【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及非经典人类主要组织相容性复合体(mhc)分子(也称为mhc ib类分子)与肽抗原组合用于治疗视神经脊髓炎(nmo)的治疗用途。本专利技术更具体地涉及包含肽抗原和非经典mhc ib类分子的一个或多个结构域的重组多肽。本专利技术还涉及生产此类重组多肽的方法、包含此类重组多肽的药物组合物以及它们用于治疗视神经脊髓炎(nmo)的用途。
技术介绍
0、背景
1、视神经脊髓炎(nmo)是一种中枢神经系统(cns)脱髓鞘自身免疫性疾病，发病率介于0.05至0.4/100,000之间。其特征是症状与多发性硬化症(ms)相似。然而，多发性硬化症通常以复发缓解型病程为特征，而nmo患者很少出现缓解。此外，一些对ms患者有益的治疗方法对nmo无效，甚至可能加重病情。因此，nmo比ms更难治疗，并且通常进展更快。目前nmo的治疗策略侧重于复发预防或急性疾病复发的治疗。急性复发通常采用免疫抑制疗法治疗，例如糖皮质激素或血浆置换以去除自身反应性抗体。最近，抑制补体系统(eculizumab)或阻断炎性细胞因子(satralizumab)的治疗性抗体也已获批准。
2、然而，不仅自身反应性免疫功能受到抑制，保护性免疫功能也受到抑制。这些功能对于保护患者免受病毒、细菌或肿瘤的侵害至关重要。因此，通常只能针对部分抑制。由于自身免疫性疾病通常在反复发作后恶化，因此需要付出大量努力来防止复发。然而，这种自身免疫性疾病的总体缓慢进展只能减缓而不能阻止。为了避免这种困境，一段时间以来，人们一直在尝试诱导针对自身反应性免疫细
3、到目前为止，至少在早期临床研究中，已经对两种策略进行了评估。与过敏中的脱敏策略类似，已经通过不同的途径施用大量抗原以诱导抗原特异性耐受性。然而，在自身免疫性疾病中，这些策略已引起严重的副作用，并且在临床上并未取得成功。通过抗原特异性调节性t细胞或抗原负载的耐受性树突状细胞的过继转移来诱导耐受性的尝试似乎更有前景。然而，这些策略极其复杂且昂贵，需要为每个患者提供符合gmp的生产和质量控制流程。因此，即使小规模的临床试验取得了成功，在可预见的未来，许多患者是否可以接受过继转移疗法，仍是一个很大的疑问。
4、wo2018/215340涉及mhc ib类分子与肽的组合，用于靶向性治疗性的免疫调节。
5、总之，仍然需要治疗视神经脊髓炎(nmo)的改良药物。
技术实现思路
1、本专利技术人发现，人类mhc ib类分子，例如hla-g，具有诱导针对所呈递肽抗原的抗原特异性耐受性的能力。因此，尽管mhc ib类分子的结构和序列与诱导抗原肽特异性免疫反应的经典人类mhc ia类分子相似，但根据本专利技术，mhc ib类分子可以有利地用于以抗原特异性方式抑制免疫反应。此外，本专利技术人发现，除天然存在的mhc ib类分子之外的分子，特别是仅包含mhc ib类分子的至少一个结构域、优选包含mhc ib类分子的至少α3结构域的多肽，可用于如本专利技术所述的抑制免疫反应：各种ia类分子的α1和α2结构域可以与人类mhcib类分子的[α]3结构域组合，以抑制针对这些抗原所呈递的肽的免疫反应。
2、负载有抗原的hla-g分子可能不稳定。因此，专利技术人设计了可溶性重组多肽，其包含肽抗原、mhc ib类分子(例如hla-g)和β2-微球蛋白(b2m)，并将这三个成分共价连接(例如，通过共价接头)。或者，用其他mhc分子的相应结构域对mhc ib类分子(例如hla-g)的抗原结合α1和α2结构域进行更换，以增强这些重组多肽的灵活性和多功能性(例如，参见图2)。这些替代的重组多肽可以与其他人类hla 分子的抗原结合结构域设计在一起。先前发现，包含小鼠h2-kb的α1和α2结构域的构建体可以将卵清蛋白衍生的肽siinfekl呈递给ot-1t细胞。(ot-1t细胞表达特异性识别该抗原的转基因t细胞受体)(wo2018/215340)。
3、令人惊讶的是，专利技术人发现，通过使用本专利技术的重组多肽，可以抑制针对神经炎症自身抗原的免疫反应，并且可以诱导能够诱导针对人水通道蛋白4(aqp4)的耐受性的细胞。此外，利用已建立的神经炎症模型，专利技术人已证明这些多肽的替代分子(适用于小鼠)可用于治疗神经炎症疾病。因此，根据本专利技术，可以通过本专利技术的重组多肽治疗视神经脊髓炎(nmo)。
4、专利技术人的实验数据表明，需要合适的肽抗原和mhc ib类分子(例如hla-g)的α3结构域才能达到预期效果。因此，这种方法超越了之前描述的策略，这些策略要么在没有共刺激的情况下使用抗原肽(导致无反应性t细胞而非耐受性t细胞)，要么在抗原非特异性环境中使用mhc ib类分子。
5、此外，根据本专利技术，本专利技术的重组多肽不仅调节t细胞反应，而且还防止水通道蛋白4(aqp4)特异性自身抗体的形成。预计这一优势将转化为对患有视神经脊髓炎(nmo)的人类患者的临床改善，因为水通道蛋白4(aqp4)特异性自身抗体与视神经脊髓炎(nmo)的病理有关。
6、因此，本专利技术涉及以下的优选实施方案：
7、一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按n端至c端顺序包含：
8、i)被所述重组多肽呈递的肽抗原，其中所述肽抗原为人水通道蛋白4的肽；
9、ii)可选地，接头序列；
10、iii)可选地，人多肽结构域序列，所述人多肽结构域序列包含人β2微球蛋白序列，或与seq id no:5所示的人β2微球蛋白氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列；
11、iv)可选地，接头序列；
12、v)可选地，mhc分子的α1结构域；
13、vi)可选地，mhc分子的α2结构域；
14、vii)mhc ib类分子的α3结构域或mhc ib类分子的α3结构域的衍生物，所述衍生物能够结合ilt2或ilt4；
15、viii)可选地，蛋白酶酶切位点；
16、ix)可选地，间隔序列；和
17、x)可选地，亲和标签。
18、1.根据第1项所述的重组多肽，其中根据i)所述的肽抗原的长度为7至11个氨基酸，优选长度为8至10个氨基酸。
19、2.根据第1或2项所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由seq id no:2、22、23和24的氨基酸序列组成。
20、3.根据上述任一项所述的重组多肽，其中所述肽抗原由seq id no:2或seq idno:22的氨基酸序列组成。
21、4.根据第1-4中任一项所述的重组多肽，其中所述肽抗原由seq id no:2的氨基酸序列组成。
22、5.根据第1-3中任一项所述的重组多肽，其中所述肽抗原由seq id no:23或seqid no:24的氨基酸序列组成。
23、6.根据上述任一项所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按N端至C端顺序包含：
2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原的长度为7至11个氨基酸，优选8-10个氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由SEQ ID NO:2、22、23和24的氨基酸序列组成。
4.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类MHC Ia类分子，优选人类HLA-A2分子，或来自人类MHC Ib类分子，优选人类HLA-G分子。
5.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的MHC Ib类分子的α3结构域是人类HLA-E、人类HLA-F或人类HLA-G的α3结构域，优选人类HLA-G。
6.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:21的α3结构域相同或与具有氨基酸序列SEQID NO:9或
7.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(ii)的接头序列和/或根据(iv)的接头序列包含氨基酸序列(GGGGS)n，其中n是等于或大于1的整数，并且其中n是选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组中的整数，并且优选选自由2、3、4和5组成的组中。
8.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(iii)的人多肽结构域的所述序列与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少95％相同，优选与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少98％相同，更优选与SEQ ID NO:5的氨基酸序列相同。
9.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽是二聚体或多聚体。
10.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽包含或由所有的组分i)至vii)组成，其中所述多肽不包含组分viii)至x)，或者，其中所述多肽包含或由所有的组分i)至x)组成。
11.根据上述权利要求中任一项所述重组多肽，其还包含N端分泌信号肽序列。
12.根据上述权利要求1-10中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽由如下氨基酸序列组成，所述氨基酸序列以N端至C端顺序由下述((a)和(b))组成：
13.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述重组多肽是可溶的。
14.一种核酸，其编码一种或多种根据上述权利要求中任一项所述的多肽，其中所述核酸优选为载体。
15.一种药物组合物或试剂盒，包含至少一种根据权利要求14所述的核酸。
16.一种药物组合物或试剂盒，包含至少一种根据权利要求1-13中任一项所述的重组多肽。
17.根据权利要求16所述的药物组合物或试剂盒，其中所述药物组合物或试剂盒包含至少两种不同的根据权利要求1-13中任一项所述的重组多肽，并且其中每种不同的多肽包含不同的如权利要求3中定义的肽抗原。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的药物组合物或试剂盒，其用于治疗人类患者的视神经脊髓炎的用途。
19.根据权利要求18的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是通过免疫疗法进行治疗，并且其中所述治疗优选是通过诱导针对人水通道蛋白4的免疫耐受进行治疗。
20.根据权利要求18-19中任一项的用于所述用途的治疗的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗用于降低血浆或脑脊液中抗人水通道蛋白4的自身抗体的水平，并且其中所述人类患者是在治疗开始前具有血浆或脑脊液中抗人水通道蛋白4的自身抗体的患者。
21.根据权利要求18-20中任一项的用于所述用途的药物组合物或试剂盒，其中所述治疗是通过诱导髓鞘特异性调节性T细胞进行。
22.一种重组宿主细胞，包含根据权利要求14所述的核酸或载体，并表达根据权利要求1-13中任一项所述的重组多肽。
23.一种获得包含根据权利要求1-13中任一项所述的多肽的药物组合物的方法，该方法包括以下步骤：(a)在允许从核酸分子表达重组多肽的条件下培养根据权利要求22所述的重组宿主细胞，(b)回收重...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种能够呈递肽抗原的重组多肽，所述重组多肽按n端至c端顺序包含：
2.根据权利要求1所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原的长度为7至11个氨基酸，优选8-10个氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的重组多肽，其中根据i)的所述肽抗原由选自如下组中的氨基酸序列组成，所述组由seq id no:2、22、23和24的氨基酸序列组成。
4.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(v)的所述α1结构域和根据(vi)的所述α2结构域来自人类mhc ia类分子，优选人类hla-a2分子，或来自人类mhc ib类分子，优选人类hla-g分子。
5.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的mhc ib类分子的α3结构域是人类hla-e、人类hla-f或人类hla-g的α3结构域，优选人类hla-g。
6.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(vii)的α3结构域或衍生物与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同或与具有氨基酸序列seqid no:9或seq id no:21的α3结构域具有至少80％氨基酸序列同一性、至少90％氨基酸序列同一性、至少92％氨基酸序列同一性、至少94％氨基酸序列同一性、至少96％氨基酸序列同一性、至少98％氨基酸序列同一性、或至少99％氨基酸序列同一性，或者与具有氨基酸序列seq id no:9或seq id no:21的α3结构域相同。
7.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(ii)的接头序列和/或根据(iv)的接头序列包含氨基酸序列(ggggs)n，其中n是等于或大于1的整数，并且其中n是选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组中的整数，并且优选选自由2、3、4和5组成的组中。
8.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中根据(iii)的人多肽结构域的所述序列与seq id no:5的氨基酸序列至少95％相同，优选与seq id no:5的氨基酸序列至少98％相同，更优选与seq id no:5的氨基酸序列相同。
9.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽是二聚体或多聚体。
10.根据上述权利要求中任一项所述的重组多肽，其中所述多肽包含或由...
【专利技术属性】
技术研发人员：瓦伦汀·布鲁塔尔，乔戈·维施胡森，施瑞娅·玛玛萨·贾亚拉姆，法德赫·阿赫桑，
申请(专利权)人：尤利乌斯·马克西米利安维尔茨堡大学，
类型：发明
国别省市：
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