【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本文提供了具有一个或多个遗传编辑的细胞表面蛋白基因的遗传工程化的造血细胞(诸如造血干细胞)，其可与免疫疗法(即细胞毒性剂，诸如嵌合抗原受体t细胞)组合使用，及其治疗用途。
技术介绍
1、基因转移技术的创新使得重新编程免疫细胞以靶向癌细胞上表达的分子成为可能。极其有希望的结果促使fda批准了用于治疗b淋巴母细胞白血病的首个过继性细胞免疫疗法，称为cd19 car-t细胞。尽管这些成功有望彻底改变肿瘤学领域，但它们的应用受到了阻碍，因为大多数适合的候选者通常与健康的骨髓细胞共享，从而导致免疫抑制和严重的造血毒性。抗髓系/干细胞car-t诱导的毒性限制了它们在hsct之前有限时间窗口内对挽救疗法的适用性，这可能不足以根除疾病。因此，有效靶向感兴趣的细胞(例如癌细胞)而不靶向或伤害正常细胞群仍是一个尚未满足的需求。
技术实现思路
1、本公开一般涉及具有一个或多个遗传编辑的细胞表面蛋白基因的遗传工程化的造血细胞诸如造血干细胞，以及能够靶向相同细胞表面蛋白的嵌合抗原受体。
2、在一个实施方案中，提供了一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)，其包含遗传工程化的flt3基因，其中遗传工程化的flt3基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗flt3抗体的结合降低。在一个实施方案中，遗传工程化的flt3基因包含flt3基因的外显子9中的至少一个突变。在一个实施方案中，遗传工程化的flt3基因的外显子9中的至少一个突变导致在位置n399处带有突变的多肽。在一个实施方案中，在位置n399处的突
3、在一个实施方案中，还提供了一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)，其包含遗传工程化的cd123基因，其中遗传工程化的cd123基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗cd123抗体的结合降低。在一个实施方案中，治疗抗cd123抗体是克隆7g3抗体或其人源化对应物csl362。在一个实施方案中，遗传工程化的cd123基因包含cd123基因的外显子2中的至少一个突变。在一个实施方案中，遗传工程化的cd123基因的外显子2中的至少一个突变导致在位置s59处带有突变的多肽。在一个实施方案中，在s59处的突变是s59p或s59f。在一个实施方案中，治疗抗cd123抗体是抗cd123克隆6h6抗体或抗cd123克隆s18016f抗体。在一个实施方案中，遗传工程化的cd123基因包含cd123基因的外显子3中的至少一个突变。在一个实施方案中，遗传工程化的cd123基因的外显子3中的至少一个突变导致在位置p88处带有突变的多肽。在一个实施方案中，在p88处的突变是p88l或p88s。在一个实施方案中，遗传工程化的hspc是使用包含引导核酸和核酸酶的crispr系统进行遗传工程化的。在一个实施方案中，引导核酸选自由seq id no：24、seq id no：27、seq id no：30、seq id no：32、seqid no：33和seq id no：34组成的组。在一个实施方案中，核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的spcas9。在一个实施方案中，碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。在一个实施方案中，碱基编辑器酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。在一个实施方案中，催化受损的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一个实施方案中，催化受损的spcas9包含在位置d10a处的突变。在一个实施方案中，催化受损的spcas9还包含在位置k918n处的突变。在一个实施方案中，遗传工程化的cd123基因编码包含氨基酸序列seq id no：54、seq id no：55、seq idno：56、seq id no：57或seq id no：58的多肽。本文还提供了遗传工程化的造血干细胞(hspc)群，其包含如上所述的遗传工程化的hspc。还提供了一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：(a)如上所述的遗传工程化的造血干细胞群，和(b)治疗有效量的包含有抗cd123抗体结合结构域或包含抗cd1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种遗传工程化的造血干细胞(HSPC)，其包含遗传工程化的FLT3基因，其中所述遗传工程化的FLT3基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗FLT3抗体的结合降低。
2.如权利要求1所述的遗传工程化的HSPC，其中所述遗传工程化的FLT3基因包含所述FLT3基因的外显子9中的至少一个突变。
3.如权利要求2所述的遗传工程化的HSPC，其中所述遗传工程化的FLT3基因的外显子9中的至少一个突变导致在位置N399处带有突变的多肽。
4.如权利要求3所述的遗传工程化的HSPC，其中在N399位置处的所述突变是N399D或N399G。
5.如权利要求1所述的遗传工程化的HSPC，其中所述治疗抗FLT3抗体是抗FLT3克隆4G8抗体。
6.如权利要求1所述的遗传工程化的HSPC，其中所述治疗抗FLT3抗体是具有与4G8抗体相同的六个CDR或与4G8抗体竞争的抗体。
7.如权利要求1所述的遗传工程化的HSPC，其中所述遗传工程化的HSPC是使用包含引导核酸和核酸酶的CRISPR系统进行遗传工程化的。
8.
9.如权利要求8所述的遗传工程化的HSPC，其中所述CRISPR系统包含SpCas9。
10.如权利要求8或权利要求9所述的遗传工程化的HSPC，其中所述引导核酸选自由SEQID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16组成的组。
11.如权利要求10所述的遗传工程化的HSPC，其中CRISPR系统还包含模板DNA。
12.如权利要求11所述的遗传工程化的HSPC，其中所述模板DNA选自由SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：43组成的组。
13.如权利要求7所述的遗传工程化的HSPC，其中所述核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的SpCas9。
14.如权利要求13所述的遗传工程化的HSPC，其中所述碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。
15.如权利要求14所述的遗传工程化的HSPC，其中所述核苷酸脱氨酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。
16.如权利要求13所述的遗传工程化的HSPC，其中所述催化受损的SpCas9是NG-SpCas9或SpRY-SpCas9。
17.如权利要求13-16中任一项所述的遗传工程化的HSPC，其中所述催化受损的SpCas9包含在位置D10A处的突变。
18.如权利要求17所述的遗传工程化的HSPC，其中所述催化受损的SpCas9还包含在位置K918N处的突变。
19.如权利要求13-18中任一项所述的遗传工程化的HSPC，其中所述引导RNA选自由SEQID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：23组成的组。
20.如权利要求1所述的遗传工程化的HSPC，其中所述遗传工程化的FLT3基因编码包含氨基酸序列SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：52的多肽。
21.一种遗传工程化的造血干细胞(HSPC)群，其包含如权利要求1-20中任一项所述的遗传工程化的HSPC。
22.一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：
23.如权利要求22所述的方法，其中所述至少一种剂包含有包含所述抗FLT3抗体结合结构域的嵌合抗原受体-T(CAR-T)细胞。
24.如权利要求22所述的方法，其中所述造血系统恶性肿瘤是B淋巴母细胞白血病(BLL)、急性髓系白血病(AML)或T细胞急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)。
25.如权利要求22所述的方法，所述方法还包括从来自所述人受试者的生物样品中获得HSPC，并且对来自所述人受试者的所述生物样品中的所述HSPC进行遗传工程化，从而形成所述遗传工程化的HSPC群。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述生物样品是骨髓细胞、血液、脐带血细胞、或动员的外周血衍生的CD34+造血干细胞和祖细胞。
27.一种遗传工程化的造血干细胞(HSPC)，其包含遗传工程化的CD123基因，其中所述遗传工程化的CD123基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗CD123抗体的结合降低...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)，其包含遗传工程化的flt3基因，其中所述遗传工程化的flt3基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗flt3抗体的结合降低。
2.如权利要求1所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的flt3基因包含所述flt3基因的外显子9中的至少一个突变。
3.如权利要求2所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的flt3基因的外显子9中的至少一个突变导致在位置n399处带有突变的多肽。
4.如权利要求3所述的遗传工程化的hspc，其中在n399位置处的所述突变是n399d或n399g。
5.如权利要求1所述的遗传工程化的hspc，其中所述治疗抗flt3抗体是抗flt3克隆4g8抗体。
6.如权利要求1所述的遗传工程化的hspc，其中所述治疗抗flt3抗体是具有与4g8抗体相同的六个cdr或与4g8抗体竞争的抗体。
7.如权利要求1所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的hspc是使用包含引导核酸和核酸酶的crispr系统进行遗传工程化的。
8.如权利要求7所述的遗传工程化的hspc，其中所述核酸酶是化脓性链球菌cas9(spcas9)、金黄色葡萄球菌(sacas9)、毛螺菌科细菌cas12a(lbcas12a)或氨基酸球菌属某种bv3l6(ascas12a)。
9.如权利要求8所述的遗传工程化的hspc，其中所述crispr系统包含spcas9。
10.如权利要求8或权利要求9所述的遗传工程化的hspc，其中所述引导核酸选自由seqid no：13、seq id no：14、seq id no：15和seq id no：16组成的组。
11.如权利要求10所述的遗传工程化的hspc，其中crispr系统还包含模板dna。
12.如权利要求11所述的遗传工程化的hspc，其中所述模板dna选自由seq id no：40、seq id no：41、seq id no：42和seq id no：43组成的组。
13.如权利要求7所述的遗传工程化的hspc，其中所述核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的spcas9。
14.如权利要求13所述的遗传工程化的hspc，其中所述碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。
15.如权利要求14所述的遗传工程化的hspc，其中所述核苷酸脱氨酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。
16.如权利要求13所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。
17.如权利要求13-16中任一项所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9包含在位置d10a处的突变。
18.如权利要求17所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9还包含在位置k918n处的突变。
19.如权利要求13-18中任一项所述的遗传工程化的hspc，其中所述引导rna选自由seqid no：17、seq id no：18、seq id no：19、seq id no：20和seq id no：23组成的组。
20.如权利要求1所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的flt3基因编码包含氨基酸序列seq id no：51或seq id no：52的多肽。
21.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)群，其包含如权利要求1-20中任一项所述的遗传工程化的hspc。
22.一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：
23.如权利要求22所述的方法，其中所述至少一种剂包含有包含所述抗flt3抗体结合结构域的嵌合抗原受体-t(car-t)细胞。
24.如权利要求22所述的方法，其中所述造血系统恶性肿瘤是b淋巴母细胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)或t细胞急性淋巴母细胞白血病(t-all)。
25.如权利要求22所述的方法，所述方法还包括从来自所述人受试者的生物样品中获得hspc，并且对来自所述人受试者的所述生物样品中的所述hspc进行遗传工程化，从而形成所述遗传工程化的hspc群。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述生物样品是骨髓细胞、血液、脐带血细胞、或动员的外周血衍生的cd34+造血干细胞和祖细胞。
27.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)，其包含遗传工程化的cd123基因，其中所述遗传工程化的cd123基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗cd123抗体的结合降低。
28.如权利要求27所述的遗传工程化的hspc，其中所述治疗抗cd123抗体是克隆7g3抗体或其人源化对应物csl362。
29.如权利要求28所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的cd123基因包含所述cd123基因的外显子2中的至少一个突变。
30.如权利要求29所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的cd123基因的外显子2中的至少一个突变导致在位置s59处带有突变的多肽。
31.如权利要求30所述的遗传工程化的hspc，其中在s59处的所述突变是s59p或s59f。
32.如权利要求27所述的遗传工程化的hspc，其中所述治疗抗cd123抗体是抗cd123克隆6h6抗体或抗cd123克隆s18016f抗体。
33.如权利要求32所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的cd123基因包含所述cd123基因的外显子3中的至少一个突变。
34.如权利要求32所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的cd123基因的外显子3中的至少一个突变导致在位置p88处带有突变的多肽。
35.如权利要求34所述的遗传工程化的hspc，其中在p88处的所述突变是p88l或p88s。
36.如权利要求31所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的hspc是使用包含引导核酸和核酸酶的crispr系统进行遗传工程化的。
37.如权利要求36所述的遗传工程化的hspc，其中所述引导核酸选自由seq id no：24、seq id no：27、seq id no：30、seq id no：32、seq id no：33和seq id no：34组成的组。
38.如权利要求35所述的遗传工程化的hspc，其中所述核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的spcas9。
39.如权利要求38所述的遗传工程化的hspc，其中所述碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。
40.如权利要求38所述的遗传工程化的hspc，其中所述碱基编辑器酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。
41.如权利要求38所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。
42.如权利要求37-41中任一项所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9包含在位置d10a处的突变。
43.如权利要求42所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9还包含在位置k918n处的突变。
44.如权利要求27所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的cd123基因编码包含氨基酸序列seq id no：54、seq id no：55、seq id no：56、seq id no：57或seq id no：58的多肽。
45.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)群，其包含如权利要求27-44中任一项所述的遗传工程化的hspc。
46.一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：
47.如权利要求46所述的方法，其中所述至少一种剂包含有包含所述抗cd123抗体结合结构域的嵌合抗原受体-t(car-t)细胞。
48.如权利要求46所述的方法，其中所述造血系统恶性肿瘤是b淋巴母细胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t细胞急性淋巴母细胞白血病(t-all)或母细胞性浆细胞样树突状细胞白血病(bpcdn)。
49.如权利要求46所述的方法，所述方法还包括从来自所述人受试者的生物样品中获得hspc，并且对来自所述人受试者的所述生物样品中的所述hspc进行遗传工程化，从而形成所述遗传工程化的hspc群。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述生物样品是骨髓细胞、血液、脐带血细胞、或动员的外周血衍生的cd34+造血干细胞和祖细胞。
51.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)群，其包含：
52.如权利要求51所述的hspc群，其中所述遗传工程化的flt3基因包含所述flt3基因的外显子9中的至少一个突变。
53.如权利要求52所述的hspc群，其中所述遗传工程化的flt3基因的外显子9中的至少一个突变导致在位置n399处带有突变的多肽。
54.如权利要求51所述的hspc群，其中所述遗传工程化的cd123基因包含所述cd123基因的外显子2中的至少一个突变。
55.如权利要求54所述的hspc群，其中所述遗传工程化的cd123基因的外显子2中的至少一个突变导致在位置s59处带有突变的多肽。
56.如权利要求51所述的hspc群，其中所述治疗抗flt3抗体是抗flt3克隆4g8抗体。
57.如权利要求51所述的hspc群，其中所述治疗抗cd123抗体是抗cd123克隆7g3抗体或csl362抗体。
58.如权利要求51所述的hspc群，其中所述hspc群是使用包含至少两种引导核酸和一种核酸酶的crispr系统进行遗传工程化的。
59.如权利要求58所述的hspc群，其中所述至少两种引导核酸是1)seq id no：18或seqid no：20和2)seq id no：24或seq id no：27。
60.如权利要求59所述的hspc群，其中所述至少两种引导核酸是seq id no：20和seqid no：27。
61.如权利要求58所述的hspc群，其中所述核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的spcas9。
62.如权利要求61所述的hspc群，其中所述碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。
63.如权利要求61所述的hspc群，其中所述碱基编辑器酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。
64.如权利要求61所述的hspc群，其中所述催化受损的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。
65.如权利要求61至64中任一项所述的hspc群，其中所述催化受损的spcas9包含在位置d10a处的突变。
66.如权利要求65所述的hspc群，其中所述spcas9还包含在位置k918n处的突变。
67.一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：
68.如权利要求67所述的方法，其中所述至少一种剂包含有包含所述抗flt3抗体结合结构域和/或所述抗cd123抗体结合结构域的嵌合抗原受体-t(car-t)细胞。
69.如权利要求67所述的方法，其中所述造血系统恶性肿瘤是b淋巴母细胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t细胞急性淋巴母细胞白血病(t-all)或母细胞性浆细胞样树突状细胞白血病(bpcdn)。
70.如权利要求67所述的方法，所述方法还包括从来自所述人受试者的生物样品中获得hspc，并且对来自所述人受试者的所述生物样品中的所述hspc进行遗传工程化，从而形成所述遗传工程化的hspc群。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述生物样品是骨髓细胞、血液、脐带血细胞、或动员的外周血衍生的cd34+造血干细胞和祖细胞。
72.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)，其包含遗传工程化的kit基因，其中所述遗传工程化的kit基因被工程化使得其经编码的蛋白质与治疗抗kit抗体的结合降低。
73.如权利要求72所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的kit基因包含所述kit基因的外显子7中的至少一个突变。
74.如权利要求73所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的kit基因的外显子7中的至少一个突变导致在位置h378处带有突变的多肽。
75.如权利要求74所述的遗传工程化的hspc，其中在位置h378处的所述突变是h378r。
76.如权利要求72所述的遗传工程化的hspc，其中所述治疗抗kit抗体是抗kit克隆fab79d抗体。
77.如权利要求72所述的遗传工程化的hspc，其中所述遗传工程化的hspc是使用包含引导核酸和核酸酶的crispr系统进行遗传工程化的。
78.如权利要求72所述的遗传工程化的hspc，其中所述引导核酸选自由seq id no：36、seq id no：37、seq id no：38和seq id no：39组成的组。
79.如权利要求77所述的遗传工程化的hspc，其中所述核酸酶是与碱基编辑器酶连接的催化受损的spcas9。
80.如权利要求79所述的遗传工程化的hspc，其中所述碱基编辑器酶是核苷酸脱氨酶。
81.如权利要求79所述的遗传工程化的hspc，其中所述碱基编辑器酶是胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶。
82.如权利要求79所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。
83.如权利要求79-82中任一项所述的遗传工程化的hspc，其中所述催化受损的spcas9包含在位置d10a处的突变。
84.如权利要求83所述的遗传工程化的hspc，其中所述spcas9还包含在位置k918n处的突变。
85.一种遗传工程化的造血干细胞(hspc)群，其包含如权利要求72-84中任一项所述的遗传工程化的hspc。
86.一种治疗造血系统恶性肿瘤的方法，所述方法包括向人受试者施用：
87.如权利要求86所述的方法，其中所述至少一种剂包含有包含所述抗kit抗体结合结构域的嵌合抗原受体-t(car-t)细胞。
88.如权利要求86所述的方法，其中所述造血系统恶性肿瘤是b淋巴母细胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)或t急性淋巴母细胞白血病(t-all)。
89.如权利要求86所述的方法，所述方法还包括从来自所述人受试者的生物样品中获得hspc，并且对来自所述人受试者的所述生物样品中的所述hspc进行遗传工程化，从而形成所述遗传工程化的hspc群。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述生物样品是骨髓细胞、血液、脐带血细胞、或动员的外周血衍生的cd34...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·杰诺韦塞，G·卡西拉蒂，
申请(专利权)人：丹娜法伯癌症研究院，
类型：发明
国别省市：
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