【技术实现步骤摘要】
本申请涉及中药分析，特别涉及一种引物对、试剂盒和不同基原的百部中药原植物、药材或饮片的鉴别方法。
技术介绍
1、《中国药典》2020年版规定百部为百部科植物直立百部stemona sessilifolia（miq.）miq.、蔓生百部stemona japonica（bl.）miq.或对叶百部stemona tuberosa lour.的干燥块根。春、秋二季釆挖，除去须根，洗净，置沸水中略烫或蒸至无白心，取出，晒干。百部甘、苦，微温。归肺经。主治润肺下气止咳，杀虫灭虱。用于新久咳嗽，肺痨咳嗽，顿咳；外用于头虱，体虱，蛲虫病，阴痒。
2、据《中国药典》2020年版收载，百部属于多基原中药，不同品种、产地，其主要化学成分的种类和含量有一定的差异。此外，不同基原间外观性状相似，尤其加工成饮片后，单从外部形态学上难以区别，在销售过程中，极易造成基原混用，因此，准确鉴别不同基原的百部十分必要。
技术实现思路
1、基于此，本申请第一方面提供一种引物对，其技术方案如下：
2、一种引物对，包括序列如seq id no：1所示的上游引物和序列如seq id no：2所示下游引物。
3、本申请第二方面提供一种试剂盒，其技术方案如下：
4、一种试剂盒，包括如上所述的引物对。
5、可选地，所述试剂盒还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸（dntps）和dna聚合酶中的一种或多种。
6、可选地，所述pcr扩增缓
7、可选地，dna聚合酶选自ex taq。
8、可选地，所述pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸（dntps）和dna聚合酶的体积比为（2~3）：（1.5~2.5）：0.2。例如，所述pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸（dntps）和dna聚合酶的体积比为2：1.5：0.2、2.5：2：0.2、3：2.5：0.2。
9、本申请第三方面提供一种不同基原的百部中药原植物、药材或饮片的鉴别方法，其技术方案如下：
10、一种不同基原的百部中药原植物、药材或饮片的鉴别方法，包括以下步骤：
11、以待测样品的基因组dna为模板，采用权利要求1所述的引物对或权利要求2或3所述的试剂盒进行pcr扩增，对所得扩增产物进行检测，并根据所得检测结果鉴别百部中药原植物、药材或饮片的基原。
12、当待测样品为百部中药原植物，根据上述方法可鉴别百部中药原植物的基原。当待测样品为百部药材，根据上述方法可鉴别百部药材的基原。当待测样品为百部饮片，根据上述方法可鉴别百部饮片的基原。
13、其中，可鉴别的百部中药原植物的基原包括对叶百部、直立百部和蔓生百部。可鉴别的百部药材的基原包括对叶百部、直立百部和蔓生百部。可鉴别的百部饮片的基原包括对叶百部、直立百部和蔓生百部。
14、可选地，检测的方法包括荧光毛细管str分型法。短串联重复序列（short tandemrepeats，str）分型技术是一种利用pcr扩增长度差异进行分型，比较鉴别个体生物的dna分析技术，该技术是目前应用比较广泛的遗传标记，包括法医鉴定、基因定位、分子分型、遗传制图等等。本申请建立一种基于str分型的百部dna指纹图谱鉴别方法。
15、可选地，根据所得检测结果鉴别百部中药原植物、药材或饮片的基原，包括以下步骤：
16、若片段str分型迁移峰为371bp~373bp，则待测样品的基原为对叶百部；
17、若片段str分型迁移峰为374bp~376bp，则待测样品的基原为直立百部；
18、若片段str分型迁移峰为398bp~400bp，则待测样品的基原为蔓生百部。
19、其中，若片段str分型迁移峰为371bp、372bp、373bp，则待测样品的基原为对叶百部；若片段str分型迁移峰为374bp、375bp、376bp，则待测样品的基原为直立百部；若片段str分型迁移峰为398bp、399bp、400bp，则待测样品的基原为蔓生百部。
20、可选地，混合所述上游引物、下游引物、扩增试剂和待测样品的基因组dna，得到pcr扩增的初始反应体系；
21、按照扩增程序进行扩增。
22、可选地，pcr扩增的扩增程序包括：于93℃~97℃下预变性3min~7min，再循环扩增反应31~37次，再于70℃~74℃下延伸3min~7min；
23、所述循环扩增反应的程序包括：于93℃~97℃下变性25s~35s，再于50℃~58℃下退火25s~35s，再于70℃~74℃下延伸25s~35s。
24、其中，于93℃~97℃下预变性3min~7min。例如，于93℃、94℃、95℃、96℃、97℃下预变性3min、4min、5min、6min、7min。
25、循环扩增反应31~37次。例如，循环扩增反应31次、32次、33次、34次、35次、36次、37次。
26、所述循环扩增反应的程序包括：于93℃~97℃下变性25s~35s，再于50℃~58℃下退火25s~35s，再于70℃~74℃下延伸25s~35s。例如，所述循环扩增反应的程序包括：于93℃、94℃、95℃、96℃、97℃下变性25s、27s、29s、31s、33s、35s，再于50℃、52℃、54℃、56℃、58℃下退火25s、27s、29s、31s、33s、35s，再于70℃、71℃、72℃、73℃、74℃下延伸25s、27s、29s、31s、33s、35s。
27、循环扩增反应后，于70℃~74℃下延伸3min~7min。例如，循环扩增反应后，于70℃、71℃、72℃、73℃、74℃下延伸3min、4min、5min、6min、7min。
28、可选地，所述pcr扩增的初始反应体系中，所述上游引物的浓度为0.01μmol/l~0.2μmol/l。例如，所述上游引物的浓度为0.01μmol/l、0.05μmol/l、0.1μmol/l、0.2μmol/l。
29、可选地，所述pcr扩增的初始反应体系中，所述下游引物的浓度为0.01μmol/l~0.2μmol/l。例如，所述下游引物的浓度为0.01μmol/l、0.05μmol/l、0.1μmol/l、0.2μmol/l。
30、可选地，所述扩增试剂包括pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸和dna聚合酶中的一种或多种。
31、可选地，所述pcr扩增缓冲液选自10×buffer。
32、可选地，dna聚合酶选自ex taq。
33、可选地，所述pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸（dntps）和dna聚合酶的体积比为（2~3）：（1.5~2.5）：0.2。例如，所述pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸（dntps）和dna聚合酶的体积比为2：1.5：0.2、2.5：2：0.2、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种引物对，其特征在于，包括序列如SEQ ID NO：1所示的上游引物和序列如SEQ IDNO：2所示下游引物。
2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括PCR扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸和DNA聚合酶中的一种或多种。
4.一种不同基原的百部中药原植物、药材或饮片的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于，检测的方法包括荧光毛细管STR分型法。
6.根据权利要求5所述的鉴别方法，其特征在于，根据所得检测结果鉴别百部中药原植物、药材或饮片的基原，包括以下步骤：
7.根据权利要求4至6中任一项所述的鉴别方法，其特征在于，PCR扩增的扩增程序包括：于93℃~97℃下预变性3min~7min，再循环扩增反应31~37次，再于70℃~74℃下延伸3min~7min；
8.根据权利要求4至6中任一项所述的鉴别方法，其特征在于，所述PCR扩增的初始反应体系中，所述上
9.根据权利要求4至6中任一项所述的鉴别方法，其特征在于，所述PCR扩增的初始反应体系中，所述下游引物的浓度为0.01μmol/L~0.2μmol/L。
10.根据权利要求4至6中任一项所述的鉴别方法，其特征在于，所述扩增试剂包括PCR扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸和DNA聚合酶中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种引物对，其特征在于，包括序列如seq id no：1所示的上游引物和序列如seq idno：2所示下游引物。
2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括pcr扩增缓冲液、脱氧核苷三磷酸和dna聚合酶中的一种或多种。
4.一种不同基原的百部中药原植物、药材或饮片的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于，检测的方法包括荧光毛细管str分型法。
6.根据权利要求5所述的鉴别方法，其特征在于，根据所得检测结果鉴别百部中药原植物、药材或饮片的基原，包括以下步骤：
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【专利技术属性】
技术研发人员：谭斯尹，宋叶，田清清，段佳佳，刘燎原，施文婷，邝敏，张兰兰，孙冬梅，张军，周林，邓韬，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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