【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体地，本专利技术涉及过表达hspa13基因的mz b细胞及其应用。
技术介绍
1、系统性红斑狼疮(sle)是一种以依赖于t细胞的b淋巴细胞功能亢进为特征，产生多种自身抗体并形成免疫复合物，导致多系统损害的自身免疫性疾病。本病由于发病机制认识尚不明确，至今尚难根治，部分患者即使在经历稳定的维持治疗后，病情仍可能恶化，预后较差。肾脏损害是影响系统性红斑狼疮预后的重要因素，由狼疮肾所致的终末期肾衰是sle患者的主要死亡原因之一。而狼疮性肾炎是中国最常见的继发性肾小球肾炎。患者可表现为大量蛋白尿，血肌酐的升高，血尿等相应肾炎或肾病综合征表现。目前最常用的狼疮性肾炎分类方法就是who分类方案，包括系膜性、局部增殖性，膜性肾病，弥漫增殖性肾病，前三者在狼疮性肾炎患者中的发生率大约各为15％，后者为50％，还有一小部分病例表现为硬化性肾病。文献研究显示，狼疮肾病人死亡以确诊后2年内死亡居多，3年以后的生存曲线则较为平坦，其1年，5年，10年总体生存率分别为88.3％，74.5％及60.2％。而高血压是影响狼疮肾患者存活率的关键因素。可见狼疮肾患者的平均生存年限低于sle患者的平均生存时间。如今通过激素、免疫抑制剂、环磷酰胺冲击治疗、透析、肾移植、血浆置换等肾脏替代治疗手段的不断成熟，合理用药，积极改善肾脏病变，逐步提高狼疮肾患者的预后生存。
2、hspa13基因是热休克蛋白家族a(hsp70)的成员13，其编码热休克蛋白70家族的一员，与微粒体相关；参与细胞溶质和分泌蛋白的加工，以及去除变性或错误折叠
技术实现思路
1、为弥补现有技术的不足，本方面的目的在于提供一种过表达hspa13基因的mz b细胞及其应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面提供过表达hspa13基因的mz b细胞在调控cd4+t细胞向调节性t细胞分化中的应用。
4、进一步，所述过表达hspa13基因的mz b细胞具有促进cd4+t细胞分化为调节性t细胞的作用。
5、进一步，所述过表达hspa13基因的mz b细胞具有促进cd4+t细胞分化为调节性t细胞的作用是通过下述方法验证的：将过表达hspa13基因的mz b细胞与cd4+t细胞按照1：1的比例共培养；培养结束后，收集细胞，进行流式染色，分析调节性t细胞的比例。
6、进一步，所述过表达hspa13基因的mz b细胞的构建方法包括：使用lps、pma和lonomycin刺激mz b细胞。
7、进一步，所述mz b细胞加入lps刺激后培养72h，在培养72h结束前的最后5h加入pma和lonomycin。
8、进一步，所述mz b细胞刺激前调整细胞悬液密度为1×106个/ml。
9、进一步，所述lps、pma和lonomycin浓度分别为10ug/ml、50ng/ml、1ug/ml。
10、进一步，所述mz b细胞的培养基包括mem培养基、dmem培养基、rpmi-1640培养基。
11、优选地，所述mz b细胞的培养基为rpmi-1640培养基。
12、在一些实施例中，所述mz b细胞是定位于脾脏红、白髓交界处的边缘带的b细胞亚群，大约占人体外周b细胞的20％，是血源性病原体感染的第一道防线。mz b细胞具有非t细胞依赖性，能够不依赖于t细胞而独立产生体液免疫应答，这种特性使得它们在早期感染阶段尤为重要。此外，mz b细胞能够迅速分化为浆细胞，分泌igm抗体，这些抗体对于中和多种病原体具有关键作用。除了直接产生抗体外，mz b细胞还能够通过抗原呈递作用激活t细胞，从而进一步增强免疫反应。近年来的研究发现，mz b细胞还具有“窃取”树突状细胞功能的能力，通过胞啃作用获取树突状细胞的mhc分子，进而与t细胞沟通，触发免疫反应。
13、在一些实施例中，所述lps是指脂多糖，其是一种内毒素，主要由革兰氏阴性菌的细胞壁组成，在免疫学研究中，lps常被用作刺激剂，以激活免疫细胞并诱导它们产生炎症反应。
14、在一些实施例中，所述pma是指佛波酯，其是一种有机化合物，具有促癌性，并能激活蛋白激酶c(pkc)；在细胞生物学研究中，pma常被用作刺激剂，以激活多种细胞类型，包括t细胞和b细胞；pma能够模拟细胞内的信号转导过程，从而研究细胞激活和增殖的机制。
15、在一些实施例中，所述lonomycin是指离子霉素，其是一种钙离子载体，能够增加细胞内钙离子的浓度；在免疫学研究中，lonomycin常被用作刺激剂，与pma联合使用，以激活t细胞并诱导它们产生细胞因子。
16、在本专利技术的具体实施例中，使用lps+pma+lonomycin刺激mz b细胞，能够使mz b细胞中hspa13基因的表达水平升高，从而构建过表达hspa13基因的mz b细胞。
17、在一些实施例中，mz b细胞培养基包括但不限于mem培养基、dmem培养基、rpmi-1640培养基。mem培养基适用于多种单层生长的细胞，dmem培养基适用于高密度悬浮细胞培养，rpmi-1640培养基广泛应用于悬浮细胞的培养。在本专利技术的具体实施例中，选用rpmi-1640培养基培养mz b细胞。
18、在一些实施例中，cd4+t细胞是外周淋巴组织中的初始t细胞在受到抗原攻击后分化产生的一种效应t细胞，主要参与细胞免疫。在机体的免疫反应中，原始cd4+t细胞可以被抗原-mhc复合物激活，并分化成多种特定的亚型，包括调节性t细胞(treg)。这些细胞亚群在机体的免疫应答和免疫调控中发挥着不同的作用。
19、所述调节性t细胞(treg)是一类具有免疫抑制功能的t细胞亚群，其主要作用是通过抑制过度的免疫应答来维持免疫稳态。其中，诱导调节性t细胞(itreg)正是由外周cd4+t细胞分化而来，它们能够抑制抗原特异性t细胞、b细胞以及抗原提呈细胞(apc)的功能，从而调节免疫应答。itreg细胞表面标志物为cd4、cd25，并主要表达抑制性细胞因子如il-10和tgf-β，通过分泌这些细胞因子来发挥免疫抑制作用。
20、在本专利技术的具体实施例中，通过实验证明经lps+pma+lonomycin刺激的mz b细胞，即过表达hspa13基因的mz b细胞与cd4+t细胞共培养，能够显著增加调节性t细胞的比例，证明了过表达hspa13基因的mz b细胞具有促进cd4+t细胞分化为调节性t细胞的作用。
21、在本专利技术中，所述mz b细胞从cd19crehspa13fl/fl小鼠或hspa13fl/fl小鼠的脾淋巴细胞中获得。所述hspa13fl/fl小鼠是在靶基因hspa13的两侧插入了lox本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.过表达Hspa13基因的MZ B细胞在调控CD4+T细胞向调节性T细胞分化中的应用，其特征在于，所述过表达Hspa13基因的MZ B细胞具有促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的作用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达Hspa13基因的MZ B细胞具有促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的作用是通过下述方法验证的：将过表达Hspa13基因的MZB细胞与CD4+T细胞按照1：1的比例共培养；培养结束后，收集细胞，进行流式染色，分析调节性T细胞的比例。
3.过表达Hspa13基因的MZ B细胞在预防和/或治疗系统性红斑狼疮或系统性红斑狼疮相关疾病中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述系统性红斑狼疮相关疾病包括皮肤炎、贫血、狼疮性肾炎、心脏疾病、肺炎、神经及精神疾病；
5.根据权利要求1或权利要求3所述的应用，其特征在于，所述过表达Hspa13基因的MZB细胞的构建方法包括：使用LPS、PMA和lonomycin刺激MZ B细胞；
6.一种预防和/或治疗系统性红斑狼疮或系统性红斑狼疮
7.过表达Hspa13基因的MZ B细胞或权利要求6所述的细胞治疗组合物在制备用于治疗系统性红斑狼疮或系统性红斑狼疮相关疾病的药剂或在制备体外促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的试剂中的应用；
8.根据权利要求6所述的细胞治疗组合物或权利要求7所述的应用，其特征在于，所述过表达Hspa13基因的MZ B细胞的构建方法包括：使用LPS、PMA和lonomycin刺激MZ B细胞；
9.一种体外非治疗目的地促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：将过表达Hspa13基因的MZ B细胞与CD4+T细胞共培养。
10.促进Hspa13的试剂在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮或系统性红斑狼疮相关疾病的药物中的应用；
...【技术特征摘要】
1.过表达hspa13基因的mz b细胞在调控cd4+t细胞向调节性t细胞分化中的应用，其特征在于，所述过表达hspa13基因的mz b细胞具有促进cd4+t细胞分化为调节性t细胞的作用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述过表达hspa13基因的mz b细胞具有促进cd4+t细胞分化为调节性t细胞的作用是通过下述方法验证的：将过表达hspa13基因的mzb细胞与cd4+t细胞按照1：1的比例共培养；培养结束后，收集细胞，进行流式染色，分析调节性t细胞的比例。
3.过表达hspa13基因的mz b细胞在预防和/或治疗系统性红斑狼疮或系统性红斑狼疮相关疾病中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述系统性红斑狼疮相关疾病包括皮肤炎、贫血、狼疮性肾炎、心脏疾病、肺炎、神经及精神疾病；
5.根据权利要求1或权利要求3所述的应用，其特征在于，所述过表达hspa13基因的mzb细胞的构建方法包括：使用lps、pma和l...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢陈，宋伦，王仁喜，黄欣，崔皓然，刘琨，文青，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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