：
13、 前一浓度样本体积(μl) 稀释液体积(μl) 终浓度(u/ml) 10(起始：273ku/ml) 2720 1000 20 980 20 500 500 10
14、或者
15、 前一浓度样本体积(μl) 稀释液体积(μl) 终浓度(u/ml) 10(起始：273ku/ml) 2720 1000 50 2450 20 500 500 10
16、中的任意一种。
17、包括前述任意所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针的应用，用于通过核酸酶处理生物制品的过程中，核酸酶残留的检测。
18、与现有技术相比，本专利技术所达到的有益效果是：
19、本专利技术专业设计一种修饰的dna寡核苷酸荧光探针，其一端具有荧光基团(f)，一端具有淬灭基团(q)，同时通过体系的设计和优化，可实现核酸酶的快速检测。当两个基团距离较近时，会导致荧光分子自身的荧光强度衰减。当底物被核酸酶切割时，底物的首尾两端分离，荧光基团和淬灭基团分开，vic荧光基团会发出荧光。因为荧光增加的速度和核酸酶的活性成正比，这样通过荧光检测可以实时或动态检测核酸酶活性。可用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的核酸酶活性含量，灵敏度高、重复性好、检测快速。
20、1、优选荧光探针可作为全能核酸酶的活性测定底物，在一定浓度范围内呈现很好的线性，r2≥0.98；2、优选荧光探针及其检测试剂优化可提高实现全能核酸酶的高灵敏度检出，检测限可达0.1u/ml；3、优选荧光探针及其检测体系可实现对实际样本的快速、有效检测。
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1.一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的序列为SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID N.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7的任意一种所示；
2.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的序列为SEQ ID NO.6所示，所述荧光探针的荧光基团为HEX，所述荧光探针的淬灭基团为BHQ1。
3.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的底物浓度为2μM、4μM、6μM或8μM的任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的Buffer体系包括：100～400mM Tris pH8.0，500～700mM KCl，20～40mM MgCl2。
5.根据权利要求4所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的Buffer体系包括100～400mM Tris pH8.0，500～70
6.根据权利要求5所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的Buffer体系包括100～400mM Tris pH8.0，500～700mM KCl，20～40mM MgCl2、0.8％甘油以及200mg/L核糖。
7.根据权利要求6所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的Buffer体系包括100mM Tris pH8.0，500mM KCl，20mM MgCl2、0.8％甘油以及200mg/L核糖。
8.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针检测待测样品所使用全能核酸酶标准品的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
9.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针检测待测样品所使用的全能核酸酶标准品按如下方法稀释至10U/mL；
10.包括如权利要求1～9任意所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针的应用，其特征在于，用于通过核酸酶处理生物制品的过程中，核酸酶残留的检测。
...【技术特征摘要】
1.一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的序列为seq idno.1、seq id no.2、seq id n.3、seq id no.4、seq id no.5、seq id no.6或seq id no.7的任意一种所示；
2.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的序列为seq id no.6所示，所述荧光探针的荧光基团为hex，所述荧光探针的淬灭基团为bhq1。
3.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的底物浓度为2μm、4μm、6μm或8μm的任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的buffer体系包括：100～400mm tris ph8.0，500～700mm kcl，20～40mm mgcl2。
5.根据权利要求4所述的一种用于核酸酶活性测定的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针反应的buffer体系包括100～400mm tris ph8.0，500～700mm kcl，20～4...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯兵兵，周钰瑶，徐轸，
申请(专利权)人：上海雅心生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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