利用亲和柱分析全蛋白的方法技术

一种蛋白质组技术领域的利用亲和柱分析全蛋白的方法，包括如下步骤：合成亲和分离材料，得到亲和分离材料库；提取生物样品全蛋白，从步骤一所得的亲和分离材料库中筛选出吸附蛋白种类占全蛋白２０～８０％的亲和材料组合；从步骤二所得亲和材料组合中选择一种或多种分别填充亲和柱，之后利用所得亲和柱，采用级联组合分析方法、串联组合分析方法、或者级联与串联混合的组合分析方法分析生物样品全蛋白，得到多组蛋白复杂度简化的样品；对步骤三所得样品分别进行胰蛋白酶消化和ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析，进而完成生物样品全蛋白的全蛋白分析。本发明专利技术的方法可克服高丰度蛋白淹没低丰度蛋白信号的技术不足，提高极端性质蛋白检出率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蛋白质组
的方法，具体是一种利用亲和柱分析全蛋白的方法。
技术介绍
蛋白质是生物体内行使生物功能的分子载体。生物样品中全蛋白的分析鉴定对 阐明生物功能、生理状态和疾病的发生发展和治疗具有重要作用。生物样品常含有数千种 蛋白，一般情况下，不超过二十种的高丰度蛋白占蛋白总量的99%，而数千种低丰度蛋白 占蛋白总量不到1%，高丰度蛋白与低丰度蛋白的丰度范围高达9个数量级。基于鸟枪法 (shot-g皿strategy)的生物质谱可简捷快速鉴定生物样品中多种蛋白。但由于质谱仪器本 身检测能力、检测灵敏度和检测蛋白丰度范围的限制，样品中高丰度蛋白易于掩盖低丰度 蛋白的检测信号，低丰度蛋白漏检率高。现有技术手段无法简单快捷地分析鉴定生物样品 中全蛋白，尤其是漏检低丰度蛋白。 经对现有技术的文献检索发现，在质谱鉴定之前进行预分离可以改善样品中低 丰度蛋白的检出几率，常用传统多维液相色谱、多维电泳预分离方法以及剔出高丰度蛋 白的予页处理方法(Gao等，Large scale depletion of the high-abundance proteins and analysisof middle—and low—abundance proteins in human liver proteome bymultidimensional liquid chromatography. Proteomics 8(2008) :939 947.)与质谱联用改善了低丰度蛋白的检出几率。但在实际操作中，大规模剔除高丰度蛋白，传统多维液 相色谱和常用多维电泳预分离方法操作复杂，耗时费力，工作量大，不利于疏水蛋白、极大 和极小分子量蛋白、极高等电点和极低等电点蛋白以及膜蛋白的分析。而且大规模剔除高 丰度蛋白的操作需要首先分析鉴定高丰度蛋白，再制备相应蛋白抗体，操作时间长，工作量 大，操作繁琐。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种利用亲和柱分析全蛋白的方 法。本专利技术的方法可克服高丰度蛋白淹没低丰度蛋白信号的技术不足，提高极端性质蛋白 检出率。 本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术包括如下步骤 步骤一，合成亲和分离材料，得到亲和分离材料库； 步骤二，提取生物样品全蛋白，从步骤一所得的亲和分离材料库中筛选出吸附蛋 白种类占全蛋白20 80%的亲和材料组合； 步骤三，从步骤二所得亲和材料组合中选择一种或多种分别填充亲和柱，之后利 用所得亲和柱，采用级联组合分析方法、串联组合分析方法、或者级联与串联混合的组合分 析方法分析生物样品全蛋白，得到多组蛋白复杂度简化的样品； 步骤四，对步骤三所得样品分别进行胰蛋白酶消化和LC-MS/MS分析，进而完成生物样品全蛋白的全蛋白分析。 步骤一中，所述亲和分离材料库具体为以如下组合中的氨基化合物为 配体，采用以环氧氯丙烷为骨架的单氨基化合物配体合成法合成相应的亲和分离 材料；以如下组合中的氨基化合物为配体，采用以三氯三氮嗪为骨架的双氨基化 合物配体合成法合成相应的亲和分离材料；所有合成的亲和分离材料构成亲和分 离材料库；所述氨基化合物的组合为3-amino-l-propanol、2-phenethylamine、 acrylamide、3， 5—dinitroaniline、3—methoxypropylamine、2_methy1—5—nitroaniline、 ethanolamine、2， 4一dichloroaniline、 ethylenediamine、2—aminobenzothiazole、 4_methyl_3_nitroaniline、3_methyl_o_phenylenediamine、 octylamine、2，5- dichloroaniline、 propylamine、4， 4' -thiodiani 1 ine、 1， 4-phenylenediamine、 4，4-diaminodiphenylmethane、 o-toluidine、4，4' -oxydianiline、 p-toluidine、2，6- dimethylaniline、2， 4， 6-trichloroaniline、4， 4-methylene-bis (2-chloroani1i ne) 、 m-toluidine、4-aminobipheny1、2， 3-dichloroaniline、4-aminobenzoic acid、 methyl 2-aminobenzoate、4， 4' _methylene_bis(2-methylani1ine)、 m-anisidine、 4—aminoazobenzene、 o-anisidine、 aniline、2，4_diamino_6_methylphenol、4_amino_2， 6—dinitrotoluene、l—naphthylamine、 isopropylamine、2，4—diaminotoluene、 benzidine、3' _aminoacetophenone、4_methyl_m_phenylenediamine、2， 4一dimethylaniline、4一isopropylaniline、2， 4一dinitroani1ine、 benzylamine、 4' -aminoacetophenone、4-methyl_o_phenylenediamine、2，6-dichloroaniline、 p_anisidine、2， 6-diethylaniline、 o_aminoazotoluene、4_amino_2_nitrophenol、 l_amino_2_naphthol_4_sulfonic acid、2， 6-dinitroaniline、2， 4一diaminoanisole、 2—aminophenol、 o-dianisidine、2_amino_3_nitrophenol、2—aminobenzimidazole、 2_aminopyridine、6_amino caproic acid、2—naphthylamine、2—furfurylamine、 2_methoxy_5_methylaniline、5_aminoisophthalic acid、2—nitroaniline、 4—phthalazinedione、3—aminopyridine、 cyclohexylamine、2_methy1—3—nitroaniline、 1—aminoanthraquinone、3_aminophenol、4—aminosalicy1ic acid、4_aminophenol、 arginine、2_methyl_4_nitroaniline、2_aminoterephthaiic acid、3_nitroaniline、 9-aminoacridine、4-nitroaniline、 tryptamine、2_methyl_6_nitroani1ine禾卩3， 3' -dichlorobenzidine。 步骤三中，所述亲和分离材料组合具体为分别以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用亲和柱分析全蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：　　　　步骤一，合成亲和分离材料，得到亲和分离材料库；　　　　步骤二，提取生物样品全蛋白，从步骤一所得的亲和分离材料库中筛选出吸附蛋白种类占全蛋白２０～８０％的亲和材料组合；步骤三，从步骤二所得亲和材料组合中选择一种或多种分别填充亲和柱，之后利用所得亲和柱，采用级联组合分析方法、串联组合分析方法、或者级联与串联混合的组合分析方法分析生物样品全蛋白，得到多组蛋白复杂度简化的样品；　　　　步骤四，对步骤三所得样品分别进行胰蛋白酶消化和ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析，进而完成生物样品全蛋白的全蛋白分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣秀，谭青乔，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[]