【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程领域，涉及一个不结球白菜转录因子bcspl15基因及其应用，具体涉及从不结球白菜中克隆得到一个转录因子bcspl15基因，在不结球白菜中沉默该基因，获得的沉默植株开花时间显著推迟。
技术介绍
1、开花是植物生长发育过程中一个重要的过渡阶段，对繁育后代至关重要。开花就是对茎尖分生组织sam中经过整合的各种内部和外界信号的一种响应，比如，拟南芥ft蛋白在叶片中表达并被转运至sam从而诱导开花。一系列调控开花时间的基因相互作用形成一个复杂的调控网络。年龄途径调控的开花主要是由mir156及其靶基因spl转录因子协同调控的。spl属于植物特异性转录因子sbp家族，具有高保守的sbp-box结构域，由大约80个氨基酸残基、2个锌指结构和1个核定位的信号组成。在金鱼草中首次发现的spl家族成员是与ap1基因同源的sbp1和sbp2，可以结合mads-box基因的启动子来调控开花。spl家族基因广泛分布于裸子植物和被子植物中。spl在调节植物开花和响应环境胁迫等方面都发挥着作用。拟南芥中有spl2、spl9、spl10、spl11、spl13和spl15可以直接调控ap1、lfy、ful和soc1来调控开花。
2、不结球白菜属于十字花科芸薹属，是一种起源于中国的重要经济作物。由于不结球白菜口味清甜、营养价值高，目前已经逐渐成为最受欢迎的蔬菜之一。拟南芥中spl15基因功能已有研究，但不结球白菜中spl15基因的作用还不清楚。因此，对不结球白菜中spl15基因的功能研究，特别是在不结球白菜花期调控方面，需要
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供不结球白菜(brassica campestris ssp.chinensis makino)转录因子bcspl15基因及其应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、第一方面，本专利技术请求保护一种不结球白菜转录因子bcspl15基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
4、第二方面，本专利技术请求保护上述不结球白菜转录因子bcspl15基因编码的蛋白，其氨基酸序列如seq id no.2所示。
5、第三方面，本专利技术请求保护用于扩增前述不结球白菜转录因子bcspl15基因cdna的引物对，该引物对的正向引物序列如seq id no.3所示，反向引物序列如seq id no.4所示。
6、第四方面，本专利技术请求保护与上述不结球白菜转录因子bcspl15基因相关的生物材料，该生物材料为如下(a1)或(a2)所述的生物材料：
7、(a1)含有权利要求1所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的表达盒、重组载体或重组菌；
8、(a2)用于沉默、干扰或抑制所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的生物材料。
9、进一步，(a2)中所述用于沉默、干扰或抑制所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的生物材料为如下(b1)～(b4)中的至少一种：
10、(b1)所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的干扰片段或沉默片段；
11、(b2)用于扩增(b1)所述不结球白菜转录因子bcspl15基因干扰片段或沉默片段的引物；
12、(b3)所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的干扰表达载体或沉默载体；
13、(b4)含有如(b3)所述干扰表达载体或沉默载体的重组微生物。
14、更进一步，(b1)中所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的沉默片段为特异的发夹结构，该发夹结构的核苷酸序列如seq id no.5所示。
15、第五方面，本专利技术请求保护上述的不结球白菜转录因子bcspl15基因，上述的蛋白、上述的引物对或上述的生物材料在如下(c1)或(c2)中的应用：
16、(c1)调控植物开花时间；
17、(c2)培育开花时间改变的植物新种质。
18、上述的应用具体为推迟植物开花时间或培育开花时间推迟的植物新种质；或者促进植物开花时间的提前或培育开花时间提前的植物新种质。
19、进一步，通过在目标植物中沉默或抑制所述转录因子bcspl15基因的表达或降低所述转录因子bcspl15基因编码蛋白的水平推迟植物的开花时间或培育开花时间推迟的植物新种质；或者通过在目标植物中上调所述转录因子bcspl15基因的表达或上调所述转录因子bcspl15基因编码蛋白的水平促进植物开花时间的提前或培育开花时间提前的植物新种质。
20、第六方面，本专利技术请求保护一种调控植物开花时间或培育开花时间改变的植物新种质的方法，通过在目标植物中沉默或抑制所述转录因子bcspl15基因的表达或降低所述转录因子bcspl15基因编码蛋白的水平推迟植物的开花时间，或筛选培育开花时间推迟的植物新种质；或者通过在目标植物中上调所述转录因子bcspl15基因的表达或上调所述转录因子bcspl15基因编码蛋白的水平促进植物开花时间的提前或培育开花时间提前的植物新种质。
21、本专利技术的具体实施方式中，上述应用或方法中的植物为不结球白菜或烟草。
22、本专利技术首次从不结球白菜中克隆到一个转录因子bcspl15基因，该基因的核苷酸序列如seq id no.1所示；编码的氨基酸序列如seq id no.2所示。
23、克隆bcspl15基因cdna序列的引物对，其核苷酸序列如下所示：
24、正向引物：5’-atggagttactaacgggttctggtc-3’(seq id no：3)；
25、反向引物：5’-aagagaccagttgaaatgctgagg-3’(seq id no：4)。
26、用于沉默本专利技术所述bcspl15基因的vigs沉默载体。
27、不结球白菜转录因子bcspl15基因特异的发夹结构的核苷酸序列如seq id no.5所示。bcspl15基因的发夹结构序列如下所示：
28、5’-atagggtaacaatggctcagacaccacccgtttcagtccatggactgaaacgggtggtgtctgagccattgttaccctat-3’(seq id no：5)。
29、本专利技术的具体实施方式中，所述不结球白菜转录因子bcspl15基因在推迟不结球白菜开花时间中的应用，具体包括以下步骤：
30、1)构建所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的沉默载体；
31、2)将所构建的载体转化到不结球白菜细胞中；
32、3)筛选培育得到开花时间推迟的不结球白菜新品种。
33、相比于现有技术，本专利技术的优点为：
34、本专利技术以不结球白菜‘五月慢’为材料，首次揭示不结球白菜转录因子bcspl15基因的生物学功能，通过构建bcspl15的vigs沉默载体，结合基因枪介导的转化法，研究沉默bcspl本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种不结球白菜转录因子BcSPL15基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述不结球白菜转录因子BcSPL15基因编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQID NO. 2所示。
3.用于扩增权利要求1所述不结球白菜转录因子BcSPL15基因cDNA的引物对，其特征在于，该引物对的正向引物序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物序列如SEQ ID NO.4所示。
4.与权利要求1所述不结球白菜转录因子BcSPL15基因相关的生物材料，其特征在于，该生物材料为如下（a1）或（a2）所述的生物材料：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，（a2）中所述用于沉默、干扰或抑制所述不结球白菜转录因子BcSPL15基因的生物材料为如下（b1）~（b4）中的至少一种：
6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于，（b1）中所述不结球白菜转录因子BcSPL15基因的沉默片段为特异的发夹结构，该发夹结构的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
7.权利要求1中所述的不结球白菜转录因子BcSPL
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，通过在目标植物中沉默或抑制所述转录因子BcSPL15基因的表达或降低所述转录因子BcSPL15基因编码蛋白的水平推迟植物的开花时间或培育开花时间推迟的植物新种质；
9.一种调控植物开花时间或培育开花时间改变的植物新种质的方法，其特征在于，通过在目标植物中沉默或抑制权利要求1所述转录因子BcSPL15基因的表达或降低所述转录因子BcSPL15基因编码蛋白的水平推迟植物的开花时间，或筛选培育开花时间推迟的植物新种质；
10.权利要求7或8所述的应用，权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的植物为不结球白菜或烟草。
...【技术特征摘要】
1.一种不结球白菜转录因子bcspl15基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.权利要求1所述不结球白菜转录因子bcspl15基因编码的蛋白，其氨基酸序列如seqid no. 2所示。
3.用于扩增权利要求1所述不结球白菜转录因子bcspl15基因cdna的引物对，其特征在于，该引物对的正向引物序列如seq id no.3所示，反向引物序列如seq id no.4所示。
4.与权利要求1所述不结球白菜转录因子bcspl15基因相关的生物材料，其特征在于，该生物材料为如下（a1）或（a2）所述的生物材料：
5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，（a2）中所述用于沉默、干扰或抑制所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的生物材料为如下（b1）~（b4）中的至少一种：
6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于，（b1）中所述不结球白菜转录因子bcspl15基因的沉默片...
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